目的:观察益景汤拮抗高糖诱导的体外血-视网膜内屏障(iBRB)模型基底膜(BM)损害及机制.方法:分离、培养大鼠内皮细胞(ECs)和视网膜微血管周细胞(RMPs)构建体外iBRB模型,随机分成低糖组、高糖组、米诺环素组、益景汤组,分别予25 mmol/L葡萄糖、60 mmol/L葡萄糖、60 mmol/L葡萄糖+10 μg/mL米诺环素、60 mmol/L葡萄糖+10％益景汤含药血清干预,各组干预12 h后终止孵育.采用Western blot法检测各组BM相关蛋白[Ⅳ型胶原(collagen Ⅳ,C Ⅳ)、层黏连蛋白(laminin,LN)]及 MMPs/TIMPs 相关蛋白(MMP-2、MMP-3、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2)的表达.结果:与低糖组相比,高糖组、米诺环素组、益景汤组C Ⅳ蛋白表达增加,高糖组、米诺环素组LN蛋白表达增加(均P＜0.05).益景汤及米诺环素能够抑制高糖诱导的C Ⅳ、LN蛋白表达增加,益景汤组、米诺环素组与高糖组相比具有差异(均P＜0.05).与低糖组相比,高糖组、米诺环素组MMP-2、MMP-3、MMP-9 蛋白表达增加(均 P＜0.05).益景汤能够抑制高糖诱导的MMP-2、MMP-3、MMP-9蛋白表达增加,益景汤组与高糖组相比具有差异(均P＜0.05).低糖组、高糖组、米诺环素组、益景汤组各组之间TIMP-1、TIMP-2表达未见明显差异(均P＞0.05).结论:益景汤可能通过调控MMP-2、MMP-3、MMP-9、C Ⅳ、LN的表达,干预高糖介导的BM重塑,抑制iBRB的损害,从而干预DR.

目的 探究益景汤对早期糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜组织中微小RNA(miRNA)表达的影响,筛选出益景汤干预早期DR的靶点miRNA.方法 将20只2月龄雄性SD大鼠使用链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,随机分为模型组(MG)和益景汤组(YJG),另将常规喂养的大鼠设为对照组(CG),每组10只.YJG组大鼠每日灌胃益景汤12.50 g/kg,CG、MG组大鼠灌胃等体积0.9%氯化钠注射液,均干预16周.给药完成后记录大鼠体质量,摘除双侧眼球剥离视网膜,提取总RNA,PCR扩增构建小RNA文库,采用高通量测序技术对该文库进行测序.对差异miRNA进行靶基因预测,并对靶基因进行基因本体论(GO)、Pathway分析,选择差异倍数较大的miRNA进行PCR验证.结果 (1)已知miRNA差异:筛选出644个已知miRNA,其中差异miRNA共59个.与CG组比较,MG组35个miRNA上调、6 个miRNA下调,YJG组20个miRNA上调、4个miRNA下调;与MG组比较,YJG组6个miRNA上调、13个miRNA下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05);其中,1个上调miRNA,11个下调miRNA为益景汤干预DM大鼠后,3组共同差异性表达miRNA.(2)新发现miRNA差异:3组筛选出242个新发现的miRNA,其中差异miRNA共105个.与CG组比较,MG组50个miRNA上调,15个miRNA下调;与CG组比较,YJG组55个miRNA上调,20个miRNA下调;与MG组比较,YJG组16个miRNA上调,6个miRNA下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05).(3)差异miRNA生物学功能和通路:差异基因主要涉及生物学过程方面的多种蛋白的转录调节;靶基因关联的通路主要是肿瘤相关的信号通路和糖脂代谢相关通路.(4)PCR验证:MG组大鼠视网膜miR-673-3p表达低于CG组,余11个miRNA表达均高于CG组;YJG组大鼠视网膜miR-673-3p、miR-23b-5p表达均高于MG组,余10个miRNA表达均低于MG组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).除miR-23b-5p外,其余11个miRNA与上述RNA检测结果一致.结论 miR-673、miR-1、miR-133、miR-214、miR-23b、miR-31a、miR-451等可能是益景汤干预早期DR微血管损害的靶点miRNA.

目的 探讨益景汤对糖尿病(DM)大鼠血-视网膜屏障(BRB)的保护效应及机制.方法 45只大鼠被随机分为3组:正常组、糖尿病组(DM组)、益景汤组(YJ组),每组15只,采用链脲佐菌素对DM组、YJ组大鼠进行DM造模.正常组和DM组采用PBS进行灌胃干预,YJ组采用益景汤灌胃干预.16周后处死所有大鼠,采用伊凡思蓝检测BRB渗漏,Western blot法检测视网膜组织occludin、claudin-5、ZO-1等紧密连接相关蛋白的表达.结果 (1)视网膜血管通透性:在第16周末时,DM组大鼠视网膜微血管管径欠均匀、管迹模糊,存在明显的微血管渗漏,而YJ组大部分视网膜微血管管径均匀、管迹清晰,少量视网膜微血管渗漏.(2)紧密连接相关蛋白的表达:DM组大鼠视网膜中occludin、claudin-5、ZO-1等紧密连接相关蛋白表达量降低,与正常组相比差异均有统计学意义(toccludin=23.568,tclaudin-5=17.447,tZO-1=21.365,均P=0.000).益景汤能抑制DM模型大鼠视网膜中occludin、claudin-5、ZO-1蛋白的表达量下降,YJ组上述蛋白的表达量与DM组相比差异具有统计学意义(toccludin=5.539,tclaudin-5=5.466,均P=0.000,tZO-1=3.325,P=0.008).结论 益景汤能够抑制DM大鼠视网膜组织中occludin、claudin-5、ZO-1等紧密连接相关蛋白表达量下降,降低BRB的损害,减轻DM大鼠视网膜微血管的渗漏,对早期DR具有防治作用.