目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)对胃癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响.方法 基于公共数据库分析LncRNA TUG1在胃癌组织和癌旁组织中的表达水平.通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测lncRNA TUG1在胃癌细胞系中的表达;采用si-TUGl、si-NC转染胃癌细胞SGC-7901,分别采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、克隆形成实验、Transwell实验和基质胶成管实验分析敲低lncRNA TUG1对胃癌细胞增殖、集落形成、迁移和血管生成的影响.基于公共数据库分析烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)基因与lncRNA TUG1的相关性.采用放线菌素D实验验证ALKBH5与lncRNA TUG1的调控关系.通过细胞功能实验分析敲低ALKBH5对胃癌细胞增殖、集落形成、迁移和血管生成的影响.结果 lncRNA TUG1在胃癌组织和胃癌细胞系中均表达上调;敲低lncRNA TUG1后,SGC-7901细胞增殖、集落形成、迁移、血管生成能力均较对照细胞下降,差异有统计学意义(P＜0.05).数据库分析结果显示,在胃癌中,ALKBH5与lncRNA TUG1表达呈正相关(r=0.37,P＜0.05).与对照细胞相比,敲低ALKBH5的SGC-7901细胞lncRNA TUG1的RNA稳定性下降,且细胞增殖、集落形成、迁移、血管生成能力均下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ALKBH5通过诱导lncRNA TUG1表达,促进胃癌细胞的增殖、集落形成、迁移和血管生成.

目的 探讨乳腺浸润性导管癌烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)与上皮间质转化(EMT)和血管生成相关蛋白表达的相关性及其与临床病理特征的关系.方法 采用实时荧光定量PCR检测原发性乳腺浸润性导管癌组织及对应癌旁组织中ALKBH5、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达,免疫组织化学染色法检测ALKBH5、E-cadherin、MMP9、VEGF蛋白表达,用x2检验分析其与临床病理特征的关系,并采用Spearman相关分析法分析蛋白表达的相关性.采用Kaplan-Meier法评估ALKBH5、E-cadherin、MMP9、VEGF蛋白的异常表达与乳腺浸润性导管癌患者无病生存期之间的关系,Cox回归模型分析ALKBH5、E-cadherin、MMP9、VEGF蛋白的表达和临床病理参数与乳腺浸润性导管癌患者预后的关系.结果 与癌旁组织相比,ALKBH5、MMP9和VEGF的mRNA和蛋白在乳腺浸润性导管癌组织高表达,E-cadherin表达降低.ALKBH5、MMP9和VEGF蛋白在低分化乳腺癌组织、淋巴结有转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的表达率较高;肿瘤直径越大,ALKBH5和VEGF表达率越高.E-cadherin在高分化乳腺癌组织、淋巴结无转移、TNM分期Ⅰ+Ⅱ期表达率较高.Speaan相关分析结果显示,乳腺浸润性导管癌中ALKBH5与E-cadherin表达呈负相关,ALKBH5与MMP9和VEGF表达均呈正相关.ALKBH5、MMP9和VEGF蛋白高表达者的无病生存率均分别低于低表达者,E-cadherin蛋白高表达者无病生存率高于低表达者.Cox回归模型分析显示,ALKBH5和淋巴结转移是乳腺浸润性导管癌预后的独立危险因素.结论 ALKBH5促进乳腺浸润性导管癌侵袭和转移可能与增强乳腺导管癌细胞的EMT和血管生成有关.

目的 探讨m6A去甲基化酶烷基化修复蛋白B同源物5(alkylation repair protein B homolog 5,ALKHB5)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其临床意义.方法 收集2009年1月至2013年8月在桂林医学院附属医院接受肝癌切除术的80例HCC患者的癌组织及其癌旁组织(距病灶>3 cm)的石蜡包埋标本,采用免疫组化法检测ALKBH5的表达水平,并分析其与HCC患者临床病理特征及与预后的关系.结果 在HCC组织中ALKBH5高表达的患者比例明显低于癌旁组织(P=0.001),且与肿瘤大小和血清甲胎蛋白(α?fetoprotein,AFP)水平相关(均P<0.05).Kaplan?Meier生存分析显示ALKBH5低表达组患者的总生存期(P=0.011)和无复发生存期(P=0.012)均缩短,多因素Cox回归分析显示ALKBH5低表达是影响HCC患者总生存期(HR=1.965,95％CI:1.029～3.751,P=0.041)和无复发生存期(HR=2.201,95％CI:1.046～4.629,P=0.038)的独立危险因素.结论 ALKBH5在HCC组织中表达下调且低表达患者预后不良,ALKBH5可能是HCC潜在的预后评估指标及治疗靶点.

目的 探讨烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)对K562/阿霉素(ADM)细胞耐药的影响及其作用机制.方法 以人白血病细胞系K562和ADM抗性细胞K562/ADM细胞为研究对象,利用LipofectamineTM2000将K562/ADM细胞分为对照组、si-NC组、si-ALKBH5-1 组、si-ALKBH5-2组、空载体组(转染 pcDNA3.1)、ALKBH5-WT 组(转染 pcDNA3.1-ALKBH5-WT)、ALKBH5-MUT 组(转染 pcDNA3.1-ALKBH5-MUT)、si-ALKBH5-2+空载体组、si-ALKBH5-2+pcDNA3.1-EZH2组.采用比色法检测细胞中 N6-甲基腺苷(m6A)含量;采用CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC50);采用荧光光度计法检测ADM外排;采用Western blot检测细胞中ALKBH5、果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药基因1(MDR1)的蛋白表达;采用RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证ALKBH5与EZH2 mRNA的相互作用;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测EZH2 m6A水平.结果 与K562细胞比较,K562/ADM细胞对ADM的耐药性及细胞中ALKBH5蛋白表达水平升高,m6A含量降低,差异有统计学意义(P＜0.01);沉默ALKBH5可增加K562/ADM细胞中m6A含量,过表达野生型ALKBH5可减少m6A含量,而过表达突变型ALKBH5(H204A)对m6A含量无明显影响.与对照组、si-NC组比较,si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组细胞在450 nm处的光密度值(OD450nm值)、P-gp、MDR1蛋白表达水平降低,细胞内荧光强度升高,差异有统计学意义(P＜0.05).在K562/ADM细胞中,ALKBH5蛋白能与EZH2 mRNA相互作用;沉默ALKBH5可上调K562/ADM细胞中EZH2 m6A水平,下调EZH2蛋白表达水平,过表达野生型ALKBH5则呈相反趋势;EZH2过表达逆转了沉默ALKBH5对K562/ADM细胞活力及耐药性的影响.结论 沉默ALKBH5通过促进EZH2的甲基化来下调EZH2的表达,进而降低K562/ADM的耐药性.

目的 探讨N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)相关基因对结直肠癌预后及细胞生物学行为的影响.方法 从肿瘤基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)下载长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)和21个M6A相关基因的表达谱数据,R软件分析差异基因;聚类分析和主成分分析(principal component analysis,PCA)分析M6A相关基因;单因素Cox回归分析筛选预后相关M6A基因,LASSO算法建立风险预测模型;筛选结直肠癌相关差异lncRNA(differentially expressed lncRNA,DElncRNA),与M6A相关基因建立共表达网络.使用实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测 M6A reader 脆性 X 智力低下 1(fragile X mental retardation 1,FMR1)在结直肠癌组织中的表达,在结直肠癌细胞中敲除FMR1基因,通过CCK-8、划痕实验、Transwell和细胞凋亡实验检测细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡情况.结果 21个M6A相关基因中有15个基因在结直肠癌中差异表达.聚类分析显示,结直肠癌肿瘤分成2种亚型;从建立的风险模型得出烷基化修复同源蛋白 5(a-ketoglutarate-dependent dioxygenase alk B homolog 5,ALKBH5)、YTH 结构域蛋白 2(YTH domaincontaining protein 2,YTHDC2)和FMR1可能是独立的预后因子.随后,筛选出1 784个DElncRNA,构建包含3个预后因子和18个DElncRNAs的共表达网络.网络图中发现FMR1基因占主导地位,RT-qPCR实验发现FMR1在结直肠癌组织中上调;FMR1基因的敲除能抑制结直肠癌HT-29细胞的增殖,迁移和侵袭能力,促进结直肠癌细胞的凋亡.结论 M6A甲基化调控因子ALKBH5、YTHDC2和FMR1可能是结直肠癌中的独立预后因子,FMR1基因的敲除能抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭,促进结直肠癌细胞的凋亡.