目的:研究广泛耐药肺炎克雷伯菌（XDRKP）耐药表型特点及相关耐药机制。方法:收集山西白求恩医院2018年1月至2020年12月内分离的3 201株肺炎克雷伯菌并根据已有药敏结果筛选116株广泛耐药肺炎克雷伯菌纳入研究。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）及梅里埃VITEK-compact 2进行菌株鉴定及药敏试验，药敏结果K-B法或微量肉汤稀释法复核。改良碳青霉烯酶灭活试验（mCIM）联合乙二胺四乙酸协同碳青霉烯酶灭活试验（eCIM）检测XDRKP碳青霉烯酶表型，并与碳青霉烯酶基因扩增结果比对。聚合酶链反应（PCR）扩增耐药基因：碳青霉烯酶基因（blaKPC、blaNDM、blaVIM、blaIMP、blaOXA）；氨基糖苷耐药基因：16S rRNA甲基化酶基因（rmtA、rmtC、rmtD、rmtG、rmtH、armA、npmA、rmtB、rmtE、rmtF），氨基聚糖苷修饰酶基因变体［aac（6′）-Ib-cr］；喹诺酮耐药基因：DNA解旋酶保护蛋白qnr家族基因（qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS），外排泵蛋白基因（oqxAB、qepA），氨基聚糖苷修饰酶基因变体［aac（6′）-Ib-cr］；替加环素耐药Tet蛋白基因［外排泵蛋白基因：tet（A）和tet（L）］，核糖体保护蛋白基因［tet（M）］，替加环素修饰酶基因［tet（X）］。对照分析各XDRKP耐药表型与相应耐药基因携带情况间的关系。结果:共收集到XDRKP 116株。头孢菌素类及喹诺酮类抗菌药物耐药率100%（116/116），碳青霉烯类抗菌药物耐药率99.14%（115/116），氨基糖苷类抗菌药物庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星耐药率分别为95.69%（111/116）、94.83%（110/116）、88.79%（103/116），磺胺类抗菌药物耐药（44/116）与替加环素耐药（3/116）检出率较低。mCIM联合eCIM试验结果与碳青霉烯酶基因扩增结果一致率95.65%（110/115）。各耐药基因阳性率：blaKPC 90.52%（105/116），blaNDM 10.34%（12/116），rmtB 81.90%（95/116），armA 2.59%（3/116），oxqAB 65.52%（76/116），qnrB 6.03%（7/116）、qnrS 12.93%（15/116）、aac（6′）-Ib-cr 7.76%（9/116），tet（A）21.55%（25/116）。其余各耐药基因未检出。匹配分析发现，共有65株XDRKP耐药表型与耐药基因型不匹配，即抗菌药物耐药表型不能用携带相应耐药基因来解释。结论:XDRKP中各类耐药基因的广泛分布和某些基因［如aac（6′）-Ib-cr、oqxAB］的多重耐药作用是广泛耐药产生的潜在原因。不同菌株针对同一类抗菌药物可能携带一种或多种耐药基因。此外，部分菌株耐药表型与耐药基因不匹配，提示耐药基因的表达调控及存在其他耐药机制也与XDR的产生有关。

目的:评估mCIM联合eCIM试验、Carba-5和Carba-R三种方法检测碳青霉烯类耐药细菌(carbapenem-resistant organisms，CRO)中常见碳青霉烯酶型的性能。方法:随机挑选2019年1月至2020年12月浙江大学医学院附属邵逸夫医院临床分离的122株非重复CRO菌株，应用生物梅里埃MALDI-TOF MS全自动快速质谱仪对菌株进行菌种鉴定，分别采用改良碳青霉烯类抗生素灭活试验(mCIM联合eCIM试验)、Carba-5检测条和Carba-R试剂盒对所有菌株进行碳青霉烯酶型检测；以PCR法检测结果为金标准，评价上述3种检测方法的性能。结果:122株CRO菌株属于12个不同菌种，PCR法碳青霉烯酶型检测结果：共112株检测结果阳性，KPC-2型阳性70株，占57%(70/122)，其中肺炎克雷伯菌46株，铜绿假单胞菌12株，其他菌株12株；OXA-232型阳性19株占15%(19/122)，均为肺炎克雷伯菌；NDM型阳性20株占16%(20/122)，其中NDM-1型阳性7株和NDM-5型阳性13株，以大肠埃希菌为主(12/20)；IMP-4型阳性2株，分别为肺炎克雷伯菌和阿氏肠杆菌；检测出1株同时产KPC-2和IMP-4的肺炎克雷伯菌；未检测到VIM型碳青霉烯酶；有10株未检出以上5种基因型。与金标准PCR方法相比mCIM联合eCIM试验灵敏度为95.65%(22/23)，特异度为100.00%(90/90)，阳性预测值(PPV)为100.00%(22/22)，阴性预测值(NPV)为98.90%(90/91)，诊断准确度为99.11%(112/113)；Carba-5和Carba-R试验的灵敏度、特异性、PPV、NPV和诊断准确度均为100%。结论:碳青霉烯耐药肠杆菌目细菌和铜绿假单胞菌临床微生物实验室可以使用Carba-5试验快速、准确地检测常见碳青霉烯酶型，有条件的实验室还可以选择Carba-R试验，并监测患者是否存在碳青霉烯耐药菌的定植；而Carba-5和Carba-R检测结果阴性时，建议结合药敏结果进行mCIM联合eCIM试验检测。

目的:探讨改良碳青霉烯灭活试验（modified carbapenem inactivation method， mCIM）联合EDTA改良碳青霉烯灭活试验（EDTA-modified carbapenem inactivation method， eCIM）检测感染患者分离的耐碳青霉烯肠杆菌科细菌 （Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae， CRE）碳青霉烯酶的方法对诊控CRE感染的应用价值。 方法:回顾性分析2017年1至12月天津医科大学总医院临床感染患者分离的78株非重复对碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆菌科细菌的耐药情况，应用Vitek2 Compact全自动细菌鉴定仪鉴定至种并检测其对厄他培南和亚胺培南的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration， MIC），用分子生物学PCR试验检测其碳青霉烯酶基因 blaKPC、 blaNDM、 blaIMP和 blaVIM，基因测序确定基因型作为金标准，同时采用mCIM联合eCIM试验对所收集的细菌进行碳青霉烯酶检测。以PCR结果为标准，计算mCIM和eCIM的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及Kappa值，进行mCIM和eCIM联合检测结果与PCR结果的一致性检验。 结果:78株碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌应用PCR法检测出碳青霉烯酶基因阳性74株，阴性4株，其中 blaKPC-2阳性60株， blaNDM-1阳性2株， blaNDM-5阳性7株， blaNDM-9阳性3株， blaIMP-4阳性1株， blaKPC-2和 blaNDM-1同时阳性1株。mCIM检测碳青霉烯酶的敏感度为100%，特异度为100%， Kappa值为1.000；mCIM和eCIM联合检测丝氨酸碳青霉烯酶敏感度为100%，特异度为100%，Kappa值为1.000；联合检测金属碳青霉烯酶敏感度为92.9%，特异度为100%， Kappa值为0.955。 结论:采用mCIM、eCIM联合试验对CRE中的碳青霉烯酶进行检测，实用性强，结果易于判读，依据CRE细菌中基因型的不同，将为临床CRE诊断与抗菌药物精准治疗和感染控制提供重要诊断依据。

分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，CRKP）分子流行病学及探讨 blaKPC和 blaNDM水平传播机制，为预防和治疗CRKP提供参考依据。回顾性分析2022年1—12月湖南中医药大学第一附属医院临床非重复分离的CRKP，共计 49株。采用改良碳青霉烯灭活实验（mCIM）、EDTA-碳青霉烯灭活实验（eCIM）进行表型筛选；聚合酶链式反应（PCR）检测CRKP碳青霉烯耐药基因、β内酰胺酶耐药基因和毒力基因；多位点序列分析检测CRKP菌株的同源性。通过接合试验，推断 blaKPC和 blaNDM两种碳青霉烯耐药基因的水平传播机制。结果显示，本研究共收集到CRKP 49株，有44株携带 blaKPC，8株携带 blaNDM，其中同时携带 blaKPC和 blaNDM两种耐药基因的CRKP（ blaKPC+ blaNDM-CRKP）有3株。28株CRKP携带毒力基因（28/49，57.2%），1株CRKP拉丝试验阳性，且同时携带 Aerobactin和 rmpA两种毒力基因。共检出5种ST型，以ST11为主（41/49，83.7%）。3株 blaKPC-CRKP均接合成功，3株 blaNDM-CRKP仅1株接合成功，接合子菌株对亚胺培南以及头孢菌素类抗菌药物的敏感性均显著降低。综上，本研究CRKP耐药机制主要以产KPC酶为主，且同时携带多种β-内酰酶耐药基因，并有高毒力耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（high virulence carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，hv-CRKP）和 blaKPC+ blaNDM-CRKP的局部流行。 blaKPC和 blaNDM可通过质粒水平传播，不同菌株的水平传播效率存在差异。

目的:监测2018年中国院内革兰阴性杆菌对常用抗菌药物的敏感性。方法:前瞻性收集2018年1至12月全国13家教学医院革兰阴性杆菌。采用琼脂稀释法及微量肉汤稀释法测定美罗培南等抗菌药物的最低抑菌浓度（MICs）。采用美国临床和实验室标准协会（CLSI）2019年M100S（第29版）标准进行药敏结果判断。数据分析采用WHONET-5.6软件。结果:共收集1 214株非重复革兰阴性杆菌，血和无菌体液标本来源占96.7%（1 174/1 214）。主要抗菌药物对871株肠杆菌科细菌的敏感率依次为阿米卡星（93.2%，812/871）、美罗培南（92.0%，801/871）、厄他培南（88.9%，774/871）、亚胺培南（88.4%，770/871）、哌拉西林/他唑巴坦（84.0%，732/871）、头孢哌酮/舒巴坦（83.1%，724/871）、头孢吡肟（71.4%，622/871）、米诺环素（68.9%，600/871）、头孢他啶（66.9%，583/871）及左氧氟沙星（54.4%，474/871）。大肠埃希菌对三代头孢菌素的耐药率分别为61.5%（155/252）（头孢曲松）和60.7%（153/252）（头孢噻肟）。肺炎克雷伯菌对三代头孢菌素的耐药率分别为56.3%（125/222）（头孢曲松）和57.7%（128/222）（头孢噻肟）。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶（ESBLs）检测阳性率分别为50.4%（127/252）和18.0%（40/222），且全部ESBLs阳性菌株对亚胺培南和美罗培南的敏感率均>95%。碳青霉烯耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的发生率分别为2.8%（7/252）和20.3%（45/222）。对阴沟肠杆菌、产气克雷伯菌和弗劳地柠檬酸杆菌，抗菌活性最高的药物依次为替加环素（96.3%~100%）、阿米卡星（94.9%~97.1%）、美罗培南（89.8%~96.6%）及亚胺培南（89.8%~94.9%）。奇异变形杆菌、摩根摩根菌和黏质沙雷菌对美罗培南、阿米卡星的敏感率均大于90%。对67株碳青霉烯耐药的肠杆菌科细菌（CRE）进行改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）显示，45株为丝氨酸型碳青霉烯酶，20株为金属酶。铜绿假单胞菌对美罗培南和亚胺培南的敏感率分别为73.2%（112/153）和66.0%（101/153）。鲍曼不动杆菌对黏菌素的敏感率最高（100%，163/163），其次是替加环素（87.1%，142/163）。血标本与其他感染来源的标本相比较，肺炎克雷伯菌[17.6%（27/153）比21.7%（15/69）]和鲍曼不动杆菌[68.3%（71/104）比71.2%（42/59）]碳青霉烯耐药比例低，而大肠埃希菌[2.5%（4/198）比0%（0/54）]和铜绿假单胞菌[37.0%（33/89）比18.8%（12/64）]碳青霉烯耐药比例高。结论:碳青霉烯类对肠杆菌科细菌仍保持较高的抗菌活性，尤其是仅产ESBLs的菌株。碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌应引起足够重视。产碳青霉烯酶是当前我国碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌最重要的耐药机制。

目的:了解临沂地区碳青霉烯酶的基因型及耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）对头孢他啶-阿维巴坦（CAZ/AVI）的药物敏感性，为临床合理用药提供依据。方法:选取临沂市人民医院2019年1月至2020年12月临床标本分离获得的179株CRE，用改良碳青霉烯酶灭活试验（mCIM试验）和乙二胺四乙酸（EDTA）协同碳青霉烯酶灭活试验（eCIM试验）与荧光定量PCR快速检测系统GeneXpert 2种方法检测碳青霉烯酶，用K-B法检测CAZ/AVI的药物敏感性。结果:179株CRE中，mCIM阳性174株（97.2%），eCIM阳性147株（84.5%）；产丝氨酸酶27株（15.5%），金属β-内酰胺酶147株（84.5%）。GeneXpert检测结果与mCIM、eCIM表型检测结果一致。174株mCIM阳性菌株对CAZ/AVI的敏感率为33.3%（58/174），其中27株产丝氨酸酶菌株的敏感率为96.3%（26/27），147株产金属β-内酰胺酶菌株的敏感率为100%。结论:临沂地区CRE的碳青霉烯酶型以金属β-内酰胺酶为主。产丝氨酸酶CRE对CAZ/AVI有较高敏感性。

目的:分析碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因分布特征及其机制。方法:收集青岛大学附属威海市中心医院2021年1-12月临床标本分离得到的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌58株，通过改良Hodge试验和改良碳青霉烯灭活试验确认表型，聚合酶链式反应（PCR）扩增后纯化测序，脉冲场凝胶电泳法（PFGE）聚类分析和多位点序列分型（MLST）分析其分子流行病学特征。结果:碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）对阿米卡星敏感率为51.7%，对环丙沙星、左旋氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑、哌拉西林/他唑巴坦等抗生素均具有较高耐药率（> 60%），对头孢唑林、头孢他啶、头孢替坦及头孢吡肟耐药率为100.0%。58株菌株中46株（79.3%）改良Hodge试验阳性，31株（53.5%）改良碳青霉烯灭活试验阳性。PCR扩增及基因测序显示，42株（72.4%）菌株主要携带KPC-2基因，12株（20.7%）菌株携带IMP-4基因，4株（6.9%）菌株携带NDM-1基因。且携带IMP-4基因的12株菌株均携带KPC-2基因，表现为改良Hodge试验和改良碳青霉烯灭活试验双阳性。PFGE聚类分析和MLST分析显示，产KPC-2型菌株主要为ST11-B型和ST395-A型，产KPC-2型和IMP-4型菌株主要为ST345-M型和ST11-B型，产NDM-1型菌株为ST263-F型和ST15-C型。结论:CRKP耐药现象严重，菌株中存在多种碳青霉烯酶，多携带KPC-2及IMP-4基因。

目的 通过研究山西白求恩医院2015年1月—2022年1月血流感染患者血培养分离耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,总结其流行病学和分子生物学特点.方法 收集山西白求恩医院2015年1月—2022年1月血流感染患者血培养分离肺炎克雷伯菌为研究对象,进行细菌鉴定,药敏试验、改良碳青霉烯灭活试验筛选耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌.对所有菌株进行二代测序并分析,其中2株拉丝实验阳性耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌进行全基因组测序.结果 山西白求恩医院2015年1月—2022年1月血流感染患者血培养分离肺炎克雷伯菌共431株,耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌共33株,其中耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌11株,其中拉丝实验阳性2株.所有菌株对厄他培南、亚胺培南均耐药,仅1株对美罗培南中介.33株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中26株产KPC-2、4株产NDM-1;有3株双酶型耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌(KPC-2/NDM-9、KPC-2/OXA-1、NDM-1/OXA-1);4株未检测到碳青霉烯耐药基因.二代测序后进化分析结果显示33株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌主要序列类型(sequence types,ST)型别为ST11、ST147、ST412,主要血清型为KL64、KL47、KL25.质粒接合转移实验有18株转移成功.2株拉丝实验阳性菌株经全基因组测序发现携带毒力质粒和耐药质粒.结论 本院血流感染患者检出耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌从2015年逐年增加,2021年出现暴发流行.携带的碳青霉烯酶基因以KPC-2为主,ST11/KL64型菌株占多数.进一步加强临床耐药菌株筛检及控制对临床抗感染治疗作用关键.

目的 对某三甲医院分离的耐碳青霉烯肠杆菌目细菌(CRE)的耐药表型和耐药基因进行检测,并对其进行同源性分析,探讨产生耐药性的原因,为控制院内传播感染提供理论依据.方法 收集2019年1月-2021年9月淄博市第一医院临床标本分离的鉴定为CRE的菌株,通过改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)和EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)对CRE菌株进行耐碳青霉烯表型筛选,采用聚合酶链反应(PCR)法对菌株进行耐碳青霉烯相关耐药基因的检测并通过接合实验研究耐药基因的传播能力,多位点序列分型(MLST)分析菌株的同源性关系.结果 CRE菌株中,大肠埃希菌54株,肺炎克雷伯菌15株;耐碳青霉烯大肠埃希菌blaNDM-1阳性38株、blaOXA-23阳性9株、blaOXA-48 阳性7株,耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌blaKPC-gp 阳性3株、blaKPC-qc 阳性 3 株、blaOXA-48阳性9株;接合实验结果证实blaNDM-1和blaKPC-gp可以通过接合实验进行传播;大肠埃希菌的ST类型为ST10、ST23、ST131、ST117型,聚类分析发现其分属于不同的克隆群;肺炎克雷伯菌的ST类型为ST11、ST23和ST342型,聚类分析发现其分属于不同的克隆群.结论 本地区CRE菌株中,bla NDM-1是导致大肠埃希菌耐药的主要基因,blaOXA-48是导致肺炎克雷伯菌耐药主要基因;MLST分型聚类分析发现碳青霉烯类抗菌药物耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌存在多个克隆复合群的克隆性传播,医院应加强院感防控和监测.

目的 探讨儿童感染ST2735型产NDM-5碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)流行病学特征及耐药机制.方法 收集徐州医科大学附属医院2018年3月-2022年3月临床首次分离的儿童感染的亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌24株,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)和乙二胺四乙酸碳青霉烯灭活试验(eCIM)检测碳青霉烯酶,聚合酶链式反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因,多位点序列分型(MLST)技术和脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法检测其同源性.结果 2018年3月-2022年3月分离出24株亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌,其中发现NDM-5型CRKP 15株,检出率62.50％,这15株CRKP感染患儿均有基础疾病和抗菌药物使用史;15株NDM-5型CRKP菌株对头孢菌素类、碳青霉烯类和头孢他啶/阿维巴坦均耐药.MLST分型以ST2735型(25.00％)为主,PFGE分析显示6株ST2735型CRKP具有高度同源性,且均来自于新生儿重症监护室(NICU).结论 医院NICU存在ST2735型产NDM-5 CRKP的克隆流行,应当加强院感监测及预防,防止其产生新的流行危害.