目的:探讨灯盏花素上调核因子E2相关因子2/血红素氧合酶-1(Nrf2/HO-1)通路抑制大鼠液压冲击脑损伤内质网应激介导凋亡的具体机制。方法:72只成年雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和灯盏花素组。应用Dixon法制作颅脑损伤模型，造模后24 h用改良大鼠神经功能缺损评分(mNSS)、干湿重法、蛋白印迹法(Western blot)和原位缺口末端标记法(TUNEL)法分别评价动物神经功能障碍、脑组织含水量、内质网应激介导凋亡标志蛋白[葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-12]、Nrf2/HO-1通路关键蛋白[Nrf2、HO-1和醌氧化还原酶1(NQO-1)]表达以及神经细胞凋亡变化。组间比较差异性分析采用Student’s t检验。 结果:灯盏花素组造模后24 h大鼠mNSS评分[(8.12±1.76)分比(9.89±1.64)分， t＝2.549， P<0.05]和脑组织含水量[(80.01±2.12)%比(83.88±5.74)%， t＝2.187， P<0.05]均明显低于模型组。Western blot结果显示灯盏花素能够抑制GRP78(4.07±0.68比5.74±0.98， t＝4.850， P<0.05)、CHOP(1.01±0.18比1.38±0.21， t＝4.634， P<0.05)、Caspase-12(0.55±0.11比1.11±0.13， t＝10.391， P<0.05)和Caspase-3(0.77±0.12比1.10±0.21， t＝4.726， P<0.05)蛋白表达并减轻神经细胞凋亡(24.26±4.38比32.14±6.87， t＝3.350， P<0.05)，同时上调Nrf2(胞核)(0.21±0.04比0.15±0.03， t＝4.157， P<0.05)、HO-1(0.31±0.05比0.21±0.05， t＝5.941， P<0.05)和NQO-1(0.27±0.05比0.20±0.00， t＝4.159， P<0.05)。 结论:灯盏花素通过激活Nrf2/HO-1通路抑制内质网应激介导凋亡发挥神经保护作用。

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）特异性抑制剂RGFP966对创伤性脑损伤（TBI）大鼠早期脑损伤的神经保护作用及其机制。方法:将48只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、TBI组、TBI+溶媒对照组、TBI+RGFP966组，每组12只。后3组大鼠采用液压冲击脑损伤法建立TBI模型，其中TBI+RGFP966组于造模后30 min经腹腔注射RGFP966（溶于1%DMSO中，剂量为10 mg/kg，2次/d，共给药3 d），TBI+溶媒对照组同期注射等量DMSO。于造模后第3天，分别应用改良神经功能缺损评分（mNSS）评估各组大鼠的神经功能，干湿重法检测各组大鼠损伤侧大脑皮层含水量，尼氏染色检测各组大鼠损伤侧额叶皮层组织中损伤神经元比例，免疫组化染色及Western blotting检测各组大鼠损伤侧额叶皮层组织中HDAC3及焦亡相关蛋白表达，ELISA法检测各组大鼠血清中炎性因子含量。结果:造模后第3天，与TBI+溶媒对照组比较，TBI+RGFP966组大鼠mNSS评分[(9.83±0.75)分 vs.(6.67±0.82)分]、脑组织含水量[(82.73±0.36)% vs. (80.92±0.66)%]明显下降，损伤神经元比例[(75.60±7.44)% vs. (55.87±4.10)%]明显下降，HDAC3蛋白表达明显下降（0.67±0.09 vs. 0.51±0.07），乙酰化H3、乙酰化H4蛋白表达明显上升（0.81±0.02 vs. 1.22±0.02；0.74±0.01 vs. 1.07±0.02），核因子-κB（NF-κB）（1.20±0.05 vs. 0.94±0.04）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）（0.72±0.02 vs. 0.40±0.03）、活性含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1、消皮素D N-末端片段（GSDMD-N）（0.71±0.03 vs. 0.52±0.01）蛋白表达明显下降，NF-κB、NLRP3免疫组化染色评分明显下降，肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β、白细胞介素-18含量明显下降，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:TBI后早期应用RGFP966干预可以减轻神经细胞焦亡和炎症反应，发挥神经保护作用，其机制可能与抑制NF-κB/NLRP3/GSDMD通路激活有关。

目的:探讨灯盏花素上调核因子相关因子-2(Nrf2)通路抑制大鼠液压冲击脑损伤后脑组织炎性损伤的具体机制。方法:成年雄性SD大鼠36只(河北医科大学实验动物中心)，应用Dixon法制作颅脑损伤模型，造模后24 h用干湿重法、酶联免疫吸附试验(ELISA)法和蛋白质印迹法(Western blot)分别测定脑组织含水量、炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及胞核Nrf2、血红素氧化酶1(HO-1)、磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶1(NQO-1)蛋白表达。应用SPSS 22.0统计软件分析，计量资料用均值±标准差( Mean± SD)表示，组间比较差异性分析采用Student’s t检验。 结果:与模型组[创伤性脑损伤(TBI)组]比较，灯盏花素组(Bre组)造模后24 h脑组织含水量[(81.82±2.64)%比(83.04±1.89)%， t＝2.335， P<0.05]和改良大鼠神经功能缺损评分(mNSS)[(7.98±1.68)分比(9.61±1.74)分， t＝5.271， P<0.05]均明显降低；ELISA结果显示Bre组炎性因子IL-1β[(834.19±95.68) ng/L比(1213.35±167.72) ng/L， t＝6.802， P<0.05]、IL-6[(627.82±86.54) ng/L比(1336.72±198.25) ng/L， t＝9.643， P<0.05]和TNF-α[(586.64±76.98) ng/L比(1416.67±136.85) ng/L， t＝10.312， P<0.05]表达明显降低；Western blot结果显示Bre组胞核Nrf2[(1.52±0.34)比(0.49±0.09)， t＝5.139， P<0.05]、HO-1[(0.87±0.21)比(0.49±0.09)， t＝5.762， P<0.05]和NQO-1[(1.46±0.36)比(0.99±0.19)， t＝4.998， P<0.05]蛋白表达明显上调。 结论:灯盏花素通过激活Nrf2-抗氧化元件(ARE)信号系统，上调下游抗氧化蛋白HO-1和NQO-1，抑制炎性损伤。

目的 探讨抑制S100B对大鼠重型颅脑损伤(sTBI)后继发性损伤的影响及机制.方法 采用液压冲击法建立大鼠sT-BI模型,腹腔注射ONO-2506抑制S100B表达,免疫印迹法检测S100B表达表达水平,ELISA检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)变化,干湿重法检查组织含水量,HE染色分析组织病理变化.结果 大鼠血清、脑组织、肺组织S100B蛋白、MDA水平伤后1h开始上升,伤后6h达峰值(P<0.05);而SDO水平后1h开始降低,伤后6h最低(P<0.05).抑制S100表达,明显减轻脑组织和肺组织结构损伤,明显降低脑组织和肺组织含水量(P<0.05),明显降低MDA水平(P<0.05),明显增加SOD水平(P<0.05).结论 抑制S100B明显减轻大鼠sTBI脑组织和肺组织损伤,其机制可能与抑制氧化应激反应有关.

目的 探讨轻型颅脑损伤(TBI)后神经元及星形胶质细胞改变的病理生理过程.方法 将24只成年SD大鼠随机分为轻型TBI组(n=18)和假手术组(n=6),轻型TBI组又分为伤后3 h(n=6)、伤后24 h(n=6)、伤后72 h(n=6)三亚组.采用液压冲击法制作轻型TBI模型.采用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色检测星形胶质细胞,采用Fluoro-Jade B(FJ-B)荧光染色检测变性神经元.结果 与假手术组相比,轻型TBI后3 h、24 h、72 h邻近顶叶皮质、海马CA2/3区GFAP阳性细胞数量均明显减少(P<0.05);缺失区周围星形胶质细胞肿胀增生明显.FJ-B阳性神经元在损伤后3 h无明显增加(P>0.05),伤后24 h皮层区FJ-B阳性神经元显著增加(P<0.05),伤后72 h海马区FJ-B阳性神经元显著增加(P<0.05).伤后72 h伤侧皮层区与海马区GFAP阳性细胞数和FJ-B阳性细胞数呈显著负相关(r=-0.8285,P<0.05).结论 轻型TBI后星形胶质细胞超急性期(3 h)即出现损害和胶质反应,神经元则在急性期(24 h)至亚急性期(72 h)出现明显损害,星形胶质细胞缺失程度可以反应神经元损伤程度.

目的 探讨亚低温(MHT)对大鼠颅脑创伤(TBI)后海马齿状回区(DG)新生神经元长期存活及成熟的影响.方法 59只健康成年SD大鼠随机分为假手术(sham)组、TBI组及TBI+MHT组,sham组15只,其余两组各22只.TBI大鼠模型借助液压冲击脑损伤仪建立,打击压力设置为2.0 atm(1 atm=101.325 kPa).TBI+MHT组大鼠在损伤后立即接受MHT,降温后直肠目标温度为33.5℃,维持4 h,并于1.5 h内缓慢复温至37℃.在不同时间点应用Morris水迷宫试验,mNSS评分比较大鼠神经功能恢复情况,免疫荧光染色等方法检测各组海马新生神经元长期存活及成熟情况.结果 与TBI组比较,TBI+MHT组大鼠伤后4周的逃避潜伏期明显缩短,平台穿越次数及目标象限停留时间均显著增加(P<0.05).损伤后1、2、4周TBI+MHT组大鼠较TBI组mNSS评分均降低(P<0.01).与sham组比较,损伤后1、4、8周TBI组和TBI+MHT组大鼠损伤侧海马DG区BrdU阳性细胞数及BrdU/NeuN双阳性细胞数均增加(P<0.05),且TBI+MHT组较TBI组增加更明显(P<0.05).此外,与损伤后1周相比,损伤后4周及8周TBI组BrdU/NeuN双阳性细胞数减少,而TBI+MHT组进一步增加(P<0.05).结论 MHT可促进TBI后新生神经元的长期存活及成熟,促进TBI后神经功能恢复.

目的 研究轻型颅脑损伤的病理变化和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) 的表达.方法 收集32只成年大鼠, 随机分为假手术组 (n=8) 、伤后1 d组 (n=8) 、伤后3 d组 (n=8) 和伤后7 d组 (n=8) .损伤组采用液压冲击设备建立大鼠轻型闭合性颅脑损伤模型, 假手术组仅切开头皮并钻孔.免疫组化方法检测脑组织中星形细胞特异性标志物GFAP的表达, Fluoro-Jade B (FJ-B) 免疫荧光检测脑组织中神经元急性损伤程度, ELISA法测定尾静脉的血清GFAP水平, 观察损伤后脑组织神经元和星形细胞改变, 并分析血清GFAP水平和神经元损伤程度间的关系.结果 与假手术组比较, 伤后1、3、7 d邻近顶叶皮质GFAP阳性染色的星形细胞数量减少 (P＜0.05) ;伤后1、3、7 d可见星形细胞肿胀增生.伤后1 d皮质FJ-B阳性染色神经元轻度增加, 伤后3、7 d明显增加 (P＜0.05) .伤后1 d血清GFAP水平较假手术组明显增加 (P＜0.05) , 伤后3、7 d回落至正常水平;伤后1 d血清GFAP水平与伤后7 d皮质区损伤神经元计数呈正相关 (r=0.8095, P＜0.05) .结论 轻型颅脑损伤后急性期发生星形细胞破坏伴胶质反应及血清标志物GFAP增加, 亚急性期发生神经元变性损伤.急性期血清GFAP水平可以预测中枢神经元损伤程度.

目的 探讨亚低温能否通过减轻海马神经元细胞凋亡促进创伤性脑损伤(TBI)后海马齿状回区神经再生及认知功能恢复,并探讨其可能机制.方法 健康成年SD大鼠66只,按随机数字表法分为假手术组、TBI组及TBI+亚低温组,每组22只.采用液压冲击仪建立大鼠TBI模型,TBI+亚低温组在伤后立即接受亚低温(33.5℃)治疗4 h.5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)腹腔注射标记有丝分裂细胞.Morris水迷宫试验评估大鼠空间学习和记忆能力,免疫荧光染色观察伤后7 d及28 d大鼠海马齿状回区BrdU、微管相关蛋白(DCX)、神经元特异性核蛋白(NeuN)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)及剪切活化caspase-3表达情况,Western blot检测大鼠海马凋亡相关蛋白——自杀相关因子(FAS)/自杀相关因子配体(FASL)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、caspase-3及剪切活化caspase-3表达情况.结果 与TBI组比较,TBI+亚低温组伤后28 d水迷宫试验的逃避潜伏期显著缩短[(24.2±5.9)s:(18.0±4.1)s],目标象限停留时间、平台穿越次数明显增加[(24.9±6.5)s:(31.7±5.2)s、(1.9±0.8)次:(3.5±1.2)次](P<0.05).与假手术组比较,TBI组及TBI+亚低温组伤后7 d海马齿状回区BrdU+新生细胞数[(9.4±4.1)个:(33.4±3.8)个、(9.4±4.1)个:(45.8±5.6)个]、伤后7 d BrdU+/DCX+新生神经元细胞数[(2.0±0.6)个:(9.6±1.6)个、(2.0±0.6)个:(19.2±3.7)个]及伤后28 d BrdU+/NeuN+成熟神经元细胞数[(2.6±1.0)个:(17.2±3.9)个、(2.6±1.0)个:(33.6±9.1)个]均显著增加,且TBI+亚低温组较TBI组增加更为明显(P均<0.01).与伤后7 d比较,伤后28 d TBI+亚低温组海马齿状回区BrdU+新生细胞数进一步增加,但TBI组BrdU+新生细胞数减少[(45.8±5.6)个:(58.8±9.2)个、(33.4±3.8)个:(22.0±3.5)个](P<0.05或<0.01).与假手术组比较,TBI组伤后7 d损伤侧海马齿状回区剪切活化caspase-3+NeuN+及caspase-3+NeuN+凋亡神经元细胞数显著增多[(2.0±0.9)个:(11.6±2.6)个、(2.6±1.0)个:(10.2±2.9)个],而TBI+亚低温组较TBI组剪切活化caspase-3+NeuN+凋亡神经元细胞数减少[(6.6±2.0)个:(11.6±2.6)个](P均<0.05).与TBI组比较,TBI+亚低温组损伤侧海马FAS、FASL、剪切活化caspase-3及caspase-3表达均下调,Bcl-2表达上调(1.54±0.15:1.14±0.12、1.06±0.04:0.80±0.09、0.84±0.03:0.62±0.08、0.93±0.06:0.86±0.09、0.71±0.01:1.58±0.18](P均<0.05).结论 亚低温可能通过剪切活化caspase-3、FAS/FASL及Bcl-2途径减轻TBI后海马神经元细胞凋亡,促进TBI后海马齿状回区神经元细胞再生及成熟,进而促进大鼠认知功能恢复.提示亚低温诱导的抗海马细胞凋亡及促神经元细胞再生及成熟作用可能对TBI患者预后具有潜在预测作用.

创伤性脑损伤(TBI)是一个全球严峻的公共卫生和社会经济问题,致残、致死率高.目前有以下几种TBI动物模型被广泛应用于实验研究:重物坠落损伤模型,液压冲击损伤模型,控制性皮质损伤模型,穿透弹道式脑损伤模型性,爆炸伤模型.虽然TBI动物模型复制了临床上观察到的大部分的组织病理学和功能结果,但现有的动物模型不能完全复制人类TBI,研究人员在使用实验性TBI模型时需要谨慎考虑,以确保选择最合适的模型来解决研究问题.文章将对这5种模型的造模原理和特点进行综述.

目的 探讨大鼠颅脑液压冲击伤脑损伤半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-12蛋白及其mRNA的表达变化及其意义.方法 成年雄性SD大鼠48只应用Dixon法制作颅脑损伤模型,造模后6、12、24h、3d用免疫组织化学方法、蛋白质印迹法(Western blot)以及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)分别测定Caspase-12蛋白及其mRNA的表达,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)测定神经细胞凋亡变化.应用SPSS 22.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较差异性分析采用Student's t检验.结果 与假手术组(Sham组)比较,模型组(TBI组)自伤后6h,损伤灶周脑组织Caspase-12蛋白开始增加[积分吸光度(IA)0.165±0.021],24 h达高峰(0.489±0.034),3d开始下降(0.258±0.027),差异有统计学意义(￡=2.293、4.594、6.488、3.605,P＜0.05).Western blot进一步印证了Caspase-12蛋白变化趋势.Caspase-12 mRNA于伤后6h开始增加(0.626±0.054),12 h达高峰(0.867±0.048),持续至3d后下降(0.764±0.077),差异有统计学意义(t=2.326、4.185、3.607、2.215,P＜0.05);TUNEL发现神经细胞凋亡指数(AI)自6h开始增高(22.372 ±3.304),24h达到峰值(55.222 ±4.123),3d时出现下降(28.226±3.273),差异有统计学意义(t=3.093、6.224、6.984、4.133,P＜0.05).结论 内质网应激的特异性关键蛋白Caspase-12表达上调在液压冲击脑损伤的神经细胞凋亡中起重要作用.