目的:探讨谷氨酰胺对经烧伤大鼠血清（以下简称烧伤血清）干预的大鼠心肌细胞的作用及其细胞信号机制。方法:采用实验研究方法。取10只7~8个月龄雌雄各半Wistar大鼠制备正常大鼠血清（以下简称正常血清），另取20只7~8个月龄雌雄各半Wistar大鼠造成30%体表总面积Ⅲ度烧伤后制备烧伤血清，从180只1~3 d龄雌雄不拘Wistar大鼠心尖组织中分离培养原代心肌细胞用于后续实验。按随机数字表法（分组方法下同）将细胞分为正常血清组、烧伤血清组，加入相应血清培养。分别于培养1、3、6、9、12 h，采用锥虫蓝实验检测细胞存活率。将细胞分为单纯烧伤血清组、烧伤血清+4 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+8 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组，采用单纯烧伤血清或烧伤血清+相应终物质的量浓度谷氨酰胺处理，培养前实验筛选出的干预时间，同前检测细胞存活率。将细胞分为正常血清组、单纯烧伤血清组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组，同前处理后采用蛋白质印迹法检测培养30 min哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1（mTORC1）、p70核糖体蛋白S6激酶（p70 S6K）和真核翻译起始因子4E结合蛋白1（4E-BP1）磷酸化水平。将细胞分为正常血清组、单纯烧伤血清组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺+25 ng/mL雷帕霉素组，行相应处理后，分别于培养1、3、6 h，采用免疫荧光法检测热休克蛋白70（HSP70）和金属硫蛋白（MT）表达并观测微管形态。各组各时间点各指标样本数均为10。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD- t检验、LSD检验及Bonferroni校正。 结果:培养1、3、6、9、12 h，烧伤血清组细胞存活率均明显低于正常血清组（ t=4.950、16.752、35.484、34.428、27.781， P<0.01）。与组内培养1 h比，烧伤血清组培养3、6、9、12 h细胞存活率明显降低（ P<0.05）；与组内培养3 h比较，烧伤血清组培养6、9、12 h细胞存活率明显降低（ P<0.05）；与组内培养6、9 h比较，烧伤血清组培养12 h细胞存活率明显降低（ P<0.05）；烧伤血清组培养6、9 h细胞存活率比较，差异无统计学意义（ P>0.05）。因此选择培养6 h作为后续烧伤血清干预时间。培养6 h，与单纯烧伤血清组比较，烧伤血清+4 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+8 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组细胞存活率均明显升高（ P<0.01）。烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组与烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组细胞存活率相近（ P>0.05），烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组与烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组细胞存活率相近（ P>0.05）。因此选择12、16、20 mmol/L作为后续谷氨酰胺的干预浓度。培养30 min，正常血清组、单纯烧伤血清组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组细胞mTORC1、p70 S6K、4E-BP1磷酸化水平分别为1.001±0.042、0.510±0.024、0.876±0.022、0.836±0.074、0.856±0.041，1.00±0.11、0.38±0.09、0.95±0.13、0.96±0.13、0.89±0.24，1.00±0.07、0.29±0.08、0.87±0.27、0.68±0.08、0.60±0.21。与正常血清组比较，其余4个烧伤血清组细胞mTORC1、p70 S6K、4E-BP1磷酸化水平均明显降低（ P<0.01） 。与单纯烧伤血清组比较，其余3个烧伤血清组细胞mTORC1、p70 S6K、4E-BP1磷酸化水平均明显升高（ P<0.01）。烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组细胞4E-BP1磷酸化水平明显高于烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组和烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组（ P<0.05）。单纯烧伤血清组细胞培养1 h MT表达明显低于正常血清组（ P<0.05），其余时间点MT表达明显高于正常血清组（ P<0.01）；培养1、3、6 h，单纯烧伤血清组细胞HSP70表达明显高于正常血清组（ P<0.05），烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组细胞HSP70和MT表达均明显高于单纯烧伤血清组（ P<0.05），烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺+25 ng/mL雷帕霉素组细胞HSP70和MT表达均明显低于烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组（ P<0.01）。正常血清组细胞培养1、3、6 h微管结构完整，呈网格排列，染色均匀。单纯烧伤血清组细胞培养1 h部分微管出现断裂，部分网格排列不齐；培养3 h靠近细胞核微管结构清晰，细胞核远端微管模糊不清；培养6 h微管结构模糊不清。烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组细胞培养各时间点微管破坏程度较单纯烧伤血清组轻。烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺+25 ng/mL雷帕霉素组细胞培养各时间点微管形态与单纯烧伤血清组相近。 结论:烧伤血清可导致大鼠心肌细胞受损，细胞存活率明显下降。谷氨酰胺通过调控mTOR/p70 S6K/4E-BP1信号通路，促进心肌细胞HSP70和MT表达，稳定微管结构，从而发挥其细胞保护作用。

目的:探讨甘氨酸对经烧伤大鼠血清（以下简称烧伤血清）干预的大鼠心肌细胞的作用及其机制。方法:采用实验研究方法。取30只7~8周龄雌雄各半Wistar大鼠，其中10只用于制备正常大鼠血清（以下简称正常血清），将另20只造成30%体表总面积Ⅲ度烧伤后制备烧伤血清；从180只1~3 d龄雌雄不拘Wistar大鼠心尖组织中分离培养原代心肌细胞用于后续实验。按随机数字表法（分组方法下同）将细胞分为用相应血清处理的正常血清组、烧伤血清组，于处理1、3、6、9、12 h进行锥虫蓝染色检测细胞存活率；将细胞分为用烧伤血清处理6 h后常规培养30 min的单纯烧伤血清组和用烧伤血清处理6 h后加相应终物质的量浓度甘氨酸培养30 min的0.4 mmol/L甘氨酸组、0.8 mmol/L甘氨酸组、1.2 mmol/L甘氨酸组、1.6 mmol/L甘氨酸组、2.0 mmol/L甘氨酸组，即干预6.5 h，同前检测细胞存活率。将细胞分为正常血清组、单纯烧伤血清组、0.8 mmol/L甘氨酸组、1.2 mmol/L甘氨酸组、1.6 mmol/L甘氨酸组，分别同前干预6.5 h，采用高效液相色谱法检测腺苷一磷酸（AMP）和ATP含量并计算AMP/ATP比值，采用蛋白质印迹法检测磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1（p-mTORC1）、磷酸化p70核糖体蛋白S6激酶（p-p70 S6K）、磷酸化真核翻译起始因子4E结合蛋白1（p-4E-BP1）、磷酸化AMP活化蛋白激酶（p-AMPK）蛋白表达。将细胞分为同前干预的正常血清组、单纯烧伤血清组、0.8 mmol/L甘氨酸组和用烧伤血清处理后加2种试剂培养的0.8 mmol/L甘氨酸+25 ng/mL雷帕霉素组，于处理1、3、6 h行相应培养30 min，即干预1.5、3.5、6.5 h，采用免疫荧光法检测热休克蛋白70（HSP70）、金属硫蛋白（MT）和微管蛋白表达并观察干预6.5 h微管形态。各时间点样本数均为10。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD- t检验、LSD检验及Bonferroni校正。 结果:处理1、3、6、9、12 h，烧伤血清组细胞存活率均明显低于正常血清组（ t值分别为4.96、16.83、35.51、34.33、27.88， P<0.05）。在烧伤血清组中，处理3、6、9、12 h细胞存活率均较处理1 h明显降低（ P<0.05），处理6、9、12 h细胞存活率均较处理3 h明显降低（ P<0.05），处理6 h细胞存活率与处理9 h相近（ P>0.05）但明显高于处理12 h（ P<0.05）；选择处理6 h作为后续烧伤血清干预时间。干预6.5 h，与单纯烧伤血清组比较，各甘氨酸组细胞存活率均明显升高（ P<0.05）。0.8 mmol/L甘氨酸组细胞存活率最高，选择0.8、1.2、1.6 mmol/L作为后续甘氨酸的干预浓度。干预6.5 h，单纯烧伤血清组细胞AMP/ATP比值较正常血清组、1.2 mmol/L甘氨酸组、1.6 mmol/L甘氨酸组明显升高（ P值均<0.05），1.6 mmol/L甘氨酸组细胞AMP/ATP比值较0.8 mmol/L甘氨酸组明显降低（ P<0.05）。干预6.5 h，正常血清组、单纯烧伤血清组、0.8 mmol/L 甘氨酸组、1.2 mmol/L 甘氨酸组、1.6 mmol/L甘氨酸组细胞p-mTORC1、p-p70 S6K、p-4E-BP1蛋白表达水平分别为1.001±0.037、0.368±0.020、1.153±0.019、1.128±0.062、1.028±0.037，0.96±0.07、0.63±0.12、1.17±0.13、1.13±0.16、1.11±0.11，0.98±0.06、0.45±0.08、1.13±0.05、0.77±0.12、0.51±0.13。与单纯烧伤血清组比较，正常血清组与各甘氨酸组细胞p-mTORC1、p-p70 S6K和p-4E-BP1蛋白表达均明显升高（ P<0.05），p-AMPK蛋白表达均明显降低（ P<0.05）；与0.8 mmol/L甘氨酸组比较，1.2 mmol/L甘氨酸组细胞p-4E-BP1蛋白表达以及1.6 mmol/L甘氨酸组细胞p-mTORC1与p-4E-BP1蛋白表达均明显降低（ P<0.05）；与1.2 mmol/L甘氨酸组比较，1.6 mmol/L甘氨酸组细胞p-mTORC1、p-4E-BP1蛋白表达均明显降低（ P<0.05），p-AMPK蛋白表达明显升高（ P<0.05）。与正常血清组比较，单纯烧伤血清组细胞干预1.5、3.5、6.5 h微管蛋白表达均明显降低（ P<0.05），干预1.5、3.5 h HSP70表达和干预3.5、6.5 h MT表达均明显升高（ P<0.05）；单纯烧伤血清组与0.8 mmol/L甘氨酸+25 ng/mL雷帕霉素组细胞干预1.5、3.5、6.5 h HSP70、MT表达以及干预1.5、3.5 h微管蛋白表达均明显低于0.8 mmol/L甘氨酸组（ P<0.05）。干预6.5 h，与正常血清组比较，单纯烧伤血清组细胞微管结构紊乱；0.8 mmol/L甘氨酸组细胞边界较单纯烧伤血清组清晰，微管结构近核部位排列整齐；与0.8 mmol/L甘氨酸组比较，0.8 mmol/L甘氨酸+25 ng/mL雷帕霉素组细胞边界不清，微管结构紊乱。 结论:烧伤血清可导致大鼠心肌细胞受损，甘氨酸可通过AMP活化蛋白激酶显著上调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/p70核糖体蛋白S6激酶/真核翻译起始因子4E结合蛋白1信号通路，促进心肌细胞保护性蛋白HSP70、MT和微管蛋白合成，稳定微管结构，实现心肌细胞保护作用。

目的:观察同期有氧与抗阻训练对老年小鼠快缩型骨骼肌蛋白质合成的影响并探讨其潜在机制.方法:16月龄C57BL/6小鼠根据体重随机纳入衰老对照与运动干预组,3月龄同品系小鼠作为青年对照组,每组8只.运动干预组每周一、三、五以自体重3%负荷进行45分钟耐力训练,每周二、四、六以自体重40%～50%负荷进行力量训练,共计8周.末次训练24小时后处死全部小鼠取样.采用苏木精伊红染色切片观察肌纤维横截面积与直径;Bradford法进行蛋白定量;嘌呤霉素表面标记翻译法检测蛋白质合成率;网屏悬吊时间评价协调性;后肢抓握力评价肌肉力量;力竭游泳时间评价运动耐力;免疫印迹法检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTORSer2448)、p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6KThr389)、真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1Thr37/46)磷酸化表达及Ⅱb型肌球蛋白重链(MHCⅡb)的蛋白表达.结果:衰老对照组与运动干预组小鼠骨骼肌纤维横截面积、直径、蛋白质含量、蛋白质合成率、蛋白质合成调控相关蛋白表达、肌肉力量与运动耐力均显著低于青年对照组.运动干预组蛋白质含量、蛋白质合成率、骨骼肌横截面积与直径、网屏悬吊时间、抓握肌力及力竭游泳能力均显著高于衰老对照组,mTORSer2448、p70S6KThr389、4E-BP1Thr37/46磷酸化表达与MHCⅡb蛋白表达较衰老对照组亦显著上调.结论:同期运动训练可以促进老年小鼠快缩型骨骼肌蛋白质合成和肌肉肥大,增强其肌肉力量与运动耐力,具有改善衰老性骨骼肌萎缩的潜力,其机制可能涉及快缩型骨骼肌内mTOR/p70S6K/4E-BP1信号通路的活化.

目的 研究华蟾素对U87胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响,并初步探讨其中的分子机制.方法 不同浓度的华蟾素(0.5～20 μmol/L)处理U87细胞6h、12 h、24 h、48 h后,用CCK-8试剂盒进行做细胞活性检测,观察华蟾素对U87胶质瘤细胞活性的影响.不同浓度的华蟾素(1～20 μmol/L)分别处理12 h、24 h后,用Hochest33342试剂检测U87胶质瘤细胞的凋亡情况.免疫荧光染色观察华蟾素处理24 h后与细胞增殖相关蛋白p-AKT(T308)的表达情况.Western blot检测不同浓度的华蟾素(1～20 μmol/L)处理24 h后与细胞增殖相关蛋白{磷酸化的磷脂酰肌醇激酶(p-PI3K)、苏氨酸308位点磷酸化的蛋白激酶B[p-AKT(T308)]、丝氨酸473位点磷酸化的蛋白激酶B[p-AKT(S473)]、磷酸化核糖体S6蛋白激酶(PS6)、磷酸化的真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1 (p-4EBP1)}和凋亡相关蛋白(BAX、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9)的表达情况.结果 华蟾素可抑制U87胶质瘤细胞的活性、诱导U87胶质瘤细胞的凋亡,呈浓度和时间依赖性反应.华蟾素作用后可使凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3、BAX的表达水平增高,PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT(T308)的表达水平降低.结论 华蟾素可抑制U87胶质瘤细胞的增殖、诱导U87胶质瘤细胞的凋亡,这可能经由影响PI3K-AKT-4EBP1与BAX-caspase的信号通路实现.

目的 通过体内和体外研究探讨白藜芦醇在人核孔复合物细胞(NPC)中的抗癌活性.方法 用 MTT实验检测白藜芦醇对CNE-1细胞和CNE-2Z细胞(两种具有不同分化程度的NPC细胞株)生长增殖的影响.用流式细胞仪检测白藜芦醇诱导NPC细胞凋亡情况和NPC细胞周期分布变化.Western blot检测涉及细胞凋亡调控的数个重要基因和与细胞周期调控有关的数种Cyclins的蛋白表达水平.在裸鼠体内进行 CNE-2Z细胞移植瘤实验.结果 用白藜芦醇处理NPC细胞后,白藜芦醇不仅以时间和剂量依赖的方式降低 NPC细胞的增殖能力,还可以剂量依赖的方式诱导NPC细胞的凋亡.流式细胞仪分析结果表明,白藜芦醇处理可将NPC细胞生长阻滞于S-期和G2/M-期.白藜芦醇处理可下调Bcl-2和低氧诱导因子1 (HIF-1)蛋白的表达,上调Caspase-3蛋白表达.此外,白藜芦醇处理不仅可以降低蛋白激酶B (Akt )、p70核糖体S6蛋白激酶(p70S6K)和真核翻译起始因子4E-结合蛋白1 (4E-BP-1)的磷酸化水平,也可降低参与细胞周期调控的数个细胞周期蛋白(Cyclins)的表达水平.白藜芦醇可抑制裸鼠体内NPC移植瘤的生长,进一步确认白藜芦醇对NPC生长的治疗效果.结论 在人NPC细胞株中,白藜芦醇可能是通过干扰Akt/p70S6K信号通路而发挥有效的抗增殖和促凋亡作用.

目的 :探讨自噬在二甲双胍诱导的垂体泌乳素瘤细胞凋亡中的作用.方法 :用不同浓度的二甲双胍处理泌乳素瘤MMQ细胞不同时间后, CCK-8法检测细胞增殖, FCM法检测细胞凋亡, 透射电子显微镜检测细胞中自噬溶酶体的形态及数量变化.用二甲双胍和 (或) 自噬抑制剂3-甲基腺苷 (3-methyladenine, 3-MA) 处理MMQ细胞后, 蛋白质印迹法检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mammalian target of rapamycin, m TOR) -自噬-凋亡信号通路相关蛋白的表达.结果:二甲双胍明显抑制MMQ细胞增殖, 并诱导细胞凋亡 (P值均＜0.05) .二甲双胍能够诱导MMQ细胞自噬, 使细胞中的自噬小体数量明显增加 (P＜0.001);而自噬抑制剂3-MA处理可显著抑制二甲双胍诱导的细胞自噬和凋亡相关蛋白微管相关蛋白轻链3 (microtubule-associated protein light chain 3, LC3) -Ⅱ、Beclin 1和聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶[poly (ADP-ribose) polymerase, PARP]表达 (P值均＜0.05) .二甲双胍明显抑制MMQ细胞中mTOR及其下游蛋白P70核糖体蛋白S6激酶 (P70 ribosomal protein S6 kinase, P70S6K) 和真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白 (eukaryotic initiation factor 4E binding protein 1, 4EBP1) 的表达活性 (P值均＜0.05) .结论:二甲双胍可能通过下调mTOR活性, 诱导细胞自噬, 从而促进垂体泌乳素瘤细胞发生凋亡.

目的 探讨围生期磺胺间甲氧嘧啶暴露对海马雷帕霉素靶蛋白(mTOR)调控机制的影响.方法 选用40只美国癌症研究所(ICR)雌鼠从受孕后第1天(GD1)至仔鼠出生后21d(PND 21),每天分别对其灌服1次10、50和200mg/kg的磺胺间甲氧嘧啶(SMM)和生理盐水,并用气相色谱法测定母鼠粪便中短链脂肪酸(SCFAs),蛋白免疫印迹法检测PND 22和PND 56时雌性子鼠海马中mTOR信号通路相关蛋白的表达.结果 与对照组相比,各SMM处理组母鼠粪便中总短链脂肪酸(SCFAs)和丁酸含量显著下降(P＜0.05);处理组雌性子鼠海马中蛋白激酶B(Akt)和mTOR以及低、中剂量组4E结合蛋白(4EBP1)表达明显增高(P＜0.05);PND56时,处理组磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)和mTOR以及中、高剂量组核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)表达均显著降低(P＜0.05),处理组4EBP1表达明显增高(P＜0.05).结论 围生期母鼠暴露SMM致其肠道菌群紊乱,间接诱导其雌性子代海马mTOR信号通路异常.

目的:探讨健脾消癌方含药血清对人结肠癌HCT116细胞蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路相关蛋白表达的影响.方法:以15％健脾消癌方含药血清处理结肠癌HCT116细胞,采用Transwell侵袭实验检测HCT116细胞迁移、侵袭作用,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测HCT116细胞中Akt,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),mTOR,磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR),核糖体S6蛋白激酶(S6K1),磷酸化核糖体S6蛋白激酶(p-S6K1),真核细胞始动因子4E结合蛋白(4EBP1),磷酸化真核细胞始动因子4E结合蛋白(p-4EBP1)等蛋白的表达,正常血清组设立相同浓度正常血清组(15％),10％胎牛血清组(FBS).结果:与正常血清组比较,健脾消癌方含药血清组迁移细胞数与侵袭细胞数均显著降低(P＜0.01);与正常血清组比较,Akt蛋白表达无明显下调,p-Akt蛋白表达显著下调(P＜0.01);与正常血清组比较,mTOR蛋白表达无明显下调,p-mTOR蛋白表达显著下调(P＜0.01);与正常血清组比较,S6K1蛋白表达无明显下调,p-S6K1蛋白表达显著下调(P＜0.01);与正常血清组比较,4EBP1蛋白表达无明显下调,p-4EBP1蛋白表达显著下调(P＜0.01).结论:健脾消癌方抗结肠癌复发转移的机制可能与抑制Akt/mTOR信号通路的激活有关.

目的:探讨秦皮乙素经核糖体蛋白S6激酶/4E结合蛋白-1(p70S6K/4E-BP1)信号通路抑制人结肠癌细胞增殖和迁移的作用机制.方法:设HCT116细胞组、氟尿嘧啶组(20μg·ml-1)、秦皮乙素低(40μg·ml-1)、高(80μg·ml-1)剂量组,置于CO2培养箱(37℃、5％CO2、2％O2、93％N2).以上各组每孔设6个平行样,培养72 h.培养结束后,MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,Transwell Chamber测定迁移水平,RT-PCR法及WEST-BLOT法测定细胞p70S6K、4E-BP1 mRNA与蛋白表达水平.结果:氟尿嘧啶组、秦皮乙素低、高剂量组存活率、穿膜数、P70S6K、4E-BP1 mRNA和蛋白水平显著低于HCT116细胞组,细胞凋亡率显著高于HCT116细胞组(P<0.05).秦皮乙素低、高剂量组存活率、穿膜数、P70S6K、4E-BP1 mRNA和蛋白水平显著高于氟尿嘧啶组,细胞凋亡率显著低于氟尿嘧啶组(P<0.05).秦皮乙素低、高剂量组间各指标差异有统计学意义(P<0.05).结论:秦皮乙素能抑制结肠癌HCT116细胞增殖、迁移,诱导HCT116细胞凋亡,其机制与秦皮乙素抑制p70S6K、4E-BP1mRNA和蛋白表达有关.

目的 研究肿瘤蛋白p53结合蛋白2/p53凋亡刺激蛋白2(TP53 BP2/ASPP2)对HepG2人肝癌细胞自噬的调节作用和机制.方法 通过腺病毒、慢病毒感染HepG2细胞上调或下调细胞中ASPP2的表达,HepG2细胞继续在不含胎牛血清的培养基中培养24h,通过Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、beclin1、P62、自噬相关基因5(ATG5)、ATG7和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白mTOR、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、真核转录起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)、磷酸化的4EBP1(p-4EBP1)、核糖体蛋白S6、磷酸化的S6(p-S6)、核糖体S6激酶B1(RPS6KB1/p70S6K)、磷酸化的p70S6K(p-p70S6K)的蛋白表达,荧光显微镜检测细胞表达的绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3(GFP-LC3)融合蛋白.同时,使用慢病毒感染不表达p53的Hep3B细胞,敲低细胞中的ASPP2水平,Western blot法检测Hep3B细胞ASPP2和mTOR通路相关蛋白mTOR、p-mTOR、4EBP1、p-4EBP1、S6、p-S6、RPS6KB1/p70S6K、p-p70S6K的蛋白表达.结果 当ASPP2的表达上调时,mTOR复合物1(mTORC1)通路被激活,并且自噬相关蛋白的表达和自噬体的数量减少.在下调ASPP2表达后,mTORC1通路受到抑制,自噬相关蛋白的表达水平和自噬体的数量增加.在p53表达沉默的Hep3B细胞中,当ASPP2下调后,mTORC1途径仍然受到抑制.结论 ASPP2以p53非依赖性方式激活mTOR通路抑制HepG2人肝癌细胞自噬.