目的:观察RNA m6A去甲基化酶ALKBH5基因敲除之后对老年小鼠小脑形态和功能的影响，探究ALKBH5在小脑退行性病变中的作用。方法:免疫印迹实验检测不同年龄C57BL/6野生型小鼠（包括2月龄、6月龄、12月龄、18月龄）小脑中ALKBH5的蛋白水平。通过免疫组织化学实验检测中年（12月龄）及老年（18月龄）野生型小鼠和ALKBH5基因敲除（ALKBH5 -/-）小鼠中NeuN、Calbindin-D28K、MAP2、胶质纤维酸性蛋白等蛋白的表达情况。平衡木实验和步态实验检测小鼠平衡能力以及运动协调能力。 结果:ALKBH5蛋白在小脑中的表达水平随着小鼠生理性衰老的进行而逐渐升高。在中年小鼠中，野生型和ALKBH5 -/-小鼠的体重、脑重以及小脑的形态大小没有明显差别，同时颗粒神经元、浦肯野细胞及神经元树突的形态和数量均未见明显改变。在老年小鼠中，相较于野生型小鼠，ALKBH5 -/-小鼠的体重、全脑重和小脑重分别下降15%、10%和21%（ P<0.05）。ALKBH5在浦肯野细胞中的表达高于其他类型的神经细胞，与之对应在老年ALKBH5 -/-小鼠中浦肯野神经元的数量下降40%，树突的长度和密度也明显减少（ P<0.01）。老年ALKBH5 -/-小鼠通过平衡木相较于同龄的野生型小鼠所用的时间增加70%，且出现步态不稳的情况（ P<0.01）。 结论:RNA m6A去甲基化酶ALKBH5缺失会造成老年小鼠小脑萎缩、浦肯野神经元缺失与受损，进而损害其运动协调和平衡能力。上述结果提示RNA m6A甲基化失衡会导致小脑的神经退行性病变。

目的:探讨α-酮戊二酸/铁依赖性双加氧酶同源蛋白1(ALKBH1)基因低甲基化在肝细胞癌发病机制及病情评估中的临床价值。方法:肝癌细胞(SMMC-7721、Bel-7402、MHCC97、HepG2及Hep3B)和正常肝细胞(HL-7702)购自美国典型培养物保存中心。选择2016年6月至2018年6月90例肝细胞癌患者为研究对象。采用重亚硫酸盐基因组测序聚合酶链反应(BSP)法检测ALKBH1基因甲基化并定量，采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测ALKBH1基因甲基化。统计并比较肝细胞癌患者肿瘤组织中ALKBH1基因甲基化和未甲基化患者平均疾病进展时间及3年生存率差异。计量资料比较行 t检验，计数资料采用 χ2检验。 结果:本组肝细胞癌患者肿瘤组织ALKBH1基因甲基化定量显著低于癌旁正常组织[甲基化定量(15.6±1.7)%比(57.8±3.5)%]，差异有统计学意义( χ2＝10.245， P<0.05)。SMMC-7721、Bel-7402、MHCC97、HepG2及Hep3B肝癌细胞ALKBH1基因甲基化定量显著低于HL-7702正常肝细胞[甲基化定量(25.1±2.1)%、(19.5±1.8)%、(16.7±1.3)%、(23.6±1.9)%、(20.3±1.5)%比(62.1±4.2)%]，差异有统计学意义( χ2＝16.133， P<0.05)。本组肝细胞癌患者肿瘤组织ALKBH1基因甲基化率显著低于癌旁正常组织(25.6%比63.3%)，差异有统计学意义( χ2＝36.897， P<0.05)。肝细胞癌患者肿瘤组织ALKBH1基因甲基化率在肿瘤最大径、病灶数量、分化程度和临床分期方面存在显著差异，肿瘤最大径≥5 cm、病灶数量多发、低中分化和Ⅲ期期肝细胞癌患者肿瘤组织ALKBH1基因甲基化率显著低于肿瘤最大径<5 cm、病灶数量单发、高分化和Ⅰ期+Ⅱ期肝癌患者(甲基化率分别21.2%比38.6%、5.0%比31.4%、12.8%比35.3%、4.0%比31.9%)，差异有统计学意义( χ2＝4.328、4.406、4.745、4.881，均 P<0.05)。肿瘤组织ALKBH1基因未甲基化患者平均疾病进展时间为(23.7±2.1)个月，3年生存率为52.4%，ALKBH1基因甲基化患者平均疾病进展时间为(29.5±2.7)个月，3年生存率为78.8%，ALKBH1基因未甲基化患者平均疾病进展时间和3年生存率显著低于ALKBH1基因甲基化患者( t或 χ2＝14.233、9.788， P<0.05)。 结论:ALKBH1基因低甲基化与肝细胞癌发病机制明显相关，可作为肝细胞癌病情及预后评估的基因水平标志物。

目的:探讨N6-甲基腺苷(m6A)修饰与非小细胞肺癌(NSCLC)淋巴结转移的相关性。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载NSCLC患者的转录组测序数据，共包含1 037例原发肺癌组织样本和108例癌旁组织样本。分析参与m6A修饰过程的调控蛋白在肿瘤组织和癌旁正常组织样本中表达水平的差异，利用加权基因共表达分析(WGCNA)算法识别与m6A调控因子存在共表达关系的信使RNA(mRNA)和非编码RNA(ncRNA)并根据RNA的表达模式对NSCLC患者进行共识聚类。采用 t检验比较聚类亚组间m6A甲基化丰度的差异，采用 χ2检验比较组间淋巴结转移发生率的差异。 结果:共纳入20个m6A调控因子，肿瘤组织中15个调控因子的表达水平显著上调[甲基转移酶样蛋白3(METTL3)、YTH结构域蛋白1(YTHDC1)、YTH结构域结合蛋白1-3(YTHDF1-3)、异质核核糖蛋白A2B1(HNRNPA2B1)和HNRNPC、ALK B同源物5(ALKBH5)等]，3个调控因子显著下调[M0ETTL14、含锌指CCCH结构域蛋白13(Zc3h13)、脂肪和肥胖相关蛋白(FTO)]，差异有统计学意义( P<0.05)，YTHDC2和METTL16差异无统计学意义。通过WGCNA算法识别出454个与调控因子存在共表达关系的mRNAs和400个ncRNAs[325个长链非编码RNAs(lncRNAs)、23个微小RNAs(miRNAs)、28个核仁小RNAs(snoRNAs)、24个核内小RNAs(snRNAs)]。根据854个RNAs的表达模式进行共识聚类，将NSCLC患者分为2个聚类亚组(聚类1和聚类2)。WT1相关蛋白WTAP( t＝14.322， P<0.01)和HNRNPC( t＝15.424， P<0.01)等11个调控因子的表达水平在聚类1中均显著上调，其他9个调节因子在聚类亚组间差异无统计学意义，聚类1患者具有较高的m6A甲基化丰度。聚类1患者淋巴结转移发生率38.16%(292/765)明显高于聚类2组的22.27%(55/247)，差异有统计学意义( χ2＝19.487， P<0.01)。 结论:通过m6A甲基化与非小细胞肺癌淋巴结转移的相关分析，有助于探讨肺癌淋巴结转移相关机制。

目的:探讨甲基转移酶3（Mettl3）在血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）诱导周细胞向肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化过程中的作用及相关机制。方法:使用C57BL/6J小鼠，（1）细胞实验中，采用磁珠分选法培养纯化小鼠肾脏周细胞，并予以1×10 6 mmol/L的Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化，为Ang Ⅱ组；正常培养的周细胞为对照组。采用免疫荧光染色、蛋白质印迹（Western blot）及实时反转录PCR（RT-qPCR）检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）以验证转分化成功。采用斑点印迹、RT-qPCR、Western blot检测N6-甲基腺苷（m6A）修饰水平及相关酶［Mettl3、Mettl14、Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白（WTAP）、肥胖相关蛋白（FTO）、ALKB同源蛋白5（ALKBH5）、YTH结构域家族蛋白（YTHDF）1、YTHDF2、YTHDC1、YTHDC2、YTHDC3］的表达水平。采用慢病毒转染Mettl3 shRNA的方法抑制细胞中的Mettl3表达，为sh-Mettl3组、Ang Ⅱ+sh-Mettl3组；以转染慢病毒空载体作为阴性对照，为Ang Ⅱ+sh-NC组，观察Ang Ⅱ对周细胞转分化的影响，并检测下游磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路蛋白的表达，包括PI3K、AKT（丝氨酸磷酸化位点473）［p-AKT（S473）］、AKT（苏氨酸磷酸化位点308）［p-AKT（T308）］等。加入放线菌素D与各组周细胞共培养以抑制PI3K基因的转录，通过检测不同共培养时间残余PI3K mRNA表达量以计算PI3K mRNA半衰期。在Ang Ⅱ+sh-Mettl3组周细胞中加入AKT激动剂SC79，观察是否可逆转Mettl3抑制对Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化的作用。（2）动物实验中，分为假手术组（仅给予0.9%无菌生理盐水）、Ang Ⅱ组（泵入Ang Ⅱ溶液）、sh-Mettl3组（注射Mettl3 shRNA慢病毒溶液）、Ang Ⅱ+sh-Mettl3组（泵入Ang Ⅱ溶液+注射Mettl3 shRNA慢病毒溶液）、Ang Ⅱ+sh-Mettl3+SC79组（Ang Ⅱ+sh-Mettl3组处理基础上注射SC79），每组6只。手术前后采用尾夹法测定血压，术后4周测定血清肌酐、尿素含量及尿液白蛋白含量。28 d后取肾脏组织，采用苏木精-伊红（HE）及Masson三色法对组织切片进行染色，检测肾脏纤维化程度。 结果:（1）磁珠分选法可获得原代肾脏周细胞，以1×10 6 mmol/L的Ang Ⅱ处理周细胞48 h可成功诱导其向肌成纤维细胞转分化。斑点印迹结果显示，Ang Ⅱ组总RNA的m6A修饰水平高于对照组（ P<0.05），RT-qPCR及Western blot结果显示，与对照组相比，Ang Ⅱ组中Mettl3 mRNA及蛋白表达水平上调（ P均<0.05）。Ang Ⅱ+sh-Mettl3组细胞中的Mettl3蛋白表达水平低于Ang Ⅱ组，α-SMA、波形蛋白、肌间线蛋白、成纤维细胞激活蛋白a（FAPa）以及Ⅰ型胶原蛋白的表达水平亦低于Ang Ⅱ组（ P均<0.05）。与对照组相比，Ang Ⅱ组的PI3K mRNA表达水平上调，且p-AKT（S473）和p-AKT（T308）蛋白高表达；Ang Ⅱ+sh-Mettl3组的PI3K mRNA表达水平低于Ang Ⅱ组，p-AKT（S473）和p-AKT（T308）蛋白表达下调（ P均<0.05）。Ang Ⅱ+sh-Mettl3组的半衰期短于Ang Ⅱ+sh-NC组（2.34 h比3.42 h）。而Mettl3抑制对Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化的改善作用可被SC79逆转。（2）动物实验结果显示，与假手术组比较，Ang Ⅱ组小鼠的血压更高，血清肌酐、尿素及24 h尿蛋白测量值更高，纤维化面积更大（ P均<0.05）；而Ang Ⅱ+sh-Mettle3组的纤维化面积小于Ang Ⅱ组（ P<0.05），但在加入SC79后肾脏纤维化又加重。 结论:Mettl3介导的RNA m6A表观遗传调控参与Ang Ⅱ诱导的肾脏周细胞-肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化，Mettl3可能通过影响PI3K的稳定性，进而影响PI3K/AKT信号通路发挥调控作用。

目的:探讨N6-甲基腺嘌呤（m 6A）在结直肠癌组织中表达及临床意义。 方法:2021年9月至2021年12月，利用癌症基因组图谱（TCGA）和基因表达综合数据库（GEO）对结直肠癌中m 6A相关调控因子的表达进行汇总分析，对不同临床病理特征及分子分型下m 6A调控因子的基因表达进行对比统计，对不同表达m 6A的结直肠癌病例做生存分析。 结果:在TCGA数据库中，胰岛素样生长因子2 mRNA绑定蛋白1（IGF2BP1），胰岛素样生长因子2 mRNA绑定蛋白3（IGF2BP3）和YTH结构域m6A RNA结合蛋白1（YTHDF1）在结直肠癌组织中较正常组织高表达（TCGA-COAD比IGF2BP3：12.80比204.46，logFC=4.00， P=0.003；YTHDF1：2 347.56比3 712.77，logFC=0.66， P < 0.001；TCGA-READ比IGF2BP1：6.20比359.32，logFC=5.82， P=0.007；YTHDF1：2 470.10比4 369.09，logFC=0.82， P=0.020）；将TCGA和GEO数据库做交集后，发现甲基转移酶样14（METTL14）、YTH结构域m6A RNA结合蛋白3（YTHDF3）和α-酮戊二酸依赖的加双氧酶AlkB同源蛋白5（ALKBH5）均在结直肠癌组织中下调（TCGA-COAD比METTL14：1 051.56比711.40，logFC=-0.56， P < 0.001；YTHDF3：4 613.85比3 155.05，logFC=-0.55， P < 0.001；ALKBH5：4 250.10比2 555.55，logFC=-0.73， P < 0.001；TCGA-READ比METTL14：1 113.3比674.36，logFC=-0.72， P < 0.001；YTHDF3：5 034.30比3 331.95，logFC=-0.60， P=0.004；ALKBH5：4 902.20比2 529.71，logFC=-0.95， P < 0.001；GEO-CRC比METTL14：6.58比6.33，logFC=-0.06， P < 0.001；YTHDF3：6.28比6.20，logFC=-0.02， P=0.002；ALKBH5：5.07比4.98，logFC=-0.02， P < 0.001）。在不同分子分型结直肠癌中IGF2BP2、HNRNPC、TP53和YTHDF2在KRAS突变中低表达（IGF2BP2：48.53比44.04， t=2.64， P=0.008；HNRNPC：121.30比112.60， t=2.32， P=0.020；TP53：65.30比60.26， t=2.11， P=0.034；YTHDF2：54.07比51.19； t=1.97， P=0.048）。不同临床病理特征分析显示，IGF2BP1在淋巴结阳性（8.97比6.11，W=20 008， P=0.002）、存在远处转移（8.94比6.41，W=19 104， P=0.009）及Ⅲ~Ⅳ期（7.46比7.13，W=8 779， P=0.025）的结直肠癌中较对照组升高。ALKBH5高表达、高龄、存在脉管侵犯和病理分期晚与较短生存期显著相关（ALKBH5高表达比ALKBH5低表达：5.85年比NA， HR：1.63，95% CI：1.071~2.491， P=0.021。> 68岁比 < 68岁：6.78年比NA，HR：1.59，95% CI：1.049~2.422， P=0.047。Ⅲ~Ⅳ期比Ⅰ~Ⅱ期：4.55年比8.33年， HR：2.89，95% CI：1.895~4.425， P < 0.001。有静脉侵犯比无静脉侵犯：5.48年比NA， HR：2.82，95% CI：1.672~4.783， P < 0.001）与生存时间短具有明显相关性。 结论:m 6A中的部分调控因子与结直肠癌的生物学特征及预后相关。

目的:探讨形觉剥夺性近视(FDM)豚鼠视网膜中m6A去甲基化酶AlkB同源蛋白5(ALKBH5)表达变化及其参与近视的作用机制。方法:采用随机数字表法将30只健康SPF级3周龄三色豚鼠分为正常对照组和实验组，每组15只。实验组中眼罩遮盖右眼作为FDM组，暴露左眼为自身对照组。分别于实验前及实验1、2、3和4周时进行豚鼠眼生物学参数测量。采用带状光检影镜测量屈光度，采用A型超声仪测量眼轴长度。实验4周，通过免疫组织化学染色和免疫荧光染色检测ALKBH5在豚鼠视网膜中的表达分布。采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测豚鼠视网膜中ALKBH5 mRNA和蛋白表达情况。结果:与正常对照组和自身对照组相比，实验2、3和4周，FDM组豚鼠近视屈光度明显增加，眼轴显著增长，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。免疫组织化学染色和免疫荧光染色显示，ALKBH5分布在视网膜神经纤维层、视锥视杆细胞层和视网膜色素上皮(RPE)层，其中以神经纤维层和RPE层为主。正常对照组、自身对照组和FDM组豚鼠ALKBH5蛋白相对荧光强度值分别为1.000±0.204、0.874±0.076和0.571±0.053，FDM组视网膜中ALKBH5蛋白荧光强度值明显小于正常对照组和自身对照组，差异均有统计学意义( t＝4.069， P＝0.006； t＝5.176， P＝0.014)。造模后4周，FDM组豚鼠视网膜中ALKBH5 mRNA和蛋白相对表达量明显低于正常对照组和自身对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:FDM组豚鼠视网膜中m6A去甲基化酶ALKBH5表达下降，ALKBH5及相关m6A甲基化修饰可能参与了近视的发生和发展。

目的:探索缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF1α）启动N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine，m6A）去甲基化酶ALKBH5改善子宫内膜容受性分子标志物整合素蛋白αν（integrin αν，ITGAV）表达的内在机制。方法:利用人子宫内膜癌Ishikawa细胞，低氧以及干扰HIF1α条件下实时荧光定量PCR（real time quantity PCR，RT-PCR）或Western blotting检测ALKBH5的表达；过表达或干扰ALKBH5表达后，RT-PCR或Western blotting检测对 ITGAV基因和蛋白表达的影响；荧光素酶报告基因系统分析miR-136-5p靶向 ITGAV mRNA表达；RNA pull-down分析及m6A甲基化检测ALKBH5与miR-136-5p竞争性结合 ITGAV mRNA上甲基化位点序列。 结果:低氧条件下HIF1α时间依赖性促进ALKBH5蛋白在Ishikawa细胞中的表达。过表达ALKBH5后，ITGAV的表达水平升高（ P<0.001），Ishikawa细胞增殖能力增强（ P<0.001）； ALKBH5敲除后，ITGAV的表达水平降低（ P<0.001），Ishikawa细胞的增殖能力下降（ P=0.019）。miR-136-5p靶向调节 ITGAV mRNA后， ITGAV mRNA（ P=0.007）和蛋白表达水平（ P=0.015）下调。miR-136-5p靶向调节ITGAV的序列与ALKBH5所识别的甲基化位点所在序列重叠，两者在调控 ITGAV mRNA上存在竞争性。 结论:HIF1α通过调控ALKBH5，竞争性地结合miR-136-5p所靶向的 ITGAV mRNA上特定序列，精细化调节ITGAV的表达，改善子宫内膜容受性。

目的:通过比较系统性红斑狼疮(SLE)患者与健康对照组之间血浆N6-甲基腺嘌呤(m6A)修饰相关蛋白[甲基化转移酶3(METTL3)、甲基化转移酶14(METTL14)、肾母细胞瘤1关联蛋白(WTAP)、AlkB同源蛋白5(ALKBH5)、肥胖相关蛋白(FTO)]和m6A水平变化，探讨m6A在SLE中的临床意义。方法:共选取64例SLE患者和24例健康志愿者，比较两组血浆METTL3、METTL14、WTAP、ALKBH5、FTO和m6A水平，分析METTL3、WTAP、FTO水平与临床指标的相关性。结果:SLE患者血浆METTL3水平明显高于对照组( P<0.05)，血浆WTAP和FTO水平明显低于对照组(均 P<0.05)。SLE患者血浆METTL3水平与血红蛋白水平呈负相关( r＝－0.344， P<0.05)；血浆FTO水平与血浆IgM水平呈正相关( r＝0.337， P<0.05)，与血浆IgA水平呈负相关( r＝－0.286， P<0.05)。高水平METTL3组SLE患者肾脏累及的发生率、血浆抗组蛋白抗体阳性率更高(均 P<0.05)。低水平FTO组SLE患者血浆抗dsDNA抗体、抗Sm抗体及AuaA自身抗体阳性率更高(均 P<0.05)。 结论:SLE患者血浆METTL3水平明显升高，血浆WTAP和FTO水平明显降低，并与多种临床指标相关，与SLE发病可能存在一定联系。

Objective::Metabolic disturbances in the folate cycle in mothers can lead to fetal growth retardation (FGR). This study was to analyze the role of intergenic interactions among maternal folate cycle genes in the development of FGR.Methods::This case-control study recruited 365 women in the third trimester of pregnancy, including 122 FGR patients and 243 controls. The women were genotyped for 5 polymorphisms of the 4 folate cycle genes: MTR (rs1805087), MTRR (rs1801394), serine hydroxymethyl transferase ( SHMT1; rs1979277), and TYMS (rs699517 and rs2790). The SNP × SNP interactions in the two-, three-, and four-locus models were analyzed using the multifactor dimensionality reduction method and a modification of it (the model-based multifactor dimensionality reduction method). Results::Four loci of maternal folate cycle genes (rs1805087 MTR, rs2790 TYMS, rs1801394 MTRR, and rs1979277 SHMT1) were associated with FGR in 3 significant models of single nucleotide polymorphism (SNP) × SNP interactions (two-, three-, and four-locus models) ( P <0.05). The highest contribution to FGR was made by polymorphic loci rs1979277 SHMT1 (1.70% of entropy), rs1805087 MTR (0.96%), and interactions between rs1979277 SHMT1 × rs1805087 MTR (-1.11%) and rs1801394 MTRR × rs1979277 SHMT1 (-0.64%). The four-locus maternal genotype combination AG rs1801394 MTRR × AA rs1805087 MTR × CT rs1979277 SHMT1 × AG rs2790 TYMS was associated with an increased risk of FGR ( β = 2.69, P = 0.012). FGR-associated SNPs were correlated with the expression of 16 genes ( MTR, MTRR, SHMT1, ALKBH5, CTD-2303H24.2, ENOSF1, FAM106A, FOXO3B, LGALS9C, LLGL1, MIEF2, NOS2P2, RP11-806L2.6, SMCR8, TOP3A, and USP32P2) in various tissues and organs related to FGR pathophysiology. Conclusion::SNP × SNP interactions of maternal folate cycle genes ( MTR, MTRR, SHMT1, and TYMS) are associated with the development of FGR.

目的 探讨ALKBH5在卵巢子宫内膜异位囊肿中的作用及其机制.方法 收集2022-01-01-10-10青岛市中心医院5例行卵巢子宫内膜异位囊肿剥除术患者的囊肿组织和正常子宫内膜组织,通过蛋白质印迹实验和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测组织中ALKBH5蛋白和mRNA的表达,并在卵巢子宫内膜异位囊肿组织中分离培养子宫内膜间质细胞(EESCs).应用转染小干扰RNA敲低ALKBH5的表达,通过细胞计数盒8(CCK8)、克隆形成实验和Transwell实验验证ALKBH5对EESCs增殖、迁移和侵袭能力的影响,通过脉管形成实验验证ALKBH5对血管生成能力的影响.通过检测谷胱甘肽(GSH)和铁离子含量验证ALKBH5对EESCs铁死亡的影响,通过透射电镜观察ALKBH5对细胞的亚细胞结构的影响,通过qRT-PCR实验和蛋白质印迹实验验证ALKBH5对BECN1表达的影响,通过RIP和MeRIP实验明确ALKBH5是否通过m6A去甲基化修饰调控BECN1的表达.采用Student t检验进行统计学分析.结果 蛋白质印迹实验结果显示,ALKBH5蛋白在卵巢子宫内膜异位囊肿组织中的表达明显高于正常子宫内膜组织.qRT-PCR结果显示,ALKBH5 mRNA在正常子宫内膜组织中的相对表达量为1.000±0.058,在卵巢子宫内膜异位囊肿组织中的相对表达量为2.270±0.044,t=17.56,P＜0.001.CCK8实验结果显示,在72 h时siNC组和siALKBH5组的光密度值分别为1.575±0.000和0.957±0.000,t=23.05,P＜0.001.克隆形成实验结果显示,siNC组和 siALKBH5 组形成的克隆数分别为 75.330±3.712 和 22.670±1.764,t=12.82,P＜0.001.Transwell 实验结果显示,siNC组和siALKBH5组迁移细胞数分别为196.700±8.819和77.000±5.859(t=11.30,P＜0.001),侵袭细胞数分别为62.000±2.309和18.330±2.028(t=14.21,P＜0.001).脉管形成实验结果显示,siNC组和siALKBH5组形成的脉管数分别为 73.330±4.667 和 19.330±1.764,t=10.82,P＜0.001.GSH 含量检测结果显示,siNC 组和 siALKBH5组GSH相对含量分别为1.067±0.088和0.430±0.025,t=6.942,P＜0.001.铁离子含量检测结果显示,siNC组和siALKBH5组铁离子相对含量分别为1.000±0.058和2.773±0.059,t=21.43,P＜0.001.透射电镜观察到敲低ALKBH5后细胞的线粒体和内质网结构破坏和溶解.蛋白质印迹实验结果显示,敲低ALKBH5显著促进BECN1蛋白的表达.qRT-PCR结果显示,siNC组和siALKBH5组BECN1 mRNA相对表达量分别为1.033±0.067和3.277±0.043,t=28.21,P＜0.001.RNA免疫沉淀实验结果显示,IgG组和ALKBH5组BECN1相对富集量分别为1.073±0.101和79.980±3.695,t=21.35,P＜0.001.甲基化RNA免疫沉淀实验结果显示,siNC组和siALKBH5组m6A+BECN1 相对富集量分别为 1.007±0.052 和 2.453±0.098,t=13.01,P＜0.001.结论 ALKBH5 通过介导 m6A 去甲基化抑制BECN1的表达而抑制EESCs铁死亡,促进卵巢子宫内膜异位囊肿的进展.