目的 运用网络药理学方法和分子对接技术探讨滋肾健脾化瘀片(山萸肉、三七、黄芪、葛根、鸡血藤、生地黄)治疗糖尿病视网膜病变(DR)的作用机制,并通过体外实验进行验证.方法 (1)利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)及BATMAN-TCM数据库筛选滋肾健脾化瘀片的有效成分及其对应的靶点蛋白.利用GeneCards、OMIM及TTD数据库检索DR疾病相关靶点.利用VENNY 2.1.0 平台对药物活性成分靶点与DR疾病相关靶点取交集(共同靶点),即为滋肾健脾化瘀片治疗DR的潜在作用靶点.构建"中药-活性成分-共同靶点"网络,筛选出滋肾健脾化瘀片治疗DR的关键活性成分.将共同靶点导入STRING数据库,获取PPI网络关系,并筛选出核心靶点.运用Metascape平台对共同靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析.将关键活性成分及核心靶点通过Autodock 4 软件进行分子对接验证.(2)制备滋肾健脾化瘀片含药血清及空白血清.将人视网膜微血管内皮细胞(HRmECs)随机分成 5 组:对照组(低糖DMEM培养基+10%空白血清)、高糖组(高糖DMEM培养基+10%空白血清)及滋肾健脾化瘀片含药血清低、中、高剂量组(高糖DMEM培养基+10%低、中、高剂量含药血清),培养 48 h 后进行检测.采用 CCK-8 法检测 HRmECs 细胞增殖活性;RT-qPCR 法检测HRmECs细胞中IL-1β、AKT1、VEGFA、TP53 mRNA表达水平.结果 (1)共筛选出滋肾健脾化瘀片治疗DR的潜在作用靶点(共同靶点)74 个;9 个关键活性成分包括槲皮素、芒柄花黄素、毛地黄黄酮、β谷甾醇、山柰酚、毛蕊异黄酮、γ-氨基丁酸、豆甾醇、异鼠李亭;12 个核心靶点:IL-1β、PPARG、NOS3、CXCL8、IL-6、AKT1、TNF、INS、EGF、VEGFA、TP53、PTGS2.GO功能及KEGG富集分析显示核心靶点主要参与了炎症反应、蛋白质磷酸化的正调控、细胞迁移等生物过程,以及 NF-κB 信号通路、AGE-RAGE信号通路、HIF-1 通路、TNF通路、PI3K-AKT通路等.关键活性成分与核心靶点均具有较好的结合亲和力.(2)与对照组比较,高糖组HRmECs细胞活性显著降低(P＜0.01);细胞中VEGFA、TP53、IL-1β mRNA表达水平显著升高(P＜0.01),AKT1 mRNA表达水平显著降低(P＜0.01).与高糖组比较,滋肾健脾化瘀片含药血清低、中、高剂量组的HRmECs细胞活性均显著升高(P＜0.05,P＜0.01),并呈浓度依赖性;含药血清高剂量组细胞的VEGFA、TP53、IL-1β mRNA表达水平显著降低(P＜0.05,P＜0.01),而 AKT1 mRNA表达水平显著升高(P＜0.01).结论 滋肾健脾化瘀片可能通过槲皮素、山柰酚、毛地黄黄酮等多种活性成分,作用于IL-1β、IL-6、VEGFA等核心靶点,以及NF-κB信号通路、AGE-RAGE信号通路、PI3K-AKT通路等关键通路,从而发挥对DR的治疗作用.

目的 观察滋肾健脾化瘀片联合激光光凝治疗对糖尿病黄斑水肿(DME)患者黄斑区视网膜厚度及血清NOS、VEGF、IL-6的影响.方法 选取DME患者42例(42眼),按数字随机表法随机分为激光组21例(21只眼)和联合组21例(21只眼).激光组予视网膜激光光凝治疗,联合组口服滋肾健脾化瘀片联合视网膜激光光凝治疗,疗程为2个月.观察OCT黄斑变化,血清NOS、VEGF、IL-6水平变化.结果 治疗后,两组患者黄斑水肿都有减轻(P<0.05);两组黄斑水肿改善值比较,联合组黄斑水肿消退厚度大于激光组,差异有统计学意义(P<0.05);激光组治疗前后患者血清NOS、VEGF、IL-6水平变化无统计学意义(P>0.05);联合组治疗后患者血清中NOS水平升高,而VEGF和IL-6水平降低,治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 滋肾健脾化瘀片能减轻黄斑区视网膜水肿,提高DME患者的血清NOS活性,抑制血清VEGF、IL-6含量;激光光凝联合口服滋肾健脾化瘀片治疗DME效果优于单纯激光治疗.

目的:观察滋肾健脾化瘀方对复发性流产脾肾两虚、血瘀阻络证患者凝血功能的影响,探求其作用机制.方法:将105例符合条件的患者随机分为A组,B组和C组,各35例.分别给予滋肾健脾化瘀方、阿司匹林片、低分子量肝素钙.观察各组患者治疗前后中医辨证“数堕胎”脾肾两虚、血瘀阻络证量表(中医证候)评分,凝血功能[部分纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1),活化部分凝血活酶时间(APTT),凝血酶时间(TT),纤维蛋白原(FIB),组织型纤溶酶原活化因子(t-PA),凝血酶原时间(PT),D-二聚体(D-D),组织因子(TF),纤维蛋白肽A(FPA),狼疮抗凝物质(LA),活化蛋白S(PS),活化蛋白C(PC),抗心磷脂抗体(ACA),血小板聚集功能(PAF),纤维蛋白原(Fig),纤溶酶-抗纤溶酶复合物(PAP),凝血酶原片段(F1+2),血小板α颗粒膜糖蛋白-140(GMP-140),抗凝血酶(AT),血酶-抗凝血酶复合物(TAT)];比较各组有效率和不良反应发生率.结果:A组总有效率84.4％,高于B组的58.1％和C组的60.6％ (P＜0.05).与治疗后B组比较,A组PAI-1,PAF,F1 +2降低,ACA,PS,PC,Fig,AT升高(P＜0.05).与治疗后C组比较,A组FIB,D-D,LA,ACA,PAF,F1 +2,TAT降低,TT,PC,Fig,AT升高(P＜0.05).A组总不良反应发生率3.1％,低于B组的38.7％和C组的30.3％(P＜0.05).结论:滋肾健脾化瘀方可明显改善复发性流产脾肾两虚、血瘀阻络证患者临床症状和凝血功能,不良反应发生率低.

目的 探讨滋肾健脾化瘀片改善糖尿病大鼠早期视网膜病变的作用机制.方法 将28只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组及滋肾健脾化瘀片高、低剂量(2.4、0.6 g·kg-1)组.采用腹腔注射2％链脲佐菌素(STZ,60 mg·kg-1)建立糖尿病大鼠模型.灌胃给药(9.6 mL·kg-1),每日1次,连续给药10周.采用HE染色法观察视网膜组织病理学变化,进行视网膜神经节细胞(RGC)计数;免疫组化法检测大鼠视网膜血管内皮生长因子(VEGF)、核因子 κB(NF-κB)及糖基化终产物受体(RAGE)蛋白表达水平;ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、糖基化终产物(AGEs)水平.结果 与空白组比较,模型组大鼠的视网膜神经节细胞层排列紊乱、内外核层水肿、空泡化改变并且视网膜的厚度变薄,RGC数量明显减少(P<0.05);视网膜VEGF、RAGE、NF-κB蛋白表达和血清AGEs、IL-1β、IL-6水平明显上调(P<0.05).与模型组比较,滋肾健脾化瘀片高剂量组大鼠的视网膜层结构、排列以及水肿程度得到了一定改善,RGC数量明显增多(P<0.05),视网膜VEGF、RAGE、NF-κB蛋白表达和血清AGEs、IL-1β、IL-6水平明显下调(P<0.05);滋肾健脾化瘀片低剂量组大鼠的视网膜RGC数量亦明显增多(P<0.05),血清AGEs表达水平明显降低(P<0.05).结论 滋肾健脾化瘀片可改善糖尿病大鼠视网膜内、外核层的水肿情况,减少神经节细胞的丢失,其机制可能与抑制AGEs/RAGE/NF-κB通路来下调炎症因子的表达有关.

目的 探讨口服滋肾健脾化瘀片联合玻璃体腔注射康柏西普(IVC)治疗对糖尿病视网膜病变(DR)患者房水中细胞因子的影响.方法 采用真实世界前瞻性研究.纳入2019年3月—12月在广州中医药大学第一附属医院眼科接受口服滋肾健脾化瘀片联合IVC治疗的DR患者32例(42只眼)作为观察组(DR组),在IVC术中抽取房水;纳入同期住院行白内障手术的患者27例(31只眼)作为对照组,在白内障手术中抽取房水.通过Luminex法检测2组患者房水中VEGF家族(VEGF-A、PLGF),PDGF家族(PDGF-AA、PDGF-BB),ANGPTL4,炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8、MCP-1、ICAM-1、TNF-α)等11种细胞因子表达.8周后,DR组行IVC术时再次抽取房水,比较DR组治疗前后房水中细胞因子表达的差异.结果(1)与对照组比较:DR组治疗前VEGF-A、PLGF、PDGF-AA、ANGPTL4、IL-6、IL-8、MCP-1、ICAM-1、TNF-α水平均高于对照组(ZVEGF-A=-4.553,ZPLGF=-3.588,ZPDGF-AA=-4.464,ZANGPTL4=-7.265,ZIL-6=-4.488,ZIL-8=-5.770,ZMCP-1=-5.100,ZICAM-1=-3.625,均P=0.000;ZTNF-α=1.995,P=0.046),而IL-1β水平低于对照组(Z=-3.167,P=0.002);(2)DR组治疗前后比较:治疗后,DR组房水中细胞因子VEGF-A水平低于治疗前(Z=-5.608,P=0.000),IL-8浓度高于治疗前(Z=-2.907,P=0.004),而其余细胞因子治疗前后比较,差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 DR的发生、发展可能与细胞因子中的VEGF家族、PDGF家族、ANGPTL家族及炎症因子相关;口服滋肾健脾化瘀片联合抗VEGF治疗能够在一定程度上使DR患者房水中VEGF-A水平降低,为该病的中西医结合治疗提供了一定依据.