目的 利用网络药理学及分子对接探究消渴清颗粒治疗糖尿病前期的作用机制.方法 通过中药系统药理学数据库搜索有关于消渴清颗粒中中药的有效成分与靶点,在GeneCards数据库、OMIM数据库搜索糖尿病前期的基因靶点,进而获得药物-疾病交集靶点,将交集靶点导入String蛋白质相互作用数据库和Cytoscape构建蛋白质相互作用(PPI)网络图,并筛选核心靶点,再将药物-疾病交集靶点导入DAVID数据库,对其分别进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,筛选出与疾病相关的通路,通过Cytoscape得出"通路-靶点"网络图,再通过插件分析得出"通路-靶点"网络核心靶点,取二者度值排名前 7 位的靶点交集作为消渴清颗粒治疗糖尿病前期的关键靶点,最后选择关键靶点与有效成分用AutoDock与Pymol软件进行分子对接及可视化.结果 筛选出消渴清颗粒中药活性成分 36 种,其中筛选出 6 种关键活性成分,分别为槲皮素、山柰酚、小檗碱、β-谷甾醇、花生四烯酸、知母皂苷C,靶点基因 232 个;筛选出糖尿病前期靶点 685 个,交集靶点 93 个,关键靶点 5 个,分别为肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-6(IL-6)、蛋白激酶B1(Akt1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、环加氧酶 2(PTGS2).GO通路富集主要涉及内容有炎症、药物反应,细胞生长凋亡等;KEGG 通路富集分析显示糖尿病并发症中的晚期搪基化终产物及其受体(AGE-RAGE)信号通路、TNF信号通路、缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、IL-17 信号通路、胰岛素抵抗通路、磷脂酰肌醇 3-激酶(PI3K)/Akt信号通路等,分子对接结果显示关键靶点与有效成分具有较稳定的结合能力.结论 消渴清颗粒中各种药物成分通过多靶点、多通路协同治疗糖尿病前期的作用机制,为进一步研究治疗糖尿病提供了线索.

2021 年全球糖尿病患病率达到5. 37 亿,预计到2030 年和2045 年,这一数字将分别增加到 5.8 亿和 7 亿[1]. 约 20％～40％的糖尿病患者并发糖尿病肾病(DKD),其表现为微量白蛋白尿,后逐渐进展为持续性蛋白尿、肾小球滤过率进行性降低.该病在西医治疗上主要以对症治疗等为主,目前尚无特效治疗. 而中医认为,DKD以消渴病为基础,继而引起 "尿浊" "水肿" "肾劳" "关格"等肾病相关病症[2]. 其病位涉及多脏腑的虚损,尤以肾脾为主,根据脾肾相生相克的关系,治疗上主张以脾代肾,以脾护肾[3]. 中医药益肾化湿颗粒以李东垣《脾胃论》中 "升阳益胃汤"原方为底,既能健脾生胃、祛风除湿,又可清热除湿、去浊升阳,故虽未见"治肾"而能"益肾",益肾化湿颗粒在临床应用中得到广泛认可,然其作用靶点与作用机制仍有待研究[4]. 本文拟对益肾化湿颗粒治疗DKD作用机制的研究进展进行阐述.

目的:通过研究降糖消渴颗粒含药血清对INS-1细胞FoxO1因子表达的影响,探讨降糖消渴颗粒含药血清保护胰岛β细胞的分子机制.方法:通过慢病毒转染的方法制备FoxO1高表达INS-1稳定细胞株,以2.5μg/mL四环素干预12 h诱导FoxO1高表达以成模.以10%的降糖消渴颗粒含药血清干预细胞模型24 h,正常鼠血清作对照.高倍镜下观察细胞形态,MTT法计算细胞存活率,全自动生化仪检测细胞培养液中葡萄糖含量以计算葡萄糖消耗量,Elisa法检测细胞胰岛素分泌量,Western blot检测细胞中FoxO1总蛋白表达水平及其磷酸化水平,以qRT-PCR检测FoxO1mRNA表达情况.结果:高倍镜下观察细胞形态、细胞存活率均无统计学意义.降糖消渴颗粒含药血清组葡萄糖消耗量与细胞胰岛素分泌量均显著升高(P<0.01).Western-blot结果显示FoxO1总蛋白表达无统计学意义(P>0.05),而p-FoxO1蛋白表达增加(P<0.05).qRT-PCR结果显示FoxO1mRNA表达量稍有降低,但差异没有统计学意义(P>0.05).结论:降糖消渴颗粒含药血清不能降低INS-1细胞FoxO1蛋白表达水平,但能促进FoxO1磷酸化,进而达到改善胰岛β细胞功能的作用.

目的 消渴蛋白I号颗粒稳定可靠的质量标准建立及提取工艺的优化.方法 五倍子、丹参、陈皮采用薄层色谱法进行定性鉴别;水煎煮工艺的优化采用正交试验法.结果 薄层色谱定性鉴别方法,重现性好,阴性无干扰,专属性强.煎煮工艺确定为煎煮提取3次,每次2 h,加水量为8倍;湿法制粒的辅料为乳糖,乳糖与稠膏质量比为2:1;颗粒溶化性、成型性好;结论 五味子、丹参、陈皮薄层色谱检验方法专属性强,重现性好,斑点清晰,阴性无干扰.消渴蛋白I号颗粒的制备工艺简便,适合工业化生产.

目的 探究益气活血中药消渴通痹颗粒对体外高糖环境下内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)迁移及管腔形成的影响.方法 选取24只清洁级SD大鼠,随机分为空白组(6只)与给药组(18只).给药组随机均分为3组,分别按消渴通痹颗粒大、中、小剂量给药设为大、中、小剂量组,空白组饲喂等量生理盐水,连续给药7 d后采血并离心制备血清.空白组血清随机均分为2组,一组是加入伊红美蓝培养基-2(eosin-methylene blue medium-2,EBM-2)完全培养液为对照组;另一组是加入30 mmol/L葡萄糖的EMB-2完全培养液为高糖对照组.给药组血清均分别加入30 mmol/L葡萄糖的EMB-2完全培养液;抽取小鼠骨髓,从中分离EPCs,进一步制备细胞悬液,培养后用CD34抗体及DAPI进行染色鉴定并观察不同组培养液中其迁移能力及管腔形成能力.结果 高糖对照组EPCs迁移数低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),大、中、小剂量组EPCs迁移数高于高糖对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);大、中、小剂量组管状形成百分比均高于高糖对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 高糖环境下,消渴通痹颗粒能显著改善EPCs迁移的能力与迁移数,改善EPCs管腔形成的能力.

目的:观察消渴通痹颗粒含药血清对高糖环境下EPCs PI3K/Akt/eNOS分子信号通路的影响.方法:体外培养并鉴定大鼠骨髓EPCs,制备消渴通痹颗粒含药血清,对EPCs进行不同高糖血清或PI3K抑制剂Wortmannin及eNOS抑制剂L-NAME的干预,检测EPCs的增殖及小管形成能力,Western-blot检测Akt、p-Akt及eNOS、p-eNOS蛋白表达.结果:与对照组比较,消渴通痹颗粒含药血清能促进EPCs的增殖及小管形成,不同浓度的消渴通痹颗粒含药血清预处理后在一定程度上阻止了AKT,p-AKT,eNOS,p-e NOS水平的下降(P＜0.05).结论:消渴通痹颗粒可能通过上调PI3K/Akt/eNOS分子信号通路相关蛋白的表达水平,促进高糖环境下EPCs增值和小管形成.

目的:通过研究降糖消渴颗粒含药血清对INS-1细胞PI3K/AKT/FOXO1通路中相关蛋白与基因表达的影响,探讨降糖消渴颗粒含药血清保护胰岛B细胞的分子机制.方法:选取FOXO1高表达INS-1稳定细胞株,分别以1％ 、5％ 、10％ 、15％ 、20％ 不同浓度降糖消渴颗粒含药血清干预,用MTT法计算细胞成活率以观察药物毒性,分别检测各组细胞中总FOXO1蛋白水平以确定最佳药物浓度开展后续实验.细胞用或不用PI3K抑制剂LY294002干预后,以Western blotting检测细胞中总FOXO1、p-FOXO1、Akt、p-Akt和细胞核内外的FOXO1、p-FOXO1的蛋白表达,qRT-PCR检测FOXO1mRNA和AktmRNA含量.结果:不同浓度含药血清对细胞均无毒性,其中10％ 为最佳药物干预浓度.10％ 含药血清使磷酸化FOXO1和Akt的表达升高;在胞质和胞核中,10％ 含药血清使FOXO1的表达降低,磷酸化表达升高,抑制剂LY294002使FOXO1和p-FOXO1表达均降低.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,Akt mRNA表达升高,FOXO1mRNA表达降低,抑制剂使FOXO1mRNA表达降低,结果与Western blotting结果一致.结论:降糖消渴颗粒含药血清可通过PI3K/AKT/FOXO1通路促进FOXO1磷酸化出核以抑制FOXO核转录实现保护胰岛B细胞的作用.

目的:建立电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS法)测定消渴清颗粒的5种原料药材苍术、蒲黄、知母、黄连和地锦草中15种重金属及有害元素含量,并对测定结果进行不确定度评估.方法:采用ICP-MS(KED模式)联合微波消解法,分析测定流程,建立数学模型,根据JJF1059.1-2012《测量不确定度的评定与表示》对测量结果的各不确定度来源进行分析和评估,并计算合成不确定度.结果:实验建立的15种重金属及有害元素检测方法具有良好的线性关系,且重复性和精确度良好,线性系数均大于0.992,RSD低于5.0％,加样回收率在87％～115％之间.其不确定度主要来源于曲线拟合和微波消解过程.15种重金属及有害元素含量的合成不确定度分别为V 2.93％,Cr 4.43％,Ni 2.65％,Cu 5.70％,As 6.92％,Mo 2.02％,Ru 1.76％,Rh 2.07％,Pd9.39％,Cd 2.75％,Os 4.72％,Ir 1.41％,Pt 7.31％,Hg 3.29％,Pb 4.28％.结论:ICP-MS法对消渴清颗粒原料药材中15种重金属及有害元素的测量中,可通过优化曲线拟合及微波消解过程从而减小不确定度的值.

目的 研究消渴康颗粒联合甘精胰岛素对糖尿病患者的临床疗效.方法 68例患者随机分为对照组(36例)和观察组(32例),对照组给予甘精胰岛素,观察组在对照组基础上加用消渴康颗粒,疗程3个月.然后,检测临床疗效、血清指标(RBP4、A-FABP、β-arrestin2)、血糖指标(HbAlc、FBC、2 hPG)、胰岛素指标(FINS、HOMA-ISI、HOMA-β、HOMA-IR)、血液流变学指标(血浆黏度、全血低切、全血高切)、肾功能指标(Scr、BUN、UAER).结果 观察组总有效率显著高于对照组(P＜0.05).治疗后,2组血糖指标、HOMA-IR、血液流变学指标、肾功能指标及RBP4、A-FABP、FINS水平显著降低(P＜0.05),β-arrestin2水平、HOMA-ISI、HOMA-β显著升高(P＜0.05),以观察组更明显(P＜0.05).结论 消渴康颗粒联合甘精胰岛素能有效降低糖尿病患者血清RBP4、A-FABP水平,升高血清β-arrestin2水平,改善胰岛素抵抗和临床症状.

骨质疏松症是老年糖尿病严重的合并症之一,糖尿病患者尿糖增高会导致肾小管对钙、磷、镁的重吸收功能减弱,最终导致血清钙、磷含量降低,甲状旁腺因受到低血钙、低血镁的刺激导致甲状旁腺激素(PTH) 分泌增多,进而影响破骨细胞活性增强,骨量丢失严重,导致骨质疏松[1].2型糖尿病患者随着年龄增大,病程时间长,成骨细胞数目减少,作用减弱,更易发生骨质疏松[2].阿仑膦酸钠是治疗、预防骨质疏松症的有效药物.糖尿病属中医学"消渴"范畴,消渴以阴虚为本、燥热为标.糖脉康颗粒主要有养阴清热,活血化瘀,益气固肾的功效.本课题主要选取90例老年2型糖尿病合并骨质疏松症患者加以治疗,对患者的治疗效果加以有效分析,报告如下.