研究藏药短管兔耳草醇提物对免疫抑制小鼠免疫功能的影响.随机将小鼠分为正常对照组、模型组、兔耳草醇提物组(2.0、4.0、8.0 g/kg),均连续灌胃给药15d,模型组为环磷酰胺制备免疫抑制模型,检测胸腺脾脏指数、血清溶血素抗体生成、碳粒廓清指数、迟发型超敏反应,流式检测脾脏T细胞亚群的变化及IL-2、IL-4、TNF-α、IFN-γ的水平.与模型组相比,兔耳草醇提物各剂量组均可提高小鼠胸腺指数(P＜0.05),高、中剂量组可提高小鼠胸腺脾脏指数(P＜0.05,P＜0.01),同时各剂量组可增加血清溶血素含量(P＜0.05)、提升小鼠的廓清指数(P＜0.05)和DNCB所致迟发型超敏反应(P＜0.01).此外,通过流式细胞仪对各组小鼠脾脏中CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞的检测发现,兔耳草醇提物组可增加小鼠脾脏T细胞的活化与数量,且CD4+/CD8+T细胞比值有差异(P＜0.01);另外,兔耳草各剂量组可提升小鼠的IL-4、IFN-γ的水平(P＜0.05),但会抑制IL-2、TNF-α的分泌(P＜0.05).以上结果提示藏药短管兔耳草醇提物可从多方面缓解免疫抑制小鼠的免疫功能.

通过亲和超滤技术捕集藏药短管兔耳草总提取物中潜在的XOD抑制剂成分,随后运用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术快速鉴定捕集成分结构.应用Autodock 4.2分子对接软件研究捕集成分与XOD结合作用强弱与结合机制.结果共鉴定出17个化合物,其中黄酮类成分9个,酚酸类成分5个,三萜类成分3个.分子对接结果表明捕集成分均可与XOD自发结合,其结合方式主要以氢键、范德华力及疏水作用力为主.从结合能与打分函数看,所捕集成分均具有潜在的XOD抑制剂开发前景,其中黄酮类化合物木犀草素-3',7葡萄糖醛酸苷效果最优.研究结果表明联用亲和超滤、超高效液相色谱-质谱(UF-UPLC-MS)及分子对接技术可为天然产物中XOD抑制剂成分的解析提供有力工具.

目的 研究短管兔耳草Lagotis brevituba Maxim的化学成分.方法 短管兔耳草70％乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20、MCI柱和制备液相色谱进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.结果 从中分离得到10个化合物,分别鉴定为3,4-二甲氧基苯甲醛(1)、3,4-二甲氧基苯丙酸(2)、阿魏酸甲酯(3)、邻苯二甲酸二丁酯(4)、木犀草素(5)、柯伊利索-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、香叶木素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、4-p-香豆酸-O-d-D-呲喃葡萄糖苷(8)、4-p-香豆酸-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、6-O-[α-L-(3-3,4-二甲氧基肉桂酰)-吡喃鼠李糖基]-梓醇(10).结论 化合物2～4、8～ 10为首次从该属分离得到,化合物1～4、8～10为首次从该植物中分离得到.

目的 研究短管兔耳草 Lagotis brevituba Maxim.的化学成分.方法 短管兔耳草70％乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20、MCI、HPLC制备柱进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.结果 从中分离得到11个化合物,分别鉴定为baldaccioside(1)、globularin(2)、10-O-[3,4-二甲氧基-(Z)-肉桂酰基]-梓醇(3)、10-O-[3,4-二甲氧基-(E)-肉桂酰基]-梓醇(4)、globularidin(5)、10-O-对甲氧基-(E)-肉桂酰基-梓醇(6)、兔耳草苷 B(7)、6-O-(E)-肉桂酰基-α/β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、松脂酚-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、syringaresinol-4'-O-β-D-monoglucoside(10)、6-O-[3,4-二甲氧基-(Z)-肉桂酰基]-α/β-D-吡喃葡萄糖苷(11).结论 化合物2～4、6～7、10为首次从该植物中分离得到,化合物1、5、8～9、11首次从兔耳草属植物中分离得到.

目的:集成靶细胞捕集、液-质联用及分子对接技术研究藏药短管兔耳草调控尿酸转运体1 (URAT1)成分及其与URAT1的结合机制,为基于藏族药短管兔耳草的降尿酸新药开发奠定物质与理论基础.方法:以可表达URAT1的HK-2细胞为靶细胞捕集藏族药短管兔耳草成分,运用超高压液相色谱飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术对捕集成分进行鉴定,基于分子对接技术研究捕集成分与URAT1的结合机制.结果:HK-2细胞共捕集了短管兔耳草8个成分,经UPLC-Q-TOF-MS鉴定,分别为金丝桃甘、大车前苷、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、黄大花洋地黄苷、假荆芥属苷、异黄大花洋地黄苷、高车前苷和木犀草素.分子对接结果显示这些成分可与URAT1通过氢键,范德华力,pi-pi作用和疏水作用等方式进行结合,但化合物与URAT1的结合机制和强弱,与化合物结构和类型密切相关.结论:靶细胞捕集,UPLC-Q-TOF-MS与分子对接集成技术可成功阐明藏族药短管兔耳草调控URAT1成分及成分与URAT1的结合机制,研究结果为基于藏族药短管兔耳草的降尿酸新药开发奠定一定的物质与理论基础.

目的 建立现有国家药品标准收载的兔耳草基原全缘兔耳草Lagotis integra(药材名为兔耳草)及短管兔耳草L.brevituba(药材名为洪连)的HPLC指纹图谱方法,并通过所建立的方法对市场上其他3种较为常见的兔耳草(圆穗兔耳草L.ramalana、革叶兔耳草L.alutacea及短穗兔耳草L.brachystachya)进行对比研究.方法 全缘兔耳草与短管兔耳草的HPLC指纹图谱相似度低,故分别建立二者HPLC指纹图谱方法;采用Waters X-Bridge C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.2％甲酸水溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长328 nm;柱温35℃(全缘兔耳草)及25℃(短管兔耳草).结果 建立的全缘兔耳草HPLC对照指纹图谱指认了14个共有峰,并标定了大车前苷、鞭打绣球苷B、10-O-trans-p-methoxycinnamoyl-catalpol及10-O-[(E)-3,4-dimethoxycinnamoyl] catalpol峰;所建立的短管兔耳草HPLC对照指纹图谱存在13个共有峰,并标定松果菊苷、大车前苷及毛蕊花糖苷峰;建立的全缘兔耳草HPLC对照指纹图谱与所有批次全缘兔耳草及革叶兔耳草的相似度均大于0.9,与其他3种兔耳草相似度低;建立的短管兔耳草HPLC对照指纹图谱与所有批次短管兔耳草及圆穗兔耳草的相似度均大于0.9,与其他3种兔耳草相似度低.结论 已建立的方法能有效地对各基原兔耳草进行鉴别,建议草叶兔耳草与全缘兔耳草同时收载于《卫生部药品标准(藏药第一册)》,圆穗兔耳草可作为《中国药典》2015年版一部收载的“洪连”的新基原.

目的:调研藏药兔耳草的使用基原,对比研究其常用基原植物及药材的性状、显微特征.方法:对藏药兔耳草主产区及藏医院、藏药企业、市场开展实地调研,并收集常用且基原准确的兔耳草原植物及药材,采用体式显微镜、光学显微镜等仪器,结合植物分类学、性状鉴别法及显微鉴别法进行观察和比较.结果:藏药兔耳草为玄参科兔耳草属多种植物,常用基原植物有5种,分别是短管兔耳草、全缘兔耳草、圆穗兔耳草、革叶兔耳草及短穗兔耳草,其中全缘兔耳草、圆穗兔耳草及短管兔耳草使用频率较高.各基原植物的主要区别在于花序的形态、花萼后方开裂程度、花冠筒伸直或弯曲、茎直立或匍匐;药材性状的主要区别在于根茎大小、断面特征、匍匐茎的有无、叶的形态及花序;显微特征的主要区别在于叶柄横切面的栅栏组织细胞数目、根表皮细胞层数.结论:临床使用的兔耳草药材基原混乱,部分基原标准未收录;5种兔耳草在基原、性状、显微上均存在一定差异,通过此研究结果可有效鉴别.

目的:研究课题组前期从藏药短管兔耳草中分离得到单体成分及松果菊苷与毛蕊花糖苷对黄嘌呤氧化酶(XOD)的抑制活性,并探讨活性成分与XOD的结合机制,为基于藏药短管兔耳草的降尿酸新药开发奠定物质基础.方法:应用电化学生物传感法筛选XOD抑制活性成分,采用分子对接技术探讨活性成分与XOD之间的结合机制,依据电化学生物传感信号分析藏药短管兔耳草的主要XOD抑制剂.结果:21个化合物中共筛选出6个XOD抑制剂,分别为毛蕊花糖苷、松果菊苷、兔耳草苷H、6'-O-(4-甲氧基-(E)-肉桂酰基)α/β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素和邻苯二甲酸二丁酯.其中,松果菊苷、兔耳草苷H与6'-O-(4-甲氧基-(E)-肉桂酰基)α/β-D-吡喃葡萄糖苷为从藏药短管兔耳草中新发现的XOD抑制剂,松果菊苷与毛蕊花糖苷为藏药短管兔耳草中主要XOD抑制剂成分.除邻苯二甲酸二丁酯抑制活性较弱外,其余5个成分的XOD抑制活性均较强,IC50值介于3.28～7.56 mg·L-1之间.这些活性成分通过氢键、范德华力、pi-pi作用和疏水作用等方式与XOD进行结合.结论:研究为基于藏药短管兔耳草XOD抑制剂类降尿酸新药的开发奠定了一定的物质基础,电化学生物传感方法与分子对接技术联用为中草药XOD抑制剂的活性与机制研究提供了 一种新的工具.

目的 以对乙酰氨基酚(APAP)诱导小鼠药物性肝损伤模型,研究短管兔耳草提取物通过Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路对药物性肝损伤的保护作用及机制.方法 60只昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药物组(200 mg/kg乙酰半胱氨酸)及短管兔耳草提取物低、中、高剂量组(1、2、4 g/kg),每组10只.各给药组给予相应剂量药物,正常组和模型组给予等量0.5％羧甲基纤维素钠,连续给药7 d.末次给药1 h后,除正常组外,其余各组小鼠腹腔注射250 mg/kg APAP建立急性肝损伤模型,4 h后采集血样.试剂盒检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶(ALT)、丙氨酸氨基转移酶(AST)活性及肝组织中丙二醛(MDA)水平、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达.结果 与模型组比较,短管兔耳草提取物高剂量组能降低血清中ALT、AST活性,TNF-α、IL-1β水平,升高肝组织中MDA水平和GSH-Px、SOD活性,下调NF-κB p65、TLR4蛋白表达,改善肝组织病理学形态.结论 短管兔耳草提取物对APAP致小鼠药物性肝损伤具有一定的保护作用,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关.

采用超高效液相色谱-串联线性离子阱-轨道阱组合高分辨质谱(UHPLC-LTQ-orbitrap-MS)技术对藏药洪连(中国药典收载基原短管兔耳草)中黄酮类和苯乙醇苷类成分进行定性分析.采用与动态排除相结合的数据依赖性扫描,在电喷雾离子源正、负离子模式下分别分析黄酮类和苯乙醇苷类成分的精确分子量、碎片离子及保留时间等信息,并结合相关文献系统全面地鉴别藏药洪连中这两类成分.最终共鉴定了 167个化合物,其中黄酮类成分84个,苯乙醇苷类成分83个,极大地丰富了洪连及兔耳草属植物中黄酮和苯乙醇苷类成分的数量和种类,特别是首次从兔耳草属植物中发现了黄酮化合物宝藿苷Ⅰ、脱氧己糖与葡萄糖醛酸组合的二糖氧苷黄酮4个、碳苷黄酮9个、四糖苯乙醇苷15个以及β位有取代基的苯乙醇苷5个,为阐明洪连物质基础并整体提升其质量控制水平以及进一步规范相关基原品种的临床应用提供数据基础和科学依据.