目的:探讨活血荣络方对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）大鼠的保护作用，明确HIBD损伤及修复过程中AMPK信号通路的表达情况。方法:在缺氧缺血再灌注模型基础上采用改良缺氧瓶建立足月HIBD大鼠模型。将造模成功60只大鼠按随机数字表法分为模型组和中药组，每组30只，另设对照组30只。术前2 h中药组灌胃活血荣络方水煎液1.17 g/100 g（等效剂量），对照组和模型组灌胃等体积生理盐水，术后2 h再灌胃1次，2次/d，连续灌胃5 d。采用行为学测试（惊厥评估、Longa评分、悬吊实验、水迷宫实验）评估各组大鼠运动神经功能情况和远期学习能力，HE染色与电镜观察脑组织病理结构变化和线粒体损伤情况，伊文思蓝染色与脑含水量测定用于检测血脑屏障通透性和脑水肿情况，PCR阵列技术检测各组大鼠脑组织中AMPK信号通路相关基因表达情况。结果:与模型组比较，中药组大鼠惊厥发作有所改善、Longa评分降低、握力测试评分与悬吊时间提升、逃避潜伏期缩短、穿越平台次数增加（ P<0.05）；中药组神经元与线粒体损伤程度减轻，脑血管通透性与脑含水量降低（ P<0.01）。PCR阵列结果显示，与对照组比较，模型组脑组织中有2个基因显著上调，12个基因显著下调；与中药组比较，模型组有15个基因相对下调。 结论:活血荣络方可减轻HIBD大鼠脑损伤程度，改善运动神经功能和提高学习认知能力，其损伤修复机制与调控AMPK信号通路相关基因表达有关。

目的 探讨活血荣络方激活Janus酪氨酸激酶 2/信号转导和转录激活剂 3(Janus kinase 2/signal transducer and acti-vator of transcription 3,JAK2/STAT3)通路对氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)后脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cell,BMEC)的干预作用和机制.方法 培养大鼠BMEC(bEnd.3细胞),建立OGD/R模型;将细胞随机分为正常组(10%空白血清)、模型组(10%空白血清)、活血荣络方组(10%活血荣络方含药血清)、丁苯酞组(10%丁苯酞含药血清)、Stattic组(10%空白血清+10 μmol/mL Stattic)、联用组(10%活血荣络方含药血清+10 μmol/mL Stattic),并分别给予相应的药物干预 24 h.采用CCK-8 法检测活血荣络方对OGD/R后bEnd.3 细胞活性的影响;采用划痕实验和Transwell迁移实验分别检测活血荣络方对OGD/R后bEnd.3 细胞划痕愈合和细胞迁移的影响;采用Western blot法检测bEnd.3 细胞中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、血管内皮细胞生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)蛋白表达水平.结果 与正常组比较,模型组bEnd.3细胞存活率、细胞划痕愈合率、细胞迁移数显著降低(P<0.01),JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、VEGFA的表达量升高(P<0.05 或P<0.01);与模型组比较,活血荣络方组bEnd.3细胞的存活率、细胞划痕愈合率、细胞迁移数显著升高(P<0.01),JAK2、p-JAK2、p-STAT3、STAT3、VEGFA的表达量升高(P<0.05 或P<0.01);与Stattic组比较,联用组bEnd.3 细胞的存活率、细胞划痕愈合率、细胞迁移数显著升高(P<0.05或P<0.01),STAT3、VEGFA的表达量升高(P<0.05).结论 活血荣络方可能激活JAK2/STAT3信号通路并诱导内皮细胞的增殖、迁移和存活,激活VEGFA表达并减轻脑缺血再灌注损伤,具有神经保护作用.

目的 鉴定脑梗死脂质代谢基因,并探讨活血荣络方的干预作用.方法 采用多芯片联合差异分析(GSE61616、GSE30655),结合Reactome数据库,鉴定出脑梗死脂质代谢基因,并在GSE97537芯片中鉴定并验证脑梗死脂质代谢基因的表达差异;采用Pearson相关性分析GSE61616、GSE30655、GSE97537、GSE137595、GSE22255、GSE163614、GSE78731 数据集中 51 个脑梗死样本mRNA表达相关性;通过STRING数据库、R语言clusterProfiler包对脑梗死脂质代谢基因进行蛋白相互作用及GO、KEGG富集分析.制备脑梗死模型大鼠,并予活血荣络方浸膏11.7 g/kg灌胃给药,连续7 d,观察大鼠神经功能缺损症状、Nissl小体变化及脑梗死脂质代谢关键基因PLA2G4A、SPHK1、PTGS1 mRNA表达.结果 TSPO、CYP1B1、PLIN2、CH25H、PLA2G4A、ANGPTL4、PTGS1、SPHK1、PTGES被鉴定为脑梗死脂质代谢基因,在脑梗死中显著高表达且显著正相关,其中PTGS1、PLA2G4A、SPHK1相互作用关系最强,是脑梗死脂质代谢关键基因;脑梗死脂质代谢基因主要发挥氧化还原酶活性、铁离子结合、血红素结合等分子功能,介导花生四烯酸代谢、磷脂酶D信号通路、VEGF信号通路,参与脂质代谢调控进程、脂肪酸代谢进程、脂肪酸衍生物代谢过程.脑梗死模型大鼠神经功能缺损症状严重(P<0.001),活血荣络方能有效改善模型大鼠神经功能缺损(P<0.001);Nissl染色结果提示,脑梗死后神经元结构异常,数目明显减少(P<0.001),活血荣络方能增加神经元数目(P<0.001),修复神经元结构;RT-qPCR结果提示,脑梗死脂质代谢关键基因在脑梗死中显著高表达(P<0.001),与生物信息学结果一致,活血荣络方能降低脂质代谢关键基因PTGS1、PLA2G4A、SPHK1表达(P<0.001,P<0.01,P<0.05).结论 活血荣络方能下调PTGS1、PLA2G4A、SPHK1表达,发挥氧化还原酶活性、铁离子结合、血红素结合等分子功能,介导花生四烯酸代谢、磷脂酶D信号通路、VEGF信号通路,参与脂质代谢调控进程、脂肪酸代谢进程、脂肪酸衍生物代谢过程,增加Nissl小体数目,改善神经功能缺损症状,发挥神经保护作用.

强直性脊柱炎(AS)是一种慢性进行性、全身性炎性疾病,是免疫相关的常见病和难治性疾病.茅建春诊疗AS多年,经验丰富,善用膏方治疗AS.基于多年临床实践经验,认为AS(大偻)的基本病机是先天督肾亏虚,风寒湿之邪痹阻督脉.冬应肾而养藏,冬令膏方收膏所用血肉有情之品,大都入督肾,具有填精益髓、壮督荣络之效,契合大偻病机,因此冬令膏方尤其适合AS患者.据此提出了基本治则:补肾强脊温督以培元固本,活血通络以祛诸邪,全程顾护脾胃,先后天互滋.本文总结茅建春运用膏方治疗AS的经验,并附医案两则,以期为AS的中医药治疗提供思路和方法.

目的 观察活血荣络方对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响,基于NLRP3炎症小体探讨其作用机制.方法 72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组和活血荣络方低、中、高剂量组,采用线栓法建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型,各组分别于造模前36、12 h及造模后12 h灌胃.对大鼠神经功能缺损进行评分,TTC染色测定脑梗死体积,HE染色观察海马及皮质区病理损伤,ELISA检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量,Western blot检测海马组织NLRP3、pro-Caspase-1、Cleaved-Caspase-1蛋白表达,免疫组化检测海马及皮质区Caspase-1表达,免疫荧光染色检测细胞焦亡.结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分和脑梗死体积百分比明显增加;海马及皮质区神经元胞体缩小变形,核固缩明显;血清IL-1β、IL-18含量明显增加,海马组织NLRP3、pro-Caspase-1、Cleaved-Caspase-1蛋白表达明显升高,海马CA1区及皮质区Caspase-1表达明显升高,皮质区焦亡阳性细胞率明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).与模型组比较,活血荣络方中、高剂量组和尼莫地平组大鼠神经功能缺损评分和脑梗死体积百分比明显减少;海马及皮质区神经元损伤明显好转;血清IL-1β、IL-18含量明显减少,海马组织NLRP3、pro-Caspase-1、Cleaved-Caspase-1蛋白表达明显降低,海马CA1区及皮质区Caspase-1表达明显降低,皮质区焦亡阳性细胞率明降低少,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),以活血荣络方中剂量组作用最明显(P＜0.05,P＜0.01).结论 活血荣络方能通过抑制NLRP3炎症小体过度激活抑制细胞焦亡,从而改善大鼠脑缺血再灌注损伤.

目的:观察活血荣络汤治疗缺血性中风阴虚血瘀证的临床疗效.方法:将符合纳入标准的86例缺血性中风阴虚血瘀证患者随机分为对照组和治疗组.对照组给予脑卒中恢复期常规治疗,治疗组在对照组治疗的基础上加服活血荣络汤,治疗3个月后对两组患者的神经功能、生活能力及中医证候进行积分评定,评估两组临床疗效,并监测治疗期间发生的心脑血管事件及药物不良反应.结果:治疗后,治疗组神经功能缺损评分明显低于对照组(P＜0.01),生活能力评分和临床疗效明显高于对照组(P＜0.01);治疗期间,两组均未发生严重的危及生命的心脑血管事件或药物不良反应.结论:活血荣络汤治疗效缺血性中风阴虚血瘀证有较好疗效,可促进患者神经功能恢复,改善患者生活质量.

目的:本研究旨通过生物信息学和细胞实验研究,揭示活血荣络方治疗阿尔兹海默病的分子机制.方法:通过GeneCards、String、DAVID数据库预测AD疾病潜在靶点,并对潜在靶点进行"蛋白—蛋白"互作网络(PPI)、GO分析,绘制"靶点—GO"热图.同时采用体外Aβ25-35损伤星形胶质细胞诱导AD细胞模型,并随机分为6组,分别为空白组、多奈哌齐组、sFRP、0.5倍活血荣络方组、1倍活血荣络方组、2倍活血荣络方组组,加相应刺激分别处理12 h、24 h、48 h、72 h.采用MTT法检测细胞活性、免疫组化法检测APP、Aβ蛋白定位、定量表达,以初步验证生物信息学预测结果.结果:收集筛选出AD共35个靶点,其中APP、APOE、PSEN1、PSEN2、SNCA相互作用明显,且APP、APOE在GO中显著富集.MTT结果显示各组OD值随着时间的延长而增高,各药物组细胞活性均高于空白组,其中2倍组细胞活性最高;sFRP组低于空白组.免疫组化结果显示药物组Aβ及APP的表达均低于空白组,2倍活血荣络方组均低于其它给药组,并且各组Aβ及APP表达随时间延长有逐渐减少趋势,但2倍活血荣络方组减少最明显.结论:基于"阴虚血瘀—荣气虚滞"理论立方的活血荣络方可能通过多靶点、多成分、多通路发挥治疗AD疾病的作用,并进一步实验验证其治疗作用可能与抑制APP、Aβ 蛋白的表达,降低AChE活性,从而改善神经突触炎症毒性有关.

目的 采用网络药理学方法研究活血荣络方在脑梗死血管新生中的作用及其机制.方法 通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)收集活血荣络方的主要活性成分并进行初步筛选,采用Swiss TargetPrediction数据库预测主要活性成分靶点,通过GeneCards数据库预测脑梗死血管新生作用靶点,二者取交集得出共同靶点.采用String数据库及Cytoscape软件Network analyzer功能构建共同靶点蛋白相互作用网络.采用DAVID数据库结合Cytoscape软件对共同靶点进行GO及KEGG富集分析.结果 收集并筛选出活血荣络方422个活性成分、1028个靶点,脑梗死血管新生169个靶点,共同靶点42个,其中IL6、TNF、AKTI、CASP3相互作用最明显,主要调控氧化应激、细胞凋亡、蛋白磷酸化、内皮细胞及平滑肌细胞增殖等生物过程及HIF-1信号通路、癌症途径、TNF信号通路、能量代谢途径、PI3K-Akt信号通路、mTOR信号通路等.结论 活血荣络方在脑梗死血管新生中体现了多成分、多靶点、多途径的作用特点,有助于进一步诠释活血荣络方的药理学作用机制.

恢复三级侧支循环、促进血管新生是脑梗死防治的重要切入点.在前期理论研究基础上结合血管新生中血管内皮细胞增殖、迁移、分化的微观现象,提出荣气虚滞是脑梗死后血管新生不足的理论基础.荣气气化的"精化气-气生变-变成形"过程能针对性启动或促进脑梗死内源性血管新生,在荣气理论指导下的活血荣络方能促进血管新生,从而具有较好的防治脑梗死作用.

目的 探讨活血荣络方对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及对线粒体自噬的影响.方法 采用生物信息学方法挖掘脑梗死差异表达miRNAs,并预测活血荣络方可能通过调节"STAT3-miR-17"反馈环路发挥作用.将SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、活血荣络方组,运用线栓法建立脑缺血再灌注模型.造模前36、12 h及术后12 h给药.术后24 h行神经功能评分,并行TTC染色评估脑梗死体积;透射电镜观察自噬小体;Western blot检测线粒体及自噬相关蛋白,评估线粒体自噬情况;Real-time PCR检测"STAT3-miR-17"反馈环中miRNA、mRNA的表达.结果 与模型组相比,活血荣络方可明显改善模型大鼠神经功能损伤,减少脑梗死体积(P<0.01),下调p62、TOMM20的表达(P<0.05),上调LC3B的表达(P<0.01),增加损伤侧脑组织自噬小体;下调miR-17 miRNA的表达(P<0.01),上调STAT3 mRNA的表达(P<0.01).结论 活血荣络方可通过上调线粒体自噬发挥神经保护作用,其机制可能与调控"STAT3-miR-17"反馈环路相关.