目的:探究矽肺早期炎症中环状RNA（circRNA）的氮6-腺苷酸甲基化修饰（m6A）差异，分析circRNA参与矽肺进程的分子机制。方法:体外培养人单核细胞系（THP-1）诱导的巨噬细胞，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测巨噬细胞活化标志物，细胞计数试剂盒8（CCK8）法检测细胞活力，确定二氧化硅（SiO 2）刺激浓度。比色法测定矽肺模型中总RNA的m6A甲基化修饰变化，检测m6A甲基化酶、去甲基酶和阅读蛋白表达情况。Arraystar m6A-circRNA表观转录组芯片检测二氧化硅模型组和对照组小鼠肺组织中m6A修饰差异表达的circRNA，并用荧光实时定量PCR（RT-qPCR）验证遴选出高表达circRNA。 结果:SiO 2浓度为50 μg/cm 2时对THP-1诱导的巨噬细胞活化标志物和细胞活性影响最为明显（ P<0.05）。与对照组比较，SiO 2引起小鼠原代巨噬细胞和THP-1诱导的巨噬细胞总RNA的m6A水平升高，甲基化酶METTL3和阅读蛋白YTDHF3表达量明显升高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与对照组比较，矽肺模型小鼠肺中132个circRNA的m6A甲基化修饰水平升高，296个circ RNA的m6A甲基化修饰水平下降，基于基础表达量筛选得到靶标-circSLC2A13；SiO 2引起巨噬细胞中circSLC2A13的表达和m6A化修饰明显升高（ P<0.05）。 结论:矽肺早期炎症阶段存在RNA的m6A甲基化修饰异常现象，其中circSLC2A13的m6A甲基化修饰参与矽肺早期炎症中巨噬细胞的激活。

矽肺是一种常见的职业病，其主要病理特征以硅结节的形成和弥漫性肺纤维化为主。在矽肺纤维化过程中巨噬细胞可极化为M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞。M1型巨噬细胞在矽肺早期发挥促炎作用释放多种炎症因子，是炎症反应的核心。M2型巨噬细胞通过分泌抗炎细胞因子和促纤维化介质在矽肺纤维化阶段促进炎症消退和组织修复。M1/M2极化平衡对矽肺的发生发展起着重要作用，调控巨噬细胞极化方向可能对矽肺纤维化的预防和治疗起到积极作用。本文主要对巨噬细胞极化在矽肺纤维化中的作用，矽肺纤维化中调控巨噬细胞极化的相关信号通路，以及矽肺纤维化中基于巨噬细胞极化的潜在治疗靶点进行综述，以期进一步加强对巨噬细胞极化在矽肺纤维化发病和治疗中有关机制的了解。

目的 研究氢对大鼠矽肺模型早期炎症的干预作用和机制.方法 将无特定病原体级Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、汉防己甲素组、氢气组和联合干预组,每组10只.采用一次性气管非暴露法,后4组大鼠均一次性予1.00 mL质量浓度为50.0 g/L的二氧化硅混悬液;对照组大鼠予等体积0.9%氯化钠溶液.染尘24 h后,汉防己甲素组大鼠每日予30 mg/kg体质量的汉防己甲素灌胃;氢气组大鼠每日持续性吸入体积分数为66.6%的氢气 4 h;联合干预组大鼠同时予上述2组大鼠的干预;对照组和模型组大鼠均予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃.干预14 d后处死各组大鼠,测定肺脏器系数,进行肺组织病理学检查;以比色法检测血清中丙二醛水平;以酶联免疫吸附实验法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-1β(IL-1β)水平;以蛋白质印迹法检测肺组织中核酸结合寡聚结构域样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、核转录因子-κB(NF-κB)p65、NF-κB磷酸化p65(NF-κB p-p65)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase1)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)相对表达水平;以免疫组织化学法检测肺组织中NLRP3和NF-κB p65蛋白相对表达水平.结果 肺组织病理学检测结果显示,与对照组比较,模型组大鼠有明显的肺泡破裂融合,间质淋巴细胞和巨噬细胞浸润,肺泡壁增厚,胶原纤维沉积,纤维组织轻度增生;3个干预组大鼠肺组织病理改变程度均较模型组减轻,且与汉防己甲素组和氢气组比较,联合干预组大鼠的肺泡结构更完整,肺泡壁更薄,胶原纤维更少.汉防己甲素组、氢气组和联合干预组大鼠肺脏器系数和肺组织Szapiel评分均低于模型组(P值均<0.05).与对照组比较,模型组大鼠血清丙二醛水平和肺组织中TNF-α、IL-1β水平,以及肺组织中NLRP3、NF-κB p65、NF-κB p-p65、Caspase1和ASC蛋白的相对表达水平均升高(P值均<0.05);3个干预组大鼠上述指标均低于模型组(P值均<0.05);除血清中丙二醛水平和肺组织中NF-κB p-p65外,联合干预组大鼠上述指标均低于汉防己甲素组和氢气组(P值均<0.05).结论 氢可通过NF-κB/NLRP3信号通路干预矽肺早期炎症.

[目的]探讨丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠矽肺早期的治疗作用.[方法] SPF级成年SD雄性大鼠96只随机分为正常对照组、药物对照组、动式染尘组及药物治疗组,每组分别在7、14、28、56d等不同时间点处死大鼠,每组6只.动式染尘组给予动式吸入染尘;药物治疗组除每天给予动式染尘外,腹腔注射丹参酮ⅡA磺酸钠15 mg/(kg·d);药物对照组给予等剂量丹参酮ⅡA磺酸钠;正常对照组不做处理.苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病变情况;利用淋巴管透明质酸受体1(LYVE-1)标记淋巴管,采用免疫组化法检测肺组织内淋巴管增生情况;采用试剂盒检测大鼠淋巴液内丙二醛(MDA)、酶联免疫吸附试验检测血清中层粘连蛋白(LN)的表达水平;Western blot检测大鼠肺组织内单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达.[结果]HE染色结果显示,药物治疗组大鼠病变程度较动式染尘组有所减轻.与正常对照组相比,动式染尘组大鼠的淋巴液中MDA含量和LYVE-1标记的阳性淋巴管数量在染尘14d时均达到高峰[(10.61±0.56) μg/L、4.50 (4.00～5.00)];动式染尘组大鼠肺组织中MCP-1和血清中LN的水平在56d时分别为1.84±0.01、(456.73±10.01) μg/L.与处理56d的动式染尘组相比,药物治疗组大鼠淋巴液中MDA [(5.69±0.90) μg/L]、肺组织中MCP-1(1.45±0.07)以及血清中LN [(427.43±13.89)μg/L]的表达有所降低.[结论]丹参酮ⅡA磺酸钠注射液通过改善矽肺大鼠肺内淋巴微循环、氧化应激以及炎症反应延缓矽肺大鼠发病进程.

目的 筛选早期矽肺大鼠肺组织中微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱的变化,为差异miRNA的功能分析提供信息.方法 将SPF级Wistar雄性大鼠随机分为阴性对照组和二氧化硅(SiO2)染尘组,每组30只.染尘组采用一次性非暴露法气管内灌注1ml SiO2悬浊液建立大鼠矽肺模型,对照组大鼠相同方法气管内注入1 ml灭菌生理盐水,分别于不同处理后1、7、14、21、28 d采集各组大鼠肺组织.其中3只大鼠取出肺组织进行病理学观察,另3只用miRNA微阵列芯片技术筛选肺组织中差异表达的miRNA,通过miRNA芯片筛选结合反转录定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)方法验证miRNA-423-5p和miRNA-26a-5p在两组间的实际表达水平,对miRNA-423-5p和miRNA-26a-5p进行靶基因预测并进行GO(gene ontology)富集分析和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路分析.结果 对照组大鼠肺组织21、28 d炎症反应较1、7、14d明显减轻,SiO2染尘组大鼠肺组织有持续性炎性细胞浸润;对照组大鼠21、28 d有少量胶原分布,SiO2染尘组大鼠肺组织21d后开始出现大量胶原纤维沉积.与对照组比较,SiO2染尘组各时间点大鼠肺组织中miRNA-423-5p表达明显上调,miRNA-26a-5p表达明显下调,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 早期矽肺大鼠肺组织中miRNA-423-5p的上调和miRNA-26a-5p的下调可能与早期矽肺的发生发展有关.

目的 观察脂肪间充质干细胞(ADSCs)对矽尘所致大鼠肺损伤的修复作用.方法 选取SPF级健康雌性SD大鼠28只,其中供体大鼠8只,获取大鼠原代ADSCs-GFP,对矽肺模型大鼠进行ADSCs-GFP尾静脉注射,定期观察肺脏的绿色荧光表达情况,确定ADSCs的归巢能力.获取大鼠原代ADSCs,将20只受体大鼠随机分为空白对照组、模型组、溶剂对照组和ADSCs组,通过非暴露式气管滴注法建立矽肺大鼠模型;滴注二氧化硅24 h后,ADSCs组尾静脉注射106个/kg体重的ADSC,干预28 d后观察评价肺组织病理学.通过免疫组化法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和细胞色素C,探索ADSCs对矽肺模型大鼠肺纤维化的早期干预机制.结果 模型组大鼠暴露于二氧化硅28 d后,具有明显的肺纤维化表现.与模型组和溶剂对照组比较,ADSCs组肺部炎症减轻、矽结节数量减少、胶原纤维沉积面积减少.免疫组化结果显示,ADSCs移植后大鼠肺组织Caspase-3、细胞色素C蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达增加.结论 ADSCs回输对于延缓染矽尘大鼠早期矽肺纤维化具有明显的作用,其机制可能与调节细胞凋亡过程有关.

目的 通过检测染矽尘大鼠肺组织和A549细胞中微RNA-29b-3p (miRNA-29b-3p)和微RNA-34c-3p(miRNA-34c-3p)的表达水平,探讨miRNA-29b-3p和miRNA-34c-3p在肺纤维化进程中的作用.方法 SPF级雄性Wistar大鼠60只,按体重随机分为对照组和二氧化硅(SiO2)染尘组,每组30只,用一次性非暴露式气管滴注法灌注SiO2染尘组大鼠1 ml SiO2悬浊液,对照组大鼠相同方法气管内注入1 ml灭菌生理盐水.于染尘后1、7、14、21、28 d两组分别采集6只大鼠肺组织,其中3只大鼠取出肺组织进行病理学观察,另外3只采用miRNA微阵列芯片技术筛选肺组织中差异表达的miRNA.在体外细胞水平中培养A549细胞,分为对照组、SiO2刺激组和TGF-β1刺激组,在处理后的12、24和48 h收取细胞,通过荧光定量PCR(qRT-PCR)方法验证miRNA-29b-3p和miRNA-34c-3p在各组大鼠肺组织和A549细胞中的表达水平,对miRNA-29b-3p和miRNA-34c-3p进行靶基因预测并进行GO富集分析和KEGG通路分析.结果 对照组大鼠体重增长速度较SiO2染尘组大鼠明显;与对照组比较,SiO2染尘组大鼠的肺脏质量和肺系数明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).对照组大鼠肺组织21、28 d炎症反应较1、7、14d明显减轻,SiO2染尘组大鼠肺组织有持续性炎性细胞浸润;对照组大鼠肺组织21、28 d有少量胶原分布,SiO2染尘组大鼠肺组织21d后开始出现大量胶原纤维沉积.与对照组比较,SiO2染尘组中miRNA-29b-3p和miRNA-34c-3p表达水平均明显下调,差异均有统计学意义(P.＜0.05).A549细胞在SiOz和人重组TGF-β1处理后,与对照组比较,24 h和48 h处理组中miRNA-29b-3p和miRNA-34c-3p表达水平均明显下调,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 大鼠肺组织和A549细胞中miRNA-29b-3p和miRNA-34c-3p的下调可能与早期矽肺的发生发展有关,有望成为早期矽肺诊断以及预后的指标.

目的 观察蛋白激酶B(Akt)信号通路在游离二氧化硅(SiO2)诱导小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7细胞发生Akt磷酸化的情况,探讨Akt信号通路在矽肺早期炎症反应中的作用.方法 ①常规培养RAW264.7细胞,分为5个不同时间点的SiO2刺激组,采用终质量浓度为100 mg/L的SiO2混悬液刺激15、30、60、120和240 min,另设不予SiO2处理的对照组.染尘结束后,收集细胞,采用蛋白免疫印迹法检测磷酸化(丝氨酸/苏氨酸位点)Akt(p-Akt)表达水平,以选择最佳染尘时间.②将RAW264.7细胞分为对照组(不予任何处理)、SiO2组(予终质量浓度为100 mg/L SiO2混悬液处理)和干预组(予Akt活化抑制剂Deguelin预处理1h后,予终质量浓度为100 mg/LSiO2混悬液处理).孵育60 min后,收集细胞,以细胞免疫荧光法观察细胞内p-Akt表达及定位情况,以蛋白免疫印迹法检测细胞中p-Akt相对表达水平,以酶联免疫吸附实验检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平.结果 ①离体RAW264.7细胞染尘模型最佳处理时间为60 min.②细胞免疫荧光结果显示,RAW264.7细胞经SiO2刺激后,Akt磷酸化作用被激活;SiO2组细胞p-Akt荧光表达量较对照组增强,干预组细胞p-Akt荧光表达量弱于SiO2组.SiO2组、干预组细胞内p-Akt蛋白相对表达水平和细胞上清液中TNF-α、TGF-β的水平均高于对照组(P＜0.05),干预组细胞上述3个指标均低于SiO2组(P＜0.05).结论 Akt信号通路可能通过参与SiO2诱导巨噬细胞磷酸化而参与矽肺早期炎症反应的过程.

目的 探索let-7d-3p和miRNA-21-5p在二氧化硅(SiO2)诱导的大鼠纤维化肺组织中的差异表达及其意义.方法 SPF级Wistar雄性大鼠随机分为对照组和模型组,每组30只,采用一次性气管内灌注1 ml SiO2悬浊液建立大鼠矽肺模型,对照组大鼠相同方法灌注1ml灭菌生理盐水.分别于染尘后1、7、14、21、28 d采集各组大鼠肺组织,每组取6只,对3只大鼠肺组织进行病理学观察,另外3只采用miRNA微阵列芯片技术筛选肺组织中差异表达的miRNA,通过miRNA芯片筛选结合反转录定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)验证let-7d-3p和miRNA-21-5p在两组间的表达水平,对let-7d-3p和miRNA-21-5p进行靶基因预测并进行GO(gene ontology)富集分析和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路分析.结果 对照组大鼠1、7、14和21 d Masson染色均可见正常肺组织,未发现胶原纤维,28 d大鼠肺间质和支气管周围仅有少量纤细的胶原分布;模型组大鼠1 d和7 d未发现胶原纤维,14 d染色可见较多以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润,未见明显纤维组织,21 d和28 d模型组大鼠肺间质内可见大片状密集的胶原纤维沉积,在肉芽组织、支气管及血管壁周围胶原蛋白增生明显.模型组中let-7d-3p的表达水平均显著下调,miRNA-21-5p表达水平均显著上调,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 模型组中let-7d-3p和miRNA-21-5p表达变化明显,可能与早期矽肺的发生发展有关.

矽肺是我国的主要职业病之一.早期诊断和预测矽肺发生是控制矽肺的有效手段,但依据放射学和呼吸功能异常做出的矽肺诊断往往限于较晚期的患者.寻找由于矽尘沉积及肺纤维化而出现变化的血清标志物是矽肺研究的热点领域之一.本文复习了近年来矽肺血清标志物研究的进展情况,内容包括炎症性细胞因子(肿瘤坏死因子α、白细胞介素17、转化生长因子β1和含有IL-12p40的细胞因子等)、miRNAs(miR-21、miR-200c等)、血清酶类(脯氨酸肽酶、血红素加氧酶1、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和血管紧张素转化酶)、免疫球蛋白及肾连接蛋白、克拉拉细胞蛋白16等.有关矽肺血清标志物的研究很多,有些标志物显示了其在矽肺早期检出和诊断中的潜在价值.矽肺血清标志物敏感度和特异度的进一步完善和多中心大规模验证仍是矽肺血清标志物在临床实际应用必需的工作.