探讨耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，CRKP）的临床分布及耐药特征，为预防CRKP的感染和治疗提供参考依据。回顾性分析2017年1月至2021年12月临床分离的510株CRKP菌株，应用 MALDI-TOF质谱仪和VITEK-2 Compact微生物药敏分析仪进行菌种鉴定和药敏试验，采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验对CRKP菌株进行碳青霉烯酶表型检测，通过免疫显色法对CRKP菌株进一步分型并用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）进行基因检测。结果显示，510株CRKP菌株主要来源于痰液302株（59.2%）、尿液127株（24.9%）、血液47株（9.2%）；科室主要分布于重症医学科231株（45.3%），其次为呼吸内科108株（21.2%）和神经外科79株（15.5%）；药敏试验结果显示对常用抗菌药物的耐药率均较高，仅对替加环素和头孢他啶/阿维巴坦保持很好的敏感性，但对替加环素的耐药率逐年上升，从2017年的1.0%上升到2021年的10.1%，差异有统计学意义（ χ2=14.444， P<0.05）。碳青霉烯酶抑制剂增强试验结果显示，510株CRKP中产碳青霉烯酶 461株（90.4%），其中丝氨酸酶 450株（88.2%），金属酶 9株（1.8%），既产丝氨酸又产金属酶2株（0.4%）；不产酶的有49株（9.6%）；免疫显色法进一步分型显示 461株CRKP中分型检测为KPC 450株（97.6%），IMP 2株（0.4%）；NDM 7株（1.5%）；KPC+NDM 2株（0.4%）；PCR基因检测结果：blaKPC 450株（97.6%），blaIMP 2株（0.4%），blaNDM 7株（1.5%），blaKPC+NDM 2株（0.4%）。综上，CRKP菌株主要来源于痰液标本，分布于重症医学科，耐药特征以产碳青霉烯酶中的KPC型为主，临床微生物实验室应加强对CRKP菌株的监测，为预防CRKP的感染，减少细菌耐药的产生提供参考依据。

探讨重症监护病房耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，CRKP）碳青霉烯酶分布情况，并比较耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant hypervirulent Klebsiella pneumoniae，CR-hvKP）和耐碳青霉烯非高毒力肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant non-hypervirulent Klebsiella pneumoniae，CR-non-hvKP）两者之间的临床特征。收集并回顾性分析2020年5月至2021年3月西安交通大学第二附属医院重症监护病房49例患者分离的53株非重复CRKP菌株，使用碳青霉烯酶抑制剂增强试验进行产碳青霉烯酶菌株初筛，拉丝试验进行高黏液表型初筛，使用PCR方法检测5种主要的碳青霉烯酶基因（ blaKPC-2、 blaNDM、 blaIMP、 blaVIM和 blaOXA-48-like），常见血清型（K1和K2）和毒力基因（rmpA和iutA），将同时检测出rmpA和iutA基因的菌株视为高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulent Klebsiella pneumoniae，hvKP），并对CR-hvKP进行全基因组测序。针对49例感染患者的临床资料，采用独立样本 t检验，Mann-Whitney U检验，χ2检验或Fisher精确概率法比较CR-hvKP和CR-non-hvKP两者的临床特征差异。重症监护病房分离的CRKP存在广泛耐药，对多黏菌素B和替加环素仍具有良好的敏感性。CRKP主要的耐药机制为产碳青霉烯酶（52/53，98.1%），53株CRKP除1株未检测到碳青霉烯酶外，其余52株CRKP至少检测到1种碳青霉烯酶耐药基因，其中45株携带单一酶型，包括36株 blaKPC-2（36/53，67.9%）、8株 blaNDM（8/53，15.1%）和1株 blaIMP（1/53，1.9%），7株携带两种酶型 blaKPC-2和 blaNDM（7/53，13.2%）。拉丝试验和毒力基因检测结果显示，53株CRKP检出7株（13.2%）CR-hvKP，其中2株拉丝试验阳性。测序结果表明CR-hvKP主要属于ST11型。CR-hvKP感染患者年龄几乎都在60岁以上（7/7），存在侵入性治疗（7/7）、肺部感染高黏液表型（2/7）以及具有较高的死亡率（5/7）；CR-hvKP感染患者的中性粒细胞百分比（86.44±4.70）%高于CR-non-hvKP感染患者（78.90±19.15）%，差异有统计学意义（ t =-2.225， P=0.032）。综上，重症监护病房CR-hvKP菌株以产KPC-2酶，荚膜血清型K2和ST11序列型为主，需加强对CR-hvKP菌株的监测与控制，防止耐药和高毒力菌株的共同进化。

目的:研究湖州地区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)菌株的临床分布、耐药情况和基因型，以及ST分型，为本地区CRKP感染的临床治疗和医院感染控制提供指导。方法:收集2019年5月至2022年4月湖州地区临床分离的43株CRKP菌株，应用MALDI-TOF质谱仪和Vitek-2 Compact微生物药敏分析仪进行菌种鉴定和药敏试验，采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验对CRKP菌株进行碳青霉烯酶表型检测，通过免疫显色法和sanger测序对CRKP菌株进行耐药基因分析，采用多位点序列分析(MLST)检测CRKP ST分型。数据采用Excel 2019软件进行录入和统计。结果:43株CRKP菌株主要来自>60岁患者(65.12%)；样本来源主要是痰液(79.07%)；科室来源主要是重症医学科(25.59%)。CRKP对多黏菌素敏感，对替加环素和头孢他啶/阿维巴坦的耐药率较低，分别为9.30%(4/43)和6.98%(3/43)，对其他临床常用抗菌药物耐药率均较高；碳青霉烯酶检测均为阳性，携带 blaKPC耐药基因40株(93.02%)，携带 blaNDM基因3株(6.98%)；ST分型主要为ST11(60.47%)。 结论:患者感染CRKP后病情重，抗菌药物选择有限，且存在病房内横向传播风险。因此，应结合该地区CRKP的分子流行病学特征，合理指导医院感染防控和临床治疗。

目的 分析临床分离的耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)类型、来源、临床分布、耐药性、耐药基因分型,为临床合理使用抗菌药物提供实验室依据.方法 收集深圳市南山区两家三级医院2020年7月至2021年6月临床分离的CRE菌株34株.应用VITEK MS全自动快速微生物质谱检测系统和VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定药敏系统进行细菌鉴定与药敏试验,采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验(PBA-EDTA法)检测碳青霉烯酶耐药表型,采用聚合酶链反应(PCR)方法检测碳青霉烯酶耐药基因.结果 分离的34株CRE菌株包括肺炎克雷伯菌24株,大肠埃希菌8株,弗劳地枸橼酸杆菌1株,产气肠杆菌1株.标本主要来自呼吸道、泌尿道、血液等.CRE菌株对各类抗菌药物表现出不同程度的耐药率,对头孢曲松、美罗培南、厄他培南、氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率为100％,对环丙沙星、左氧氟沙星、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为94％以上.PBA-EDTA法与PCR法对碳青霉烯酶的检出率差异无统计学意义.结论 CRE菌株主要为肺炎克雷伯菌,耐药基因主要为blaKPC.采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验(PBA-EDTA法)进行碳青霉烯酶检测,比较适合临床微生物实验室常规开展,对于临床合理使用抗菌药物和院感防控具有重要作用.

目的 探讨多重PCR检测 5 种常见肠杆菌目细菌碳青霉烯酶耐药基因方法的建立及应用评价.方法 收集临床分离对碳青霉烯类药物耐药的非重复肠杆菌目细菌 118 株和对碳青霉烯类药物敏感的肠杆菌目细菌 9 株,以普通PCR 检测 blaKPC,blaNDM,blaVIM,blaIMP,blaOXA-48-like 结果为参考.采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验对试验菌株进行碳青霉烯酶表型检测;构建多重PCR检测 5 种常见碳青霉烯酶耐药基因.对多重PCR、抑制剂增强试验与普通 PCR 检测肠杆菌目细菌耐药的灵敏度、特异度和准确度进行比较.结果 与普通PCR相比,多重PCR灵敏度为 88.54%,特异度为 100.00%,κ值为 0.79;抑制剂增强试验灵敏度为 92.71%,特异度为 93.55%,κ值为 0.81.在CRE的检测中,虽然多重PCR 检测的灵敏度稍低于碳青霉烯酶抑制剂增强试验,但其在特异度上更具优势;二者在阳性率检测上比较差异无统计学意义(P>0.05),检测一致性良好(κ=0.63).结论 该研究成功构建多重PCR 体系,能快速、准确检测肠杆菌目细菌中 5 种常见碳青霉烯酶耐药基因,与临床现行的碳青霉烯酶抑制剂增强试验相比,二者对肠杆菌目细菌耐药检测具有良好的一致性,能极大缩短检测时间.

目的 评估迪尔碳青霉烯酶抑制剂检测碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)产不同基因型碳青霉烯酶的效能.方法 收集 2018-2020 年广东省中医院临床分离的 73 株非重复 CRE.采用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合乙二胺四乙酸(EDTA)碳青霉烯灭活试验(eCIM)以及碳青霉烯酶抑制剂检测碳青霉烯酶,采用聚合酶链式反应(PCR)检测 10 种常见β-内酰胺酶基因.以PCR为金标法,评估两种表型试验的临床效能.结果 mCIM试验阳性 54 株,产丝氨酸碳青霉烯酶 20 株,产金属β-内酰胺酶 34 株,符合率为 98.63%(72/73).碳青霉烯酶抑制剂检出 56 株产碳青霉烯酶,产A类酶 22 株,产B类酶 34 株.1 株产OXA-181 的摩根摩根菌为假阴性,2 株不产碳青霉烯酶、高产头孢菌素酶 DHA 的 CRE 为假阳性.碳青霉烯酶抑制剂灵敏度和特异度分别为 98.18%(54/55)和 88.89%(16/18),符合率为 95.89%(70/73).结论 mCIM联合eCIM无法区分A类和D类丝氨酸碳青霉烯酶.碳青霉烯酶抑制剂符合率较 mCIM联合 eCIM试验稍低,能有效鉴别 A类和 B类酶,但在 D类酶和高产 AmpC酶的CRE检测上仍存在不足.碳青霉烯酶抑制剂与 mCIM/eCIM联合能更全面地实现碳青霉烯酶分型,精准指导临床合理用药.

当前,细菌耐药已成为全球公共健康领域的重大挑战,其中尤以碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales, CRE)引起的感染形势最为严峻.碳青霉烯类抗菌药物包括亚胺培南、美罗培南和厄他培南等,是治疗多重耐药革兰阴性杆菌所致感染最有效的抗菌药物之一.随着该类药物在临床的广泛应用,肠杆菌目细菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率呈逐年快速上升趋势.CHINET中国细菌耐药监测网历年监测结果显示 [1-2],我国临床分离肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率从2005年的3％快速攀升至2019年的25％以上,上升幅度高达8倍.2018年全国细菌耐药监测网(CARSS)数据显示,全国1429所医院临床分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的平均耐药率为10.1％,部分省市甚至超过20％ [3].由于CRE菌株通常还携带有对其他抗菌药物耐药的基因,对抗菌药物呈广泛耐药甚至全耐药的特征,使临床的抗感染治疗面临无药可用的困境 [4].

目的 检测临床碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(carbapenemresistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)感染的耐药基因,为治疗和防控提供依据.方法 采用回顾性调查方法,收集2017-08至2020-03分离自武警四川总队医院13个科室的32株CRKP,用Microscan.Walk Away96全自动细菌鉴定药敏分析仪进行常规药敏试验,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合酶抑制剂增强试验判断其产金属β-内酰胺酶和丝氨酸碳青霉烯酶的情况.Gene-Xpert Carba-ⅩⅤⅠR2全自动病原体快速检测系统检测耐药基因.结果 药敏结果显示我院CRKP对碳青霉烯类、头孢类、头霉素类、单环类、喹诺酮类、氨基糖苷类等抗菌药物均表现出较高耐药性.32株CRKP mCIM结果30株阳性;酶抑制剂增强试验结果表明,1株肺炎克雷伯菌产A类丝氨酸酶加B类β-内酰胺酶,其余29株产A类丝氨酸酶;GeneXpert检测耐药基因,30株mCIM试验结果阳性的菌株中1株肺炎克雷伯菌产KPC+NDM,其余29株均产KPC,没有产IMP,VIM,OX-48的菌株.结论 该院CRKP对常用抗菌药物表现出高水平耐药,耐药机制主要为产碳青霉烯酶,耐药基因型主要为KPC型.在没有条件进行基因型分析的基层单位mCIM试验协同酶抑制剂增强试验能够满足临床需要.

目的 探讨表达不同碳青霉烯酶的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)治疗策略,为临床有效治疗CRE感染提供依据.方法 回顾性分析我院2016年1月-2018年12月临床标本中分离的CRE的相关资料及药敏数据.复苏碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和弗氏柠檬酸杆菌,PCR检测其携带的碳青霉烯耐药基因,并比较碳青霉烯酶表型试验与基因结果的一致性.采用肉汤稀释法检测替加环素和头孢他啶邝可维巴坦的敏感性,K-B法检测氨曲南和头孢他啶邝可维巴坦联合作用效果.结果 CRE对常用抗生素具有较高的耐药性.128株CRE菌株均含碳青霉烯耐药基因,其中81株含blaKPC,37株含baNDM,5株含blaIMP,5株同时含blaKPc和blaNDM.酶抑制剂增强试验能够准确检测各种碳青霉烯酶酶型.替加环素的敏感率为97.6％,头孢他啶/阿可维巴坦对产丝氨酸酶菌株的敏感率为100％,而对产金属酶和双酶菌株无效.氨曲南和头孢他啶/阿可维巴坦有协同作用,对产金属酶和双酶菌株有很强的抗菌活性.结论 不同酶型CRE可考虑采用不同治疗策略,利用酶抑制剂增强试验确定酶型后,合理选择抗生素进行有效治疗.

目的 分析甘肃省人民医院2018—2020年碳青霉烯耐药革兰阴性杆菌(CRO)的临床分布、耐药基因携带情况,为医院CRO的防控提供依据.方法 采用飞行质谱仪进行细菌鉴定;K-B纸片扩散法和PhoenixTM-100革兰阴性杆菌药敏板进行药敏试验.从临床标本中共分离出CRO菌株60株,用WHONET 5.6软件统计CRO菌株的耐药情况及临床分布.采用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)和碳青霉烯酶抑制剂增强试验进行耐药表型检测,荧光定量PCR进行耐药基因型检测.结果 60株CRO菌株经鉴定为肺炎克雷伯菌20株、大肠埃希菌11株、阴沟肠杆菌13株、雷极普罗威登菌5株、弗劳地枸橼酸杆菌2株和铜绿假单胞菌9株;主要来源于重症监护病房(ICU)、神经内科、泌尿科和烧伤科等临床科室.经耐药表型检测检出:A类丝氨酸碳青霉烯酶17株(肺炎克雷伯菌16株、弗劳地枸橼酸杆菌1株),B类金属β-内酰胺酶38株(阴沟肠杆菌12株、大肠埃希菌11株、雷极普罗威登菌5株、铜绿假单胞菌6株、肺炎克雷伯菌4株),4株(铜绿假单胞菌3株和阴沟肠杆菌1株)为阴性;另外1株弗劳地枸橼酸杆菌采用mCIM联合eCIM试验检测为B类金属β-内酰胺酶,而用碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测为混合型(A+B类酶).经PCR检测检出KPC酶17株、NDM型32株,IMP1型酶6株,KPC+NDM混合基因型1株.结论 甘肃省人民医院CRO菌株的表型耐药机制是产A类丝氨酸碳青霉烯酶和B类金属β-内酰胺酶,主要携带KPC、NDM和IMP1基因型.