目的 探讨氯化两面针碱(NC)通过MAPK信号通路调控乳腺癌及肝癌细胞转移的机制.方法 人乳腺癌细胞MDA-MB-231及肝癌HepG2细胞给予不同浓度的NC处理,利用MTS法检测细胞增殖能力;利用Wound-healing及Matrigelbased transwell invasion实验检测细胞迁移、侵袭能力;利用荧光定量PCR及Western blot方法检测肿瘤转移相关蛋白的表达情况及MAPK信号通路活性.结果 与对照组相比,NC处理后MDA-MB-231及HepG2细胞增殖能力明显受到抑制,且增殖抑铽率随着NC浓度的增加逐渐明显(P＜0.05).NC处理后细胞迁移及侵袭能力明显降低(P＜0.05);基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达量均明显降低(P＜0.05);p-ERK1/2、p-JNK、p-p38表达量明显降低(P＜0.05),而t-ERK1/2、t-JNK、t-p38表达量变化不明显(P＞0.05).结论 NC通过MAPK信号通路,抑制乳腺癌及肝癌细胞转移,为临床用药提供有价值的实验资料.

目的:利用高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-LTQ/Orbitrap-MS)技术对两面针非药用部位果壳中的生物碱类成分进行分析和鉴定,并对其抗氧化活性进行研究,为两面针植物更深入地研究开发提供科学依据.方法:采用HPLC-LTQ/Orbitrap-MS采集数据后,对各色谱峰的质谱图高分辨一级和二级质谱数据进行解析,与文献数据库进行对比,对各色谱峰进行结构推测和确认.采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)清除自由基能力法及2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基清除能力对两面针果壳样品抗氧化活性进行研究.结果:从两面针果壳中共鉴定了25个生物碱类化合物,主要化学成分为异喹啉类生物碱(两面针碱、鹅楸掌碱、木兰箭毒碱),吡咯类生物碱(别隐品碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱),喹啉类生物碱(木兰花碱、氯化两面针碱),有机胺类生物碱(γ-山椒素).DPPH清除自由基能力法及ABTS自由基清除能力对其抗氧化活性进行了研究,结果显示在测定的浓度范围内,抗氧化活性均随着试样浓度的增加而逐渐增强,呈现良好的剂量依赖性.结论:该文对两面针果壳进行了化学成分及活性的研究,研究证明其具有多种生物碱类成分,并具有较好的抗氧化活性,为两面针植物更深入地研究开发提供了参考.

目的 基于网络药理学方法探讨两面针活血化瘀的作用机制.方法 采用计算机检索TCMSP数据库和PharmMapper数据库,筛选两面针的活性成分及其相关靶点;通过OMIM,TTD,String等数据库筛选血瘀证相关靶点,并构建蛋白交互网络;采用Cytoscape 3.5.1软件构建活性成分-靶点-疾病网络,获得与两面针活血化瘀直接相关的靶点;利用DAVID数据库对筛选的靶点进行KEGG通路富集,采用Cytoscape 3.5.1软件进行相关靶点生物学功能分析,最终构建活性成分-关键靶点-通路网络;采用分子对接技术验证其成分与靶点.结果 共获得两面针活性成分19个,包括白屈菜红碱、血根碱、香叶木苷、芝麻脂素等;直接靶点24个,包括环氧合酶-2、内皮型一氧化氮合酶、凝血酶原、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1、血管内皮生长因子受体2、基质金属蛋白酶3、纤维蛋白原γ链等;与两面针活血化瘀最相关的通路包括血管内皮生长因子、血小板活化、环磷酸腺苷、附着斑块、肿瘤坏死因子、磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶等信号通路;成分和靶点的分子对接结果均低于-5 kcal/mol.结论 两面针通过多成分、多靶点、多通路发挥活血化瘀作用,其作用机制可能与血管内皮生长因子、血小板活化等信号通路有关.

目的 研究单面针药材区分两面针药材及常见混伪品的鉴别方法;对单面针药材多种质控指标进行检测和聚类分析,初步建立单面针药材等级评价体系,规范单面针药材的质量规格.方法 采用薄层色谱法和高效液相色谱法区分单面针的真伪品;并对30批不同等级的单面针药材展开性状、杂质、直径、水分、总灰分、二氧化硫残留量、重金属和有害元素残留量、醇溶性浸出物及木兰花碱含量等质控指标的检测,应用SPSS 19.0统计软件聚类分析各项指标与单面针药材之间的相关性.结果 研究发现单面针与两面针及常见混伪品在薄层色谱Rf=0.9上下各有两条亮红色斑点及在高效液相色谱的1号峰可以作为区分点.30批样品分为3类,1批一等:醇溶性浸出物不少于6.8％,直径不小于2.8 cm,木兰花碱含量不少于0.19％;9批二等:醇溶性浸出物5.8％～7.0％,直径1.3～2.2 cm,木兰花碱含量0.05％～0.17％;20批三等:醇溶性浸出物3.9％～5.8％,直径大小不等,木兰花碱含量0.06％～0.16％.结论 本研究确证了薄层色谱法和高效液相色谱法能够有效鉴别和区分单面针药材与两面针药材及常见混伪品,该方法专属性强、灵敏度高、简便实用;本研究初步建立了单面针3个等级规格药材评价体系,实践中容易掌握,为评价单面针药材质量提供了数据支持,对药材的采收与产地加工、销售流通及临床应用具有一定的指导和实践意义.