目的:探讨Krüppel样因子4（KLF4）在巨噬细胞炎症反应中的表达特点与作用及其对脓毒症小鼠炎症反应与脏器损伤的作用，为烧创伤脓毒症的靶向治疗奠定理论基础。方法:采用实验研究方法。取小鼠RAW264.7巨噬细胞与从10只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠中提取的原代腹腔巨噬细胞（PM）进行实验。采用内毒素/脂多糖（LPS）分别处理RAW264.7巨噬细胞与PM 0（未处理）、1、2、4、6、8、12、24 h构建巨噬细胞炎症反应模型，采用实时荧光定量反转录PCR（RT-PCR）法检测白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、CC趋化因子配体2（CCL2）与肿瘤坏死因子α（TNF-α）mRNA表达，据此确定后续部分实验LPS处理时间。用LPS处理RAW264.7巨噬细胞0、8 h，采用免疫荧光法检测KLF4的定位与蛋白表达；利用高通量测序技术平台对细胞进行转录组测序，采用DESeq2软件筛选2种处理时间细胞间的差异表达基因（DEG）。采用LPS分别处理RAW264.7巨噬细胞与PM 0、1、2、4、6、8、12、24 h，分别用实时荧光定量RT-PCR法与蛋白质印迹法检测KLF4的mRNA与蛋白表达。将RAW264.7巨噬细胞按随机数字表法分为阴性对照组与KLF4过表达组，分别转染对应质粒后用LPS处理0、8 h，采用实时荧光定量RT-PCR法检测KLF4、IL-1β、IL-6、CCL2与TNF-α的mRNA表达，采用蛋白质印迹法检测KLF4蛋白表达。前述实验样本数均为3。将40只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为KLF4过表达组和阴性对照组（每组20只），分别注射相应转染注射液后构建盲肠结扎穿孔脓毒症模型。采用随机数字表法从2组小鼠中各选取12只，观察建模后72 h内生存情况。于建模后8 h取2组分别剩余的8只小鼠，先行眼球取血，采用酶联免疫吸附测定法检测血清中IL-1β、IL-6水平，采用干化学法检测血清中丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平；后取心脏、肺脏、肝脏组织，行苏木精-伊红染色后观察损伤情况。对数据行独立样本 t检验、Cochran&Cox近似 t检验、单因素方差分析、Dunnett检验、Brown-Forsythe和Welch单因素方差分析、Dunnett T3检验、log-rank（Mantel-Cox）检验。 结果:与LPS处理0 h比较，LPS处理6 h与8 h RAW264.7巨噬细胞中IL-1β mRNA表达、LPS处理4~12 h RAW264.7巨噬细胞中IL-6 mRNA表达、LPS处理8 h和12 h RAW264.7巨噬细胞中CCL2 mRNA表达以及LPS处理4~8 h RAW264.7巨噬细胞中TNF-α mRNA表达均显著上调（ P<0.05或 P<0.01），LPS处理4~8 h PM中IL-1β与CCL2 mRNA表达、LPS处理2~24 h PM中IL-6 mRNA表达以及LPS处理2~12 h PM中TNF-α mRNA表达均显著上调（ P<0.05或 P<0.01）。选取8 h作为后续部分实验的LPS处理时间。KLF4主要定位在RAW264.7巨噬细胞的细胞核中。与LPS处理0 h比较，LPS处理8 h RAW264.7巨噬细胞中KLF4蛋白表达明显减少；LPS处理8 h RAW264.7巨噬细胞中有1 470个差异表达显著的DEG，包括转录表达显著下调的 KLF4［错误发现率<0.05，log 2（差异倍数）=-2.47］。与LPS处理0 h比较，LPS处理6~24 h RAW264.7巨噬细胞中KLF4 mRNA表达、LPS处理1~24 h RAW264.7巨噬细胞与PM中KLF4蛋白表达以及LPS处理4~24 h PM中KLF4的mRNA表达均明显降低（ P<0.05或 P<0.01）。与阴性对照组比较，KLF4过表达组LPS处理0、8 h RAW264.7巨噬细胞中KLF4的mRNA（ t'值分别为17.03、8.61， P<0.05或 P<0.01）与蛋白表达均明显升高，LPS处理0 h RAW264.7巨噬细胞中IL-6、CCL2的mRNA表达均明显升高（ t值分别为6.29、3.40， P<0.05或 P<0.01），LPS处理8 h RAW264.7巨噬细胞中IL-1β、IL-6、CCL2、TNF-α的mRNA表达均显著下降（ t值分别为10.52、9.60、4.58、8.58， P<0.01）。KLF4过表达组小鼠建模后72 h内生存比例明显高于阴性对照组（ χ2=4.01， P<0.05）。建模后8 h，KLF4过表达组小鼠血清中IL-1β、IL-6与ALT、AST水平分别为（161±63）、（476±161）pg/mL与（144±24）、（264±93）U/L，明显低于阴性对照组的（257±58）、（654±129）pg/mL与（196±27）、（407±84）U/L（ t值分别为3.16、2.44与4.04、3.24， P<0.05或 P<0.01）。建模后8 h，与阴性对照组比较，KLF4过表达组小鼠心脏、肺脏、肝脏的组织结构紊乱减轻，炎性渗出明显减少，脏器实质细胞病理样改变明显减轻。 结论:KLF4在LPS诱导的巨噬细胞炎症反应中表达显著下降，显著抑制巨噬细胞炎症反应；KLF4显著提高脓毒症小鼠生存率并缓解炎症反应与脓毒症相关脏器损伤。

激素耐药型肾病综合征(steroid resistant nephrotic syndrome，SRNS)通常为足细胞功能异常所导致，是儿童终末期肾脏病的常见病因之一。遗传因素所致足细胞结构或功能缺陷是引发SRNS的重要病因之一，大约43%的遗传性SRNS是由单基因突变引起的，已报道致病的单基因多达50种。核孔蛋白93(nucleoprin93，NUP93)基因突变最近被证实是遗传性SRNS的病因之一，其通过影响足细胞核孔蛋白复合体的组装或干扰骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7，BMP7)介导的SMAD信号传导，导致遗传性SRNS。

原发性肾病综合征是儿童常见的肾小球疾病,根据患儿对糖皮质激素的疗效,分为激素敏感型肾病综合征和激素耐药型肾病综合征(steroid-resistant nephrotic syndrome,SRNS)[1].SRNS预后不佳,30％ ～ 50％的患儿在10年内逐渐进展至终末期肾脏病(end stage renal disease,ESRD)[1].近年来研究发现核孔蛋白(nucleoporins,Nups)基因NUP107、NUP93和NUP205变异可导致SRNS[2-6].现简述核孔蛋白基因变异所致肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)的临床病理特点、核孔蛋白基因及其功能、核孔蛋白基因变异分析、核孔蛋白基因变异导致NS的发病机制及核孔蛋白基因变异分析的意义.

目的:探讨秦皮乙素经核糖体蛋白S6激酶/4E结合蛋白-1(p70S6K/4E-BP1)信号通路抑制人结肠癌细胞增殖和迁移的作用机制.方法:设HCT116细胞组、氟尿嘧啶组(20μg·ml-1)、秦皮乙素低(40μg·ml-1)、高(80μg·ml-1)剂量组,置于CO2培养箱(37℃、5％CO2、2％O2、93％N2).以上各组每孔设6个平行样,培养72 h.培养结束后,MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,Transwell Chamber测定迁移水平,RT-PCR法及WEST-BLOT法测定细胞p70S6K、4E-BP1 mRNA与蛋白表达水平.结果:氟尿嘧啶组、秦皮乙素低、高剂量组存活率、穿膜数、P70S6K、4E-BP1 mRNA和蛋白水平显著低于HCT116细胞组,细胞凋亡率显著高于HCT116细胞组(P<0.05).秦皮乙素低、高剂量组存活率、穿膜数、P70S6K、4E-BP1 mRNA和蛋白水平显著高于氟尿嘧啶组,细胞凋亡率显著低于氟尿嘧啶组(P<0.05).秦皮乙素低、高剂量组间各指标差异有统计学意义(P<0.05).结论:秦皮乙素能抑制结肠癌HCT116细胞增殖、迁移,诱导HCT116细胞凋亡,其机制与秦皮乙素抑制p70S6K、4E-BP1mRNA和蛋白表达有关.

目的:探讨右美托咪定对肺癌A549细胞炎症、凋亡及化疗敏感性的影响.方法:设A549细胞组、5-氟尿嘧啶组(40.0μg/ml)、右美托咪定组(80.0μg/ml)及联合组(5-氟尿嘧啶40.0μg/ml+右美托咪定80.0μg/ml);上述各组细胞置于CO2培养箱(37℃、5％CO2、2％O2、93％N2).以上各组每孔设6个平行样,培养72 h.培养结束后,以酶联免疫吸附法测定A549细胞炎症因子白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白水平,以噻唑蓝(MTT)法及结晶紫染色测定细胞活力及单克隆形成数目,采用流式细胞仪测定凋亡水平,采用Matrigel膜测定侵袭迁移水平,以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法及蛋白免疫印迹法测定核因子κB(NF-κB)、原癌基因(c-myc)mRNA和蛋白水平.结果:与A549细胞组比较,5-氟尿嘧啶组、右美托咪定组及联合组细胞IL-2、IL-6、TNF-α蛋白水平,吸光度,存活率,NF-κB,c-myc mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞克隆形成数目、穿膜数明显减少,凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与5-氟尿嘧啶组、右美托咪定组比较,联合组细胞IL-2、IL-6、TNF-α蛋白水平,吸光度,存活率,NF-κB,c-myc mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞克隆形成数目、穿膜数明显减少,凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:右美托咪定能抑制肺癌A549细胞炎症、增殖和侵袭,促进其凋亡,增加5-氟尿嘧啶对肺癌A549细胞的化疗作用;其机制与右美托咪定能增强5-氟尿嘧啶对A549细胞NF-κB、c-myc mRNA和蛋白表达的抑制作用有关.

患者,女,83岁,160 cm,53 kg,因"枣核致胸骨后疼痛、吞咽困难3d"入院.患者3d前不慎咽下枣核,即感胸骨后疼痛不适,不向其他部位放射,伴吞咽困难.既往有高血压( 3级,极高危)病史20余年,每日口服坎地沙坦8 mg,停用阿司匹林、阿托伐他汀钙3 d.查体:体温36. 5 ℃,脉博93次/分,RR 27次/分,BP 157/76 mmHg.颈部无肿胀,皮肤颜色及皮温正常,局部无压痛.HR 152次/分,律不齐.辅助检查:白细胞20. 4×109/L,中性粒细胞百分比86. 5％,C反应蛋白52. 5 mg/L,肌酐84. 5 μmol/L,血糖6. 4 mmol/L,降钙素原0. 57 ng/ml.ECG示:房颤心律,心室率174次/分.胸部CT示:食管中段壁明显增厚,管腔内梭形高密度影,考虑异物.术前诊断:食管异物穿孔;高血压;心房颤动.拟在气管插管全身麻醉下行"食管镜异物取出术".