目的:研究清肝益脾胶囊(Qinggan Yipi Capsules,简称QgYp)对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的保护作用,并初步探讨其通过调节肠道菌群改善HF的机制.方法:36只SD大鼠随机分成正常组、模型组、QgYp低剂量组、QgYp中剂量组、QgYp高剂量组和秋水仙碱组,腹腔注射四氯化碳油溶液构建HF大鼠模型,第4周后给予药物干预直至第8周;采用HE、Masson染色,光镜下观察病理变化;采用全自动生化分析仪检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)含量;采用ELISA检测血清透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC Ⅲ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)含量.另取24只SD大鼠随机分为正常组、模型组、QgYp中剂量组,同上方法建模与给药,于8周后收集盲肠内容物,采用16S rRNA测序技术检测肠道菌群.结果:与模型组相比,QgYp各组大鼠肝脏系数显著降低(P＜0.05),肝组织纤维病变和胶原纤维沉积显著改善(P＜0.05);QgYp中剂量组、QgYp高剂量组ALT、AST、HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C含量显著降低(P＜0.05),且2组差异无统计学意义(P＞0.05).肠道菌群检测结果显示,QgYp可增加HF大鼠肠道菌群的丰富度和多样性,改变肠道菌群组成(P＜0.01),增加有益菌g__norank f__norank o__Clostridia_UCG-014、阿克曼氏菌属的丰度占比,降低有害菌罗姆布茨菌属、经黏液真杆菌和狭义梭菌属1的丰度占比.结论:QgYp可改善四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化,其机制与调节肠道菌群多样性和丰度相关.

目的:探究清肝益脾胶囊通过抑制肝细胞铁死亡进而缓解抗结核药物性肝损伤的相关机制.方法:利用异烟肼(INF)和利福平(RFP)构建ATB-DILI小鼠动物模型.C57BL/6小鼠随机分为PBS对照组(NC组)、ATB-DILI组和Pro-tectant组,分别给小鼠灌胃PBS、INH+RFP和INH+RFP+清肝益脾胶囊.实验采用血清酶学检测ALT、AST、ALP含量,流式细胞术检测小鼠的TMRE、ROS、脂质过氧化水平和Fe2+浓度,RNA-seq测序检测基因表达情况,qPCR检测谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)和酯酰辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)的表达,Western blot检测GPX4和ACSL4蛋白表达,考察并记录小鼠体质量及生存状况,最后取小鼠肝脏作H&E染色行病理分析.结果:与ATB-DILI组小鼠相比,Protectant组小鼠生存期延长,生存率增加(P=0.001 3);Protectant组小鼠血清中ALT、ALP、AST含量较ATB-DILI组显著降低,有统计学差异(P=0.020 5,P=0.001 6,P=0.034 5);Protectant组小鼠脂代谢相关通路中的基因下调,其中,Fasn和Scd1显著下调(P=0.039 1,P=0.041 7);Protectant组小鼠的TMRE、ROS、脂质过氧化水平和Fe2+浓度增加得到改善;与ATB-DILI组小鼠相比,Protectant组小鼠ACSL4蛋白表达显著降低(P=0.000 03).结论:清肝益脾胶囊可以通过下调脂代谢相关通路中Fasn、Scd1、GPX4和ACSL4的表达,减少ALT、AST、ALP表达,降低肝脏铁死亡,从而改善肝脏脂代谢紊乱,缓解抗结核药物性肝损伤,显著提高模型小鼠的生存率.

目的 优化清肝益脾胶囊的成型工艺.方法 用单因素实验筛选辅料种类、辅料比例、润湿剂种类及用量;以药物辅料比、润湿剂用量、干燥时间和干燥温度为影响因素,以吸湿率、成型率和休止角为评价指标,应用正交实验优选颗粒成型工艺.结果 辅料最优条件为乳糖与可溶性淀粉用量比为2:1,药物辅料比为4:1,润湿剂为体积分数为85％的乙醇,比例为60％,过20目筛,50℃干燥2 h,平均休止角为29.60°,颗粒平均成型率为78.65％,临界相对湿度为68.74％,平均吸湿率为6.83％.结论 该成型工艺合理,可为清肝益脾胶囊的工业生产提供依据.

目的 观察参竹降糖方对气阴两虚型高血糖大鼠免疫内分泌及骨骼肌胰岛素抵抗的影响.方法 根据基础血糖值将SD大鼠分为空白组、复合模型组、阳性药组,以及参竹降糖方高、中、低剂量组共6组,每组15只.采用力竭游泳、甲状腺素(thyroxine,T4)皮下注射、连续高脂饲料合并链脲佐菌素(streptozotoci,STZ)注射复合因素造模.造模同时灌胃给药33天,阳性药组予十味消渴胶囊1.32 g/kg,参竹降糖方高、中、低剂量组分别予参竹降糖方混悬液7.5 g/kg、2.5 g/kg、1.25 g/kg,空白组不做处理,模型对照组给予同体积溶剂.采用比色法测定血清肝糖原、肌糖原、游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、三磷酸腺苷酶(adenosine triphosphatase,ATPase)免疫及代谢相关指标水平;ELISA法检测促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)、睾酮(testosterone,T)、雌二醇(estradiol,E2)激素水平及骨骼肌白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)炎症因子含量;比色法检测骨骼肌丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)氧化应激水平;Western Blot检测骨骼肌胰岛素受体(insulin receptor,InsR)、胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate1,IRS1)、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)蛋白表达水平.结果 与模型组相比,参竹降糖方各剂量组大鼠血清FFA、E2、TSH,骨骼肌MDA、IL-6、IL-1β、TNF-α水平显著降低(P<0.01),血清肝糖原、肌糖原、IgG、IgM、T、ATP、ATP酶和骨骼肌SOD、GSH-PX,以及InsR、IRS1、PI3K、GLUT4蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01).结论 参竹降糖方能够改善气阴两虚型高血糖大鼠糖脂代谢,其作用机制可能是通过抑制骨骼肌的氧化应激和炎症反应,恢复骨骼肌胰岛素信号通路的传导,缓解胰岛素抵抗,达到调控血糖血脂稳定的作用.且可通过健脾益气养阴生津,调节能量代谢、免疫功能、激素分泌等多个环节,达到综合治疗的目的.

目的 建立同时测定清肝益脾胶囊中靛蓝和靛玉红含量的高效液相色谱法.方法 色谱柱为Hypersil ODS2柱(250 mm × 4.6mm,5 μm),流动相为甲醇-水(70∶30,V/V),流速为1.0mL/min,检测波长为290nm,柱温为30℃,进样量为10μL.结果 靛蓝和靛玉红质量浓度分别在7.63～122.00 μg/mL、5.00～80.00μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(R2≥0.999 8);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于3.0％;平均加样回收率分别为96.93％和98.40％,RSD分别为1.36％和1.42％(n=6).结论 所建立的方法简便,结果准确,重复性好,可用于清肝益脾胶囊的质量控制.