目的:探讨猫棒束孢乙醇提取物（IFA）对荷H22肝癌小鼠的抗肿瘤作用及可能机制。方法:将猫棒束孢用50%乙醇重复提取两次，合并两次滤液，水浴蒸干，得到IFA。将36只雌性昆明小鼠按照随机数字表法分为6组，分别为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、IFA低剂量组、IFA中剂量组、IFA高剂量组，每组6只；除正常对照组外，其余各组于小鼠右侧腋窝皮下接种小鼠肝癌H22细胞，建立荷瘤小鼠模型。正常对照组、模型对照组均每天胃灌注0.9% NaCl溶液，阳性对照组每天腹腔注射25 mg/kg环磷酰胺并胃灌注0.9% NaCl溶液，IFA低、中、高剂量组分别每天胃灌注37.5、75、150 mg/kg IFA。连续给药10 d后，麻醉后摘眼球取血，颈椎脱臼法处死小鼠，分离肿瘤组织、胸腺和脾脏，称量各标本质量；根据肿瘤组织质量和脏器质量分别计算抑瘤率和免疫器官指数；采用酶联免疫吸附试验检测血清转化生长因子β（TGF-β）水平；HE染色观察肿瘤组织细胞形态；对肿瘤组织进行TUNEL荧光染色，显微镜下观察细胞凋亡情况，并计算总细胞中凋亡细胞占比；免疫组织化学法检测肿瘤组织中bcl-2和bax蛋白表达水平，用ImageJ软件分析总面积中bcl-2或bax蛋白阳性区域占比。结果:接种H22细胞6 d后，小鼠皮下接种部位有结节产生，提示造模成功。给药10 d后，阳性对照组及IFA低、中、高剂量组荷瘤小鼠的抑瘤率分别为63.94%、35.70%、62.44%、72.67%。阳性对照组小鼠胸腺指数低于模型对照组和正常对照组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）；IFA各剂量组与正常对照组和与模型对照组间胸腺指数差异均无统计学意义（均 P>0.05），IFA各剂量组胸腺指数均高于阳性对照组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。各组小鼠间脾脏指数差异均无统计学意义（均 P>0.05）。IFA中剂量组、IFA高剂量组小鼠血清TGF-β浓度均低于正常对照组、模型对照组、阳性对照组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。HE染色显示，IFA各剂量组肿瘤组织中出现大面积凋亡、坏死细胞。TUNEL法染色示，阳性对照组和IFA各剂量组凋亡细胞占比均高于模型对照组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）；IFA低剂量组、IFA中剂量组凋亡细胞占比均低于阳性对照组，差异均有统计学意义（均 P<0.05），IFA高剂量组凋亡细胞占比高于阳性对照组，差异有统计学意义（ P<0.05）。IFA各剂量组bax蛋白阳性区域占比均高于模型对照组，而均低于阳性对照组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）；bcl-2蛋白阳性区域占比均低于模型对照组，而高于阳性对照组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。 结论:IFA对荷H22肝癌小鼠有很好的抗肿瘤作用，且可能对小鼠免疫功能有保护作用；其抗肿瘤机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。

目的 研究冬虫夏草来源的猫棒束孢(Isaria felina,IF)联合环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)对肝癌H22 荷瘤小鼠的治疗作用.方法 建立H22 荷瘤小鼠模型,随机分组,设正常对照组(NC group,蒸馏水)、模型对照组(MC group,蒸馏水)、CTX组(CTX group,25 mg/kg)、IF组(IF group,400 mg/kg)和IF+CTX组(IF+CTX group,IF 400 mg/kg+CTX 25 mg/kg),每组 5 只小鼠;蒸馏水、IF灌胃给药,CTX腹腔注射给药,连续给药10 d.实验结束后,计算各组小鼠平均肿瘤体积和瘤重、抑瘤率、q值、免疫器官脏器指数;检测血常规和血清细胞因子含量;观察肿瘤组织苏木精-伊红(HE)染色病理形态变化.结果 各给药组小鼠的肿瘤体积和重量均显著低于MC组(P＜0.05).CTX组、IF组、IF+CTX组小鼠的抑瘤率分别为 49.3%、34.2%、72.8%,q值为 1.09.IF+CTX组白细胞(WBC)、淋巴细胞(Lymph)、血小板(PLT)数量显著高于CTX组(P＜0.05).MC组小鼠的脾指数显著高于NC组,IF+CTX组小鼠脾指数显著低于MC组(P＜0.05).MC组小鼠的血清IFN-γ水平显著低于NC组,IF组和IF+CTX组的IFN-γ水平显著高于MC组和CTX组(P＜0.05).MC组肿瘤细胞生长状态良好,数量多,排列紧密;CTX组、IF组和IF+CTX组肿瘤组织可见肿瘤细胞排列松散,多处肿瘤细胞灶性坏死,坏死细胞核固缩碎裂.结论 IF和CTX联用对H22 荷瘤小鼠有相加的抑瘤作用,可减轻小鼠的免疫功能抑制,具有免疫调节功能.

目的 制备富硒猫棒束孢,通过固体培养,实现无机硒向有机硒的生物学转化.方法 在猫棒束孢常规培养过程中,加入无机硒化合物,采用高效液相色谱-电感耦合等离子体-质谱(HPLC-ICP-MS)法检测培养好的富硒猫棒束孢和非富硒猫棒束孢菌丝粉中有机硒含量,确定其生物转化率.结果 840 g小米和42 g葡萄糖中加入亚硒酸钠140 mg,平均可培养出富硒猫棒束孢菌丝粉280 g,所培养富硒猫棒束孢中有机硒含量为48.78μg/g,无机硒的的生物转化率为21.39％.结论 在猫棒束孢常规固体培养过程中加入无机硒化合物(亚硒酸钠),可以成功实现无机硒的有机化转化,本方法可用于猫棒束孢的富硒培养.

目的 观察猫棒束孢(Isaria felina,IF)菌丝粉对腺嘌呤所致小鼠慢性肾损伤的影响,探讨IF在肾病治疗中的作用.方法 将昆明小鼠随机分为正常对照组、模型对照组及IF给药高、中、低剂量组,除正常对照组外,其余动物分别于实验第1,3,5,15,22天灌胃给予腺嘌呤250 mg/kg.前3次给予腺嘌呤后,给药组小鼠连续每天灌胃给予IF,给药剂量分别为1000 mg/kg、500 mg/kg,250 mg/kg,共给药26 d.给药结束后麻醉小鼠,摘眼球取血,并剖取肾脏,检测血清中肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)水平,比较分析各组肾脏组织的病理变化.结果 灌胃腺嘌呤使小鼠血清CRE、BUN明显升高,与正常对照组相比差异具有统计学意义,模型对照组动物肾小管扩张严重,肾小管上皮细胞出现水肿现象,并有炎性细胞浸润,说明腺嘌呤对小鼠肾脏造成了一定的损伤,显示造模成功.IF降低了慢性肾损伤小鼠的血清CRE、BUN指标,并减轻了腺嘌呤对小鼠肾脏的病理损伤.结论 IF对由腺嘌呤所导致的小鼠慢性肾损伤有一定的保护作用,为探索治疗肾损伤提供了新的途径.

猫棒束孢(Isaria felina,IF)是从天然冬虫夏草子实体中经菌种分离培养获得的一种新菌株,经中国科学院微生物研究所郭英兰教授鉴定为Isaria felina(DC.:Fr.)Fr.,在分类上属于半知菌纲、丛梗孢目、棒束孢属.该菌种已被中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏 (保藏号:CGMCC NO. 0706).顺铂(DDP)是治疗实体肿瘤最有效和最常用的药物之一, 其疗效与用药剂量成正比, 但其剂量的增加却受DDP肾毒性的限制,DDP的肾毒性为其主要毒不良反应之一.

目的 探讨猫棒束孢Isaria felina (IF)对环磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的影响.方法 将昆明种小鼠随机分为6组,分别为对照组、模型组、阳性对照组(香菇多糖,200 mg/kg)及IF高、中、低剂量(400、200、100mg/kg)组.除对照组外,其余5组小鼠ip环磷酰胺制备免疫低下小鼠模型,每日ig给药1次,共给药10d.给药结束后,检测小鼠体质量增长值、肝脏指数、脾脏指数、胸腺指数、血常规指标;碳廓清法和迟发型变态反应(DTH)测定小鼠非特异性免疫功能和细胞免疫功能;双抗体夹心ELISA法测定小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果 与对照组比较,模型组小鼠体质量增长值,脾脏指数,白细胞、红细胞等血常规指标,吞噬指数(α),足跖厚度差,TNF-α水平显著降低(P＜0.05),表明环磷酰胺造免疫低下小鼠模型制备成功.与模型组比较,IF各剂量组小鼠的脾脏指数,白细胞、红细胞等血常规指标,α,足跖厚度差,TNF-α水平均显著升高(P＜0.05).结论 IF对环磷酰胺所致免疫低下模型小鼠具有免疫保护作用.

目的 探讨猫棒束孢(IF)对胰岛素抵抗Hep G2(IR-HepG2)细胞氧化应激的保护作用及其机制.方法 MTT法测定不同浓度IF和胰岛素对Hep G2细胞增殖的影响,用含10-8 mol·L-1胰岛素的高糖DMEM培养基诱导Hep G2细胞48 h,建立Hep G2细胞胰岛素抵抗模型.采用试剂盒测定葡萄糖消耗量、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、胰岛素受体底物1(IRS-1)、磷脂酰肌醇-3-羟基酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)的含量.结果 在IF浓度为5μg·mL-1和10μg·mL-1对细胞生长无显著促进作用,故浓度选用于5μg·mL-1和10μg·mL-1;胰岛素处理48 h后只有10-8 mol·L-1剂量组对照细胞生长无显著抑制作用,故选用胰岛素浓度为10-8 mol·L-1,培养48 h建立胰岛素抵抗模型.与正常组比较,模型组IR-Hep G2细胞葡萄糖消耗量显著下降(P<0.01);与模型组比较,各浓度猫棒束孢干预后的IR-Hep G2细胞的葡萄糖消耗量显著上升(P<0.01).与正常组比较,模型组Hep G2细胞的SOD含量显著下降(P<0.01),MDA含量显著上升(P<0.01),IRS-1、PI3K、Akt的含量显著下降(P<0.05).经IF处理后SOD含量显著提高(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.01),IRS-1、PI3K、Akt的含量显著升高(P<0.01、P<0.05、P<0.01).结论 IF能够改善胰岛素抵抗Hep G2细胞模型的糖代谢和氧化应激水平,并通过调控IRS-1/PI3K/Akt信号通路起到改善胰岛素抵抗的作用.