目的:探讨致命鹅膏致版纳微型猪肝衰竭的特点。方法:于2020年9至10月，采用反向高效液相色谱法（RP-HPLC）测定致命鹅膏水溶液毒素含量，以2.0 mg/kg致命鹅膏水溶液（α-鹅膏毒肽+β-鹅膏毒肽）经口灌胃版纳微型猪，染毒后观察各时间点的中毒症状、血液生化指标，以及肝脏、心脏和肾脏组织病理学改变。结果:版纳微型猪于染毒76 h内全部死亡，且在6~36 h出现不同程度的消化道症状，如恶心、呕吐和腹泻等表现；生化指标中丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、总胆红素、乳酸脱氢酶、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶、血尿素氮、肌酐于染毒后52 h明显升高，与0 h比较，差异均有统计学意义（ P<0.05）；肝脏及心脏肉眼及镜下观察出血明显，肝细胞出现坏死，肾小管上皮细胞肿胀。 结论:大剂量致命鹅膏可致版纳微型猪急性肝衰竭，符合急性肝衰竭的病理生理特点，为进一步研究致命鹅膏致肝衰竭的中毒机制及解毒药物奠定基础。

目的 异种器官移植是解决人类器官供体短缺的有效途径,但其面临严重的免疫排斥反应,包括血型差异导致的超急性排斥反应.建立稳定、便捷、可靠的猪血型鉴定方法,可快速筛选合适血型的供体猪用于异种器官移植研究.方法 选择版纳微型猪近交系、滇南小耳猪、巴马香猪为研究对象,用DNA提取试剂盒提取3种品系猪的血液、口腔颊黏膜和胎儿成纤维细胞中DNA,通过PCR法对猪ABO血型同源基因EAA第7号内含子附近的目标片段进行扩增.采用血液凝集反应检测猪前腔静脉全血加入抗A、B抗体后的溶血现象,采用免疫组织化学法检测猪心、肝、脾、肺、肾组织中A抗原表达水平,采用免疫荧光法检测猪口腔黏膜中A抗原表达水平.通过对比不同方法测定猪血型的结果,验证PCR方法的稳定性和可靠性,以此建立一种基于PCR的便捷式猪血型鉴定方法.结果 首先,69头版纳微型猪近交系、7头滇南小耳猪和34头巴马香猪的血液PCR结果显示AO血型20头,AA血型66头,OO血型24头.47头滇南小耳猪的胎儿成纤维细胞PCR结果显示47个胎儿均为OO血型,其中8头基因编辑克隆猪的口腔黏膜PCR结果与供体胎儿成纤维细胞的PCR结果一致,均为OO血型;8头野生型猪(2头版纳微型猪近交系、4头滇南小耳猪和2头巴马香猪)的口腔黏膜PCR结果均与血液PCR鉴定结果一致.然后,从中随机挑选11头版纳微型猪近交系、4头滇南小耳猪和2头巴马香猪进行血液凝集反应验证,结果均与血液及口腔黏膜PCR鉴定结果一致.而且,对1头版纳微型猪近交系和2头巴马香猪的心、肝、肺、肾、脾组织进行免疫组织化学分析,结果与血液PCR鉴定和血液凝集反应结果相一致.最后,采集其中2头版纳微型猪近交系和1头巴马香猪的口腔黏膜样本进行免疫荧光检测,结果与血液PCR鉴定结果一致.结论 通过采集胎儿细胞和活体猪的口腔黏膜样本进行PCR检测,可准确、高效地鉴定出猪的血型,为异种器官移植供体猪的血型筛选提供了一种简便方法.

目的 观察高糖高脂联合低剂量STZ对版纳微型猪骨骼肌肌肉素(M usclin)表达的影响.方法 高糖高脂联合低剂量STZ诱导版纳微型猪T2DM 模型,每月末测定血糖、血脂、胰岛素及Musclin水平变化.12个月末处死动物,HE和PAS及骨骼肌糖原含量(M2酶标仪,比色法)测定,ELISA检测血清Musclin含量,Western blot检测肌肉Musclin蛋白表达. 结果 喂养12月后,与对照(Con)组比较,模型(HSFD)组血糖[(4.75 ± 0.2)vs(19.28 ± 2.24)mmol/L]、TG[(0.82 ± 0.14)vs(2.46 ± 0.29) mmol/L]和TC[(2.29 ± 0.35)vs(8.93 ± 0.43)mmol/L]升高(P＜0.05),胰岛素缺乏[(8.25 ± 1.04)vs (3.81 ± 0.39)mU/L,P＜0.05];骨骼肌萎缩,糖原合成减少[(0.42 ± 0.05)vs(0.29 ± 0.04)*g/ml,P＜0.05];血清Musclin达峰值[(249.56 ± 19.14)vs(409.43 ± 21.34)pg/ml,P＜0.05],骨骼肌组织Musc-lin蛋白表达升高21%(P＜0.05). 结论 高糖高脂联合STZ可诱导版纳微型猪发生IR、糖尿病,促进骨骼肌萎缩,抑制糖原合成,可能与信号分子M usclin激活有关.

目的 绿色荧光蛋白(GFP)基因转染标记版纳微型猪骨髓间充质干细胞(pBMSC),分析GFP转染对pBMSC增殖和成脂分化的影响.方法 以不同剂量携带GFP基因慢病毒共培养的方法转染标记pBMSC,以hUCMSC为对照,流式分析方法检测不同细胞GFP的阳性率,CCK-8法检测转染细胞的增殖活性.观察GFP标记的pBMSC成脂分化诱导后的脂滴形成,异丙醇溶解脂滴,测定各组光密度值并进行比较分析.结果 以MOI为50和100的病毒载体剂量共培养72 h,可以成功标记pBMSC,MOI为50时pBMSC的GFP阳性率明显低于hUCMSC的GFP阳性率(P＜0.01).转染GFP的pBMSC生长曲线依然呈现“S”的分布特征,总体趋势与hUCMSC相似.不同GFP阳性率的pBMSC和hUCMSC成脂分化后脂滴溶解液OD值没有显著差异(P＞0.05).结论 GFP转染可以标记近交系版纳微型猪来源的pBMSC,但不会显著影响其增殖和成脂分化.

版纳微型猪原产于云南省西双版纳州,属华南型猪种.为了发掘和利用本省小型猪资源,1987年5月从西双版纳州属3个县的原始产区引进了 8头公猪和42头母猪到州种猪场饲养和选育.3年来对微型猪的繁殖性能、生长发育、生理生化、遗传特征、适应性和采食量等10个方面近150个性状参数进行了测定和分析,结果表明6月龄公猪的体重、体高和体长分别为13.10±0.40kg、32.34±0.36cm和54.59±0.79cm,母猪分别为17.21±0.42 kg、34.40±0.24 cm和58.52±0.60 cm;成年公猪体重为36.12±1.09 kg,母猪为43.29±1.04 kg.微型猪性成熟早,4～6月龄即可配种繁殖,经产母猪平均每窝产活仔7.84±0.39头.同时,还测定了不同年龄阶段用作实验的离体部位、器官和腺体的重量,为微型猪的实验应用提供基本参数.3年来选育结果表明,微型猪的体型矮小和生长缓慢特点能稳定遗传,与体型有关的性状遗传力达到中等或中等以上,性状间也存在中等的遗传相关(rA(xy)为0.35～0.64),13个胸椎和5个腰椎的个体频率分别为32.14％和21.43％.

1950年代以来,医学研究人员发现猪的皮肤、心血管、消化、免疫系统及肾脏、牙齿、眼球的解剖组织结构和生理、骨骼发育、营养代谢等方面与人类极为相似,猪作为一种新兴的模型动物,在发达国家得到了日益广泛的应用[1～7].为解决猪体型大,饲养管理困难和实验费用高的问题,美国、西德相我国台湾的科学家纷纷开展选育研究,培养出几种专供实验用的小型猪.这些猪的体重均在50～70公斤之间[8～14].我国大陆地区对小型猪的发掘研究亦有十多年的历史,其成年体重在40公斤左右[16,17],并已进行实验动物化的研究[18].云南省版纳微型猪系西双版纳州境内小耳猪[15]的一个类型,体型矮小,体质细嫩,早熟易壮,成年体重较黔桂小型猪更轻,故称版纳微型猪.我们对该猪进行了实验动物化的研究.

目的 CatSper1是精子特定的电压门控Ca2+通道蛋白,在精子生成和受精过程中具有重要作用.本研究旨在分析CatSper1基因在版纳微型猪近交系(BMI)的表达调控模式、序列特征与潜在的生物学功能.方法 取成年BMI公猪睾丸进行转录组测序;采用RT-PCR技术克隆CatSper1的完整编码序列;分析CatSper1的序列、结构特征及相互作用蛋白;利用转录组测序数据构建CatSper1的lncRNA和miRNA调控网络,并进行GO功能注释.结果 RNA-seq获得CatSper1基因的平均表达量和平均TPM值分别为2817.5和33.6.CatSper1 CDS区全长为2166 bp(GenBank登录号:OK042306),编码721个氨基酸,含有233个氨基酸残基组成的Ion_trans保守结构域以及与精子生成相关的保守跨膜螺旋结构.CatSper1蛋白与10个雄性育性相关蛋白质存在相互作用,尤其与该基因家族成员CatSper2-4蛋白互作最为紧密.CatSper 1基因受10个miRNAs靶向调控,分别有16个和14个lncRNAs与CatSper1竞争性结合ssc-miR-1343和ssc-miR-744.GO注释发现CatSper1基因在分子功能(MF)、生物学过程(BP)、细胞成分(CC)等方面均具有重要功能.结论 本研究报道了CatSper1在BMI睾丸中的表达,基因的分子结构特征和表达调控网络,为深入研究CatSper1基因在BMI精子发生、精子获能和顶体反应等重要生物学过程中的功能奠定了基础.