目的 观察心康冲剂含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响,基于GAS5-miR-21探讨其抑制CFs增殖的作用机制.方法 取SD乳鼠心肌,差速贴壁法分离CFs,采用血管紧张素Ⅱ诱导CFs增殖,在转染微小RNA-21(miR-21)过表达慢病毒、生长阻滞特异性转录本5(GAS5)沉默慢病毒后,分别用心康冲剂含药血清干预24 h.CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,RT-qPCR检测GAS5、miR-2l、磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)mRNA表达,Western blot检测PTEN、Akt、周期蛋白D1(Cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组CFs细胞活力增强,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,α-SMA阳性表达升高,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达降低,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05).与模型组比较,心康冲剂组CFs细胞活力减弱,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,α-SMA阳性表达降低,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达升高,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达降低;miR-21过表达组和GAS5沉默组CFs细胞活力增强,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,α-SMA阳性表达升高,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达降低,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05).与miR-21过表达组、GAS5沉默组比较,miR-21过表达+心康冲剂组、GAS5沉默+心康冲剂组CFs细胞活力减弱,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,α-SMA阳性表达降低,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达升高,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 心康冲剂含药血清可抑制沉默GAS5所致miR-21、Akt表达升高,对抗过表达miR-21所致GAS5和PTEN表达降低,抑制CFs增殖周期,促进GAS5发挥"分子海绵"作用,改善血管紧张素Ⅱ诱导的CFs过度增殖.

子宫中肾样腺癌是一类新近报道的子宫恶性肿瘤，伴有卵黄囊瘤成分的病例较少报道。本文报道1例59岁女性患者，因“绝经后阴道流血7个月”就诊，盆腔磁共振成像（MRI）提示恶性肿瘤，子宫内膜癌可能，2022年9月23日行宫腔诊刮术。镜下肿瘤细胞由2种成分构成，一部分肿瘤呈腺管状、乳头状及实体状生长，腺腔内见嗜伊红分泌物，免疫组织化学细胞角蛋白（CK）7、GATA3、甲状腺转录因子1（TTF1）、CD10阳性；另一部分肿瘤呈网状、微囊状，间质呈黏液样，免疫组织化学CK7、甲胎蛋白、Glypican-3、SALL4阳性，突变扩增阻滞系统PCR（ARMS-PCR）检测显示KRAS基因第2号外显子G12D点突变，诊断为子宫中肾样腺癌合并卵黄囊瘤成分。2022年10月8日行根治性手术，术后病理见腹主动脉旁淋巴结、左右盆腔淋巴结和膀胱腹膜反折处肿瘤转移。子宫内膜癌分子分型结果为非特异性分子谱。术后行BEP（地塞米松5 mg+博来霉素15 mg+依托泊苷100 mg+顺铂56 mg）方案化疗。该肿瘤生物学行为高度恶性，治疗以手术+化疗为主。

目的:通过生物信息学方法挖掘与卵巢上皮性癌（卵巢癌）耐药相关的可作为竞争性内源RNA（ceRNA）的长链非编码RNA（lncRNA），并进行临床验证。方法:（1）挖掘与卵巢癌相关的lncRNA并构建ceRNA调控网络：综合应用文本挖掘、数据预测和网络构建等生物信息学方法，建立与卵巢癌耐药相关的潜在ceRNA调控网络，即lncRNA-微小RNA（miRNA）-mRNA调控网络。（2）临床验证：收集2008年6月至2016年10月在广西医科大学附属肿瘤医院行肿瘤细胞减灭术的卵巢癌患者共95例，其中铂类药物耐药患者54例（耐药组），铂类药物敏感患者41例（敏感组），采用实时荧光定量PCR技术检测两组卵巢癌组织中lncRNA的表达，分析lncRNA表达对卵巢癌患者预后的影响，并分析lncRNA表达对卵巢癌耐药的诊断效能。结果:（1）文本挖掘初步筛选出25个与卵巢癌发生、发展相关的差异表达lncRNA；亚细胞定位分析发现，有8个lncRNA存在于细胞质中；通过进一步数据挖掘、共线文献分析，预测其中的两个lncRNA分子［即生长阻滞特异性转录因子5（GAS5）和HOXC基因座转录因子（HOTAIR）］可作为关键ceRNA分子；构建ceRNA调控网络，GAS5与miRNA（即miR139-5p、miR-24-3p）及mRNA［即乳腺癌易感基因1（BRCA1）、肿瘤蛋白p53（TP53）、表皮生长因子受体（EGFR）、B细胞淋巴瘤2基因（BCL-2）、细胞癌基因（FOS）、H-Ras蛋白（HRAS）］组成ceRNA调控网络，HOTAIR与miRNA（即miR-30a-5p）及mRNA［即磷酸肌醇3激酶调控亚基2（PIK3R2）、TP53、丝蛋白（VIM）］组成ceRNA调控网络。（2）实时荧光定量PCR技术检测显示，与敏感组（设为1.0）比较，耐药组卵巢癌组织中GAS5的表达水平为2.1±1.6，HOTAIR的表达水平为3.5±1.9，两组分别比较，差异均有统计学意义（ P=0.011， P<0.01）；Cox回归模型多因素分析显示，GAS5、HOTAIR表达为影响卵巢癌患者无病进展生存率和总生存率的独立危险因素（ P<0.05）。GAS5与HOTAIR联合检测诊断卵巢癌的受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）为0.871，显著高于GAS5单独检测和HOTAIR单独检测（AUC分别为0.678、0.863），分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.05）。 结论:GAS5与HOTAIR高表达与卵巢癌耐药密切相关，可作为卵巢癌化疗反应的潜在预测指标；GAS5与HOTAIR联合检测对卵巢癌患者具有一定的诊断效能。这种利用ceRNA调控网络预测关键分子的方法，为卵巢癌的诊断和治疗提供了新的思路。

目的 基于GAS5/miR-21探讨心康冲剂抗心力衰竭大鼠心肌纤维化的作用机制.方法 46只SD大鼠选取6只作为正常组,剩余40只通过腹腔注射阿霉素(2 mg/mL)诱导慢性心力衰竭并分为模型组、缬沙坦组及心康冲剂组.心康冲剂组予心康冲剂0.5 g/kg灌胃,缬沙坦组予缬沙坦0.03 g/kg灌胃,正常组和模型组予等体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续4周.心脏彩超检测大鼠心功能,ELISA检测血清Ⅰ型胶原(ColⅠ)和基质金属蛋白酶9(MMP9)含量,HE和Masson染色观察左心室病理变化,免疫荧光染色检测左心室α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,qRT-PCR检测磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)、生长阻滞特异性转录本5(GAS5)、miR-21基因表达,Western blot检测PTEN、Akt、周期蛋白D1(CyclinD1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)降低(P<0.05),血清MMP9、ColⅠ含量增加(P<0.05),心肌细胞肿胀变性、胞浆溶解,细胞排列紊乱,可见大量蓝色胶原纤维,胶原容积分数增加(P<0.05),左心室α-SMA表达升高(P<0.05),PTEN、GAS5基因表达降低(P<0.05),miR-21表达升高(P<0.05),Akt、CDK4、CyclinD1蛋白表达升高(P<0.05),PTEN蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,心康冲剂组和缬沙坦组大鼠LVEF、LVFS升高(P<0.05),血清MMP9、ColⅠ含量减少(P<0.05),心肌细胞肿胀、胞浆溶解程度相对较轻,蓝色胶原纤维较少,胶原容积分数减少(P<0.05),左心室α-SMA表达降低(P<0.05),PTEN、GAS5基因表达升高(P<0.05),miR-21表达降低(P<0.05),Akt、CDK4、CyclinD1蛋白表达降低(P<0.05),PTEN蛋白表达升高(P<0.05).结论 心康冲剂可能通过调节GAS5/miR-21、PTEN/Akt及细胞周期相关蛋白表达抑制细胞增殖,降低心力衰竭大鼠心肌纤维化程度.

长链非编码RNA(lncRNA)在细胞生理活动中发挥着重要的调节性作用,其异常表达与肿瘤的发生发展关系密切.生长阻滞特异性转录本5(GAS5)是一个全长651个核苷酸的lncRNA,在多种肿瘤中低表达,且其表达水平与肿瘤的临床病理特征及患者预后关系密切.近年来的研究逐步揭示了GAS5发挥肿瘤抑制功能的部分分子机制,这些发现将有助于开发新的肿瘤诊断标记物,并有可能为肿瘤的治疗提供新的靶点.

目的 结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病率及死亡率均较高.低氧环境下褪黑素对结直肠癌细胞的增殖抑制作用及机制尚不清楚.本研究旨在探讨低氧下褪黑素通过调节缺氧诱导因子-1α(hypoxia indueible factor-1α,Hif-1α)及其下游分子特异性生长阻滞转录因子5(growth arrest-specific transcript 5,GAS5)、微小RNA-21-3P(microRNA-21-3P,miR-21-3P)和人程序性细胞死亡因子4(programmed cell death protein 4,PDCD4)对结直肠癌细胞系HCT116增殖抑制的影响.方法 培养人结直肠癌细胞系HCT116,在低氧环境下采用0、0.25、0.5、1、2和4 mmol/L浓度褪黑素对HCT116细胞进行处理,采用MTT法检测细胞的增殖情况;蛋白质印迹法检测低氧环境下不同时间段HCT116细胞Hif-1α蛋白表达的变化,以及低氧下不同浓度的褪黑素对Hif-1α的作用;Real-time PCR检测Hif-1α过表达情况,以及褪黑素对Hif-1α下游GAS5、miR-213P和PDCD4 RNA水平的变化,并在蛋白水平验证PDCD4的表达变化.结果 在1％O2低氧条件下培养12 h,褪黑素抑制结直肠癌细胞HCT116的体外增殖,并呈浓度依赖性,2和4 mmol/L时抑制率分别为(37.6±4.8)％、(40.2±6.7)％,P＜0.001.低氧诱导12 h后Hif-1α蛋白明显上调,t=3.452,P＜0.05;2 mmol/L时上调最为显著,t=45.990,P＜0.001.此外,低氧环境下褪黑素明显上调GAS5 RNA(t=11.189,P＜0.001)、PDCD4 RNA(t=8.486,P＜0.001)和蛋白(t=12.114,P＜0.001)的表达,下调miR-21-3P mRNA(t=17.294,P＜0.001)的表达.MTT结果显示,Hif-1α上调促进HCT116细胞的体外增殖,增殖率约为(14.9±1.2)％,P＜0.05;MLT处理后细胞的增殖明显降低,抑制率约(30.7±3.4)％,P＜0.05.蛋白质印迹法结果显示,Hif-1α下调PDCD4蛋白表达,t=13.472,P＜0.001;MLT上调蛋白PDCD4表达,t=18.112,P＜0.001.Real-time PCR显示,Hif-1α下调PDCD4(t=11.758,P＜0.001)和GAS5(t=34.082,P＜0.001)的RNA表达,MLT上调其RNA表达,t值分别为4.996和40.927,均P＜0.001;此外,Hif-1α上调miR-21-3P的RNA表达(t=35.701,P＜0.001),MLT下调其RNA表达,t=31.842,P＜0.01.结论 MLT通过调节Hif-1α的表达,进而调节其下游分子PDCD4、GAS5和miR-21-3P的表达,从而抑制结直肠癌细胞的体外增殖.

生长阻滞特异性转录因子5(growth arrest-special transcript 5,GAS5)属于长链非编码RNA,位于人类基因组1号染色体上,在细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物过程中起重要调控作用.新近研究表明,GAS5在大多数肿瘤组织中低表达,其与肿瘤发生、发展及预后密切相关.探讨GAS5在肿瘤中的作用机制,有望为我们提供肿瘤诊治的新思路.本文就GAS5在肿瘤中的研究进展作一简述.

目的 观察生长阻滞特异性转录本5(growth arrest-specific transcript 5,GAS5)对肺成纤维细胞Ⅰ型胶原(ColⅠ)和Ⅲ型胶原(ColⅢ)表达的影响,并探讨其机制.方法 培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,用GAS5慢病毒过表达载体(LV-GAS5)处理,荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测GAS5、miR-21水平,qRT-PCR和Western blot测定I型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-1(ADAMTS-1)、ColⅠ、ColⅢ表达.生物信息学、双荧光素酶报告基因分析GAS5、ADAMTS-13'-非翻译区与miR-21的靶向结合情况.以miR-21模拟物(mimic)或ADAMTS-1 siRNA转染MRC-5细胞48 h,再用LV-GAS5处理细胞相同时间,qRT-PCR和Western blot检测ADAMTS-1、ColⅠ、ColⅢ表达.结果 过表达GAS5降低miR-21水平,抑制ColⅠ、ColⅢ蛋白表达,增加ADAMTS-1 mRNA与蛋白水平(P<0.01).GAS5、miR-21、ADAMTS-1之间存在竞争性内源RNA(ceRNA)作用模式.miR-21 mimic或ADAMTS-1 siRNA预处理几乎完全逆转过表达GAS5对ColⅠ、ColⅢ降解的促进作用(P<0.01).结论 GAS5作为ceRNA竞争性结合miR-21,上调ADAMTS-1表达,从而促进MRC-5细胞ColⅠ、ColⅢ降解.

目的 研究长链非编码RNA生长阻滞特异性转录本5(long non-coding RNA growth arrest-specific transcript 5,LncRNA GAS5)对甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)细胞侵袭和迁移能力的影响并探讨其作用机制.方法 qRT-PCR检测LncRNA GAS5在PTC细胞系和正常甲状腺细胞系中的表达;选择低表达GAS5的PTC细胞进行过表达lncRNA GAS5慢病毒载体的转染,分为LV-NC组和LV-GAS5组.转染48 h后,Boyden实验检测各组细胞的侵袭能力,划痕实验检测各组细胞的迁移能力,Western-blot检测各组细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达;EMT诱导剂TGF-β处理细胞进行回复实验,分为LV-NC组、LV-GAS5组和LV-GAS5+TGF-β组,Boyden和划痕实验检测各组细胞侵袭和迁移能力变化.结果 qRT-PCR结果显示LncRNA GAS5在PTC细胞系中的表达均低于在正常甲状腺细胞中的表达,B-CPAP细胞中GAS5的表达相对较低(P<0.05);转染过表达lncRNA GAS5慢病毒载体后,B-CPAP细胞侵袭和迁移能力降低(P<0.05),细胞中EMT相关蛋白N-cadherin、Vimentin表达降低和E-cadherin表达增加(P<0.05).EMT诱导剂TGF-β处理后,与LV-NC组相比,LV-GAS5组和LV-GAS5+TGF-β组细胞侵袭和迁移能力降低,与LV-GAS5组相比,LV-GAS5+TGF-β组细胞侵袭和迁移能力增加(P<0.05).结论 GAS5在PTC细胞系中高表达,GAS5可能通过调控EMT抑制PTC的侵袭和转移能力.

目的 探讨生长阻滞特异性转录本5(growth arrest-specific transcript 5,GAS5)对肺纤维化的影响及分子机制.方法 采用生物信息学、荧光素酶报告基因分析GAS5、miR-21、ADAMTS-1间的竞争性内源RNA(ceRNA)关系.SD大鼠分为对照组、LV-GAS5组和LV-GAS5+miR-21 agomir组,经气管内注入博莱霉素A5建立肺纤维化模型后,分别给予尾静脉注射0.2 mL的PBS、LV-GAS5、LV-GAS5+miR-21 ag-omir.d 28,处死大鼠,收集血液,采用ELISA分析血清PICP和PⅢNP水平,提取肺组织,HE染色和Masson染色观察病理改变,并用qRT-PCR检测GAS5、miR-21、ADAMTS-1表达,Western blot检测ADAMTS-1、ColⅠ、ColⅢ表达.结果 GAS5、miR-21、ADAMTS-1之间存在ceRNA调控模式.与对照组比较,GAS5过表达减轻肺组织病理改变,降低血清PICP、PⅢNP水平,上调肺组织GAS5、ADAMTS-1表达,降低肺组织miR-21、ColⅠ、ColⅢ水平(P<0.01).此外,miR-21 agomir处理逆转了GAS5过表达对肺纤维化大鼠肺组织病理改变、胶原沉积和ADAMTS-1表达的影响(P<0.01).结论 GAS5通过内源性吸附miR-21,上调ADAMTS-1表达,促进ColⅠ、ColⅢ降解,减轻肺纤维化病变.