目的:探讨改良碳青霉烯灭活试验（modified carbapenem inactivation method， mCIM）联合EDTA改良碳青霉烯灭活试验（EDTA-modified carbapenem inactivation method， eCIM）检测感染患者分离的耐碳青霉烯肠杆菌科细菌 （Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae， CRE）碳青霉烯酶的方法对诊控CRE感染的应用价值。 方法:回顾性分析2017年1至12月天津医科大学总医院临床感染患者分离的78株非重复对碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆菌科细菌的耐药情况，应用Vitek2 Compact全自动细菌鉴定仪鉴定至种并检测其对厄他培南和亚胺培南的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration， MIC），用分子生物学PCR试验检测其碳青霉烯酶基因 blaKPC、 blaNDM、 blaIMP和 blaVIM，基因测序确定基因型作为金标准，同时采用mCIM联合eCIM试验对所收集的细菌进行碳青霉烯酶检测。以PCR结果为标准，计算mCIM和eCIM的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及Kappa值，进行mCIM和eCIM联合检测结果与PCR结果的一致性检验。 结果:78株碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌应用PCR法检测出碳青霉烯酶基因阳性74株，阴性4株，其中 blaKPC-2阳性60株， blaNDM-1阳性2株， blaNDM-5阳性7株， blaNDM-9阳性3株， blaIMP-4阳性1株， blaKPC-2和 blaNDM-1同时阳性1株。mCIM检测碳青霉烯酶的敏感度为100%，特异度为100%， Kappa值为1.000；mCIM和eCIM联合检测丝氨酸碳青霉烯酶敏感度为100%，特异度为100%，Kappa值为1.000；联合检测金属碳青霉烯酶敏感度为92.9%，特异度为100%， Kappa值为0.955。 结论:采用mCIM、eCIM联合试验对CRE中的碳青霉烯酶进行检测，实用性强，结果易于判读，依据CRE细菌中基因型的不同，将为临床CRE诊断与抗菌药物精准治疗和感染控制提供重要诊断依据。

目的:评估mCIM联合eCIM试验、Carba-5和Carba-R三种方法检测碳青霉烯类耐药细菌(carbapenem-resistant organisms，CRO)中常见碳青霉烯酶型的性能。方法:随机挑选2019年1月至2020年12月浙江大学医学院附属邵逸夫医院临床分离的122株非重复CRO菌株，应用生物梅里埃MALDI-TOF MS全自动快速质谱仪对菌株进行菌种鉴定，分别采用改良碳青霉烯类抗生素灭活试验(mCIM联合eCIM试验)、Carba-5检测条和Carba-R试剂盒对所有菌株进行碳青霉烯酶型检测；以PCR法检测结果为金标准，评价上述3种检测方法的性能。结果:122株CRO菌株属于12个不同菌种，PCR法碳青霉烯酶型检测结果：共112株检测结果阳性，KPC-2型阳性70株，占57%(70/122)，其中肺炎克雷伯菌46株，铜绿假单胞菌12株，其他菌株12株；OXA-232型阳性19株占15%(19/122)，均为肺炎克雷伯菌；NDM型阳性20株占16%(20/122)，其中NDM-1型阳性7株和NDM-5型阳性13株，以大肠埃希菌为主(12/20)；IMP-4型阳性2株，分别为肺炎克雷伯菌和阿氏肠杆菌；检测出1株同时产KPC-2和IMP-4的肺炎克雷伯菌；未检测到VIM型碳青霉烯酶；有10株未检出以上5种基因型。与金标准PCR方法相比mCIM联合eCIM试验灵敏度为95.65%(22/23)，特异度为100.00%(90/90)，阳性预测值(PPV)为100.00%(22/22)，阴性预测值(NPV)为98.90%(90/91)，诊断准确度为99.11%(112/113)；Carba-5和Carba-R试验的灵敏度、特异性、PPV、NPV和诊断准确度均为100%。结论:碳青霉烯耐药肠杆菌目细菌和铜绿假单胞菌临床微生物实验室可以使用Carba-5试验快速、准确地检测常见碳青霉烯酶型，有条件的实验室还可以选择Carba-R试验，并监测患者是否存在碳青霉烯耐药菌的定植；而Carba-5和Carba-R检测结果阴性时，建议结合药敏结果进行mCIM联合eCIM试验检测。

目的:研究广泛耐药肺炎克雷伯菌（XDRKP）耐药表型特点及相关耐药机制。方法:收集山西白求恩医院2018年1月至2020年12月内分离的3 201株肺炎克雷伯菌并根据已有药敏结果筛选116株广泛耐药肺炎克雷伯菌纳入研究。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）及梅里埃VITEK-compact 2进行菌株鉴定及药敏试验，药敏结果K-B法或微量肉汤稀释法复核。改良碳青霉烯酶灭活试验（mCIM）联合乙二胺四乙酸协同碳青霉烯酶灭活试验（eCIM）检测XDRKP碳青霉烯酶表型，并与碳青霉烯酶基因扩增结果比对。聚合酶链反应（PCR）扩增耐药基因：碳青霉烯酶基因（blaKPC、blaNDM、blaVIM、blaIMP、blaOXA）；氨基糖苷耐药基因：16S rRNA甲基化酶基因（rmtA、rmtC、rmtD、rmtG、rmtH、armA、npmA、rmtB、rmtE、rmtF），氨基聚糖苷修饰酶基因变体［aac（6′）-Ib-cr］；喹诺酮耐药基因：DNA解旋酶保护蛋白qnr家族基因（qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS），外排泵蛋白基因（oqxAB、qepA），氨基聚糖苷修饰酶基因变体［aac（6′）-Ib-cr］；替加环素耐药Tet蛋白基因［外排泵蛋白基因：tet（A）和tet（L）］，核糖体保护蛋白基因［tet（M）］，替加环素修饰酶基因［tet（X）］。对照分析各XDRKP耐药表型与相应耐药基因携带情况间的关系。结果:共收集到XDRKP 116株。头孢菌素类及喹诺酮类抗菌药物耐药率100%（116/116），碳青霉烯类抗菌药物耐药率99.14%（115/116），氨基糖苷类抗菌药物庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星耐药率分别为95.69%（111/116）、94.83%（110/116）、88.79%（103/116），磺胺类抗菌药物耐药（44/116）与替加环素耐药（3/116）检出率较低。mCIM联合eCIM试验结果与碳青霉烯酶基因扩增结果一致率95.65%（110/115）。各耐药基因阳性率：blaKPC 90.52%（105/116），blaNDM 10.34%（12/116），rmtB 81.90%（95/116），armA 2.59%（3/116），oxqAB 65.52%（76/116），qnrB 6.03%（7/116）、qnrS 12.93%（15/116）、aac（6′）-Ib-cr 7.76%（9/116），tet（A）21.55%（25/116）。其余各耐药基因未检出。匹配分析发现，共有65株XDRKP耐药表型与耐药基因型不匹配，即抗菌药物耐药表型不能用携带相应耐药基因来解释。结论:XDRKP中各类耐药基因的广泛分布和某些基因［如aac（6′）-Ib-cr、oqxAB］的多重耐药作用是广泛耐药产生的潜在原因。不同菌株针对同一类抗菌药物可能携带一种或多种耐药基因。此外，部分菌株耐药表型与耐药基因不匹配，提示耐药基因的表达调控及存在其他耐药机制也与XDR的产生有关。

目的 分析外科ICU和内科ICU碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性、常见的碳青霉烯酶基因及菌株之间的亲缘性关系.方法 收集2019年1月至2020年12月从某三甲医院外科ICU和内科ICU分离鉴定的CRKP非重复菌株,采用自动仪器法对菌株进行药物敏感性试验;采用mCIM联合eCIM试验进行碳青霉烯酶表型检测,并通过PCR技术联合DNA测序检测碳青霉烯酶基因;利用多位点序列分型(MLST)方法对碳青霉烯酶阳性菌株进行同源性分析.结果 共收集15株CRKP菌株,其中外科ICU 8株,内科ICU 7株.CRKP菌株对临床多数抗菌药物表现高耐药性,仅对替加环素表现较高敏感性.mCIM联合eCIM试验并经PCR验证,共有14株CRKP携带碳青霉烯酶基因,其中7株单纯携带KPC-2基因,主要来源于内科ICU;5株单纯携带NDM-5基因,来源于外科ICU;1株携带KPC-2基因合并少见金属酶基因来源于内科ICU;1株携带NDM-1基因合并OXA-181基因来源于外科ICU.MLST结果显示,医院ICU分离的CRKP菌株为ST11、ST15、ST16 3个序列型别.内科ICU优势序列为ST11(6/6),全部携带KPC-2基因;外科ICU优势序列为ST15(5/8),主要携带NDM-5基因.结论 医院外科ICU和内科ICU分离的CRKP菌株耐药性高,其携带的耐药基因和优势流行菌株存在差异.应加强多重耐药菌的监测及流行病学研究,及时采取有效治疗方案和防控策略,防止耐药菌株产生和流行播散.

目的 评估迪尔碳青霉烯酶抑制剂检测碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)产不同基因型碳青霉烯酶的效能.方法 收集 2018-2020 年广东省中医院临床分离的 73 株非重复 CRE.采用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合乙二胺四乙酸(EDTA)碳青霉烯灭活试验(eCIM)以及碳青霉烯酶抑制剂检测碳青霉烯酶,采用聚合酶链式反应(PCR)检测 10 种常见β-内酰胺酶基因.以PCR为金标法,评估两种表型试验的临床效能.结果 mCIM试验阳性 54 株,产丝氨酸碳青霉烯酶 20 株,产金属β-内酰胺酶 34 株,符合率为 98.63%(72/73).碳青霉烯酶抑制剂检出 56 株产碳青霉烯酶,产A类酶 22 株,产B类酶 34 株.1 株产OXA-181 的摩根摩根菌为假阴性,2 株不产碳青霉烯酶、高产头孢菌素酶 DHA 的 CRE 为假阳性.碳青霉烯酶抑制剂灵敏度和特异度分别为 98.18%(54/55)和 88.89%(16/18),符合率为 95.89%(70/73).结论 mCIM联合eCIM无法区分A类和D类丝氨酸碳青霉烯酶.碳青霉烯酶抑制剂符合率较 mCIM联合 eCIM试验稍低,能有效鉴别 A类和 B类酶,但在 D类酶和高产 AmpC酶的CRE检测上仍存在不足.碳青霉烯酶抑制剂与 mCIM/eCIM联合能更全面地实现碳青霉烯酶分型,精准指导临床合理用药.

目的 评价改良碳青霉烯类失活法(modified carbapenem inactivation method,mCIM)和EDTA碳青霉烯类失活法(EDTA-carbapenem inactivation method,eCIM)对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型的筛选能力.方法 分别收集碳青霉烯类耐药和敏感肠杆菌科细菌102株和53株,采用mCIM和eCIM进行碳青霉烯酶表型筛选试验,PCR法检测blaKPC-2、blaNDM-1、blaIMP-4、blaVIM-1和blaOXA-48耐药基因,并对表型筛选试验结果与基因检测结果的一致性进行统计分析.结果 102株碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌中97株检出耐药基因,包括51株blaKPC-2基因、38株blaNDM-1基因、5株blaIMP-4基因以及3株同时携带blaKPC-2和blaNDM-1基因;mCIM检出阳性98株,阴性4株.98株mCIM阳性菌中,eCIM阳性46株,阴性52株.53株碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌耐药基因检测及mCIM试验均为阴性.mCIM试验筛选碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌碳青霉烯酶产生的敏感性为99.0％,特异性为96.6％,与PCR结果一致性Kappa值为0.959;eCIM筛选金属酶敏感性为93.5％,特异性为94.6％,Kappa值为0.881;eCIM筛选丝氨酸碳青霉烯酶敏感性为92.6％,特异性为95.8％,Kappa值为0.882.结论 mCIM试验与eCIM试验联合检测,不仅可以有效筛选碳青霉烯酶产酶株,而且可同时区分碳青霉烯酶类型,对流行病学调查研究及疾病治疗有重要意义.

目的 分析改良碳青霉烯类失活法(mCIM)试验与EDTA-碳青霉烯类失活法(eCIM)试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能.方法 80株对碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科菌株,采用PCR法检测碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM),采用mCIM试验与eCIM试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型.以碳青霉烯酶基因检测结果为金标准,计算mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的敏感性和特异性,计算eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶、丝氨酸碳青霉烯酶菌株的敏感性和特异性,分析mCIM试验与eCIM试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能.结果 80株菌株中,59株碳青霉烯酶基因阳性菌株,其中57株试验菌株mCIM试验结果阳性,即mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的敏感性为96.6％ (57/59).21株碳青霉烯酶基因阴性菌株,mCIM试验结果均阴性,即mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的特异性为100.0％(21/21).33株金属-β-内酰胺酶基因(blaNDM、blaVIM、blaIMP基因)阳性,其中28株试验菌株eCIM试验结果阳性,即eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶菌株的敏感性为84.8％ (28/33).47株金属-β-内酰胺酶基因阴性,eCIM试验结果均阴性,即eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶菌株的特异性为100.0％ (47/47).27株丝氨酸碳青霉烯酶基因(blaKPC基因)阳性,eCIM试验结果均阴性,即eCIM试验检测产丝氨酸碳青霉烯酶菌株的敏感性为100.0％ (27/27).53株丝氨酸碳青霉烯酶基因阴性,其中51株试验菌株eCIM试验结果均阳性,即eCIM试验检测产丝氨酸碳青霉烯酶菌株的特异性为96.2％(51/53).结论 mCIM与eCIM联合实验检测产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型的敏感性和特异性较高.

目的 了解武汉大学人民医院碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)的临床感染特点和耐药性,探讨乙二胺四乙酸-碳青霉烯类失活法(eCIM)联合改良碳青霉烯类失活法(mCIM)的临床应用,为有效防控院内感染和合理使用抗菌药物提供依据.方法 分析分离自不同类型临床样本的非重复CRE的药物敏感性试验数据.另随机选取80株亚胺培南和/或美罗培南敏感性降低[最小抑菌浓度(MIC)≥2μg/mL]的CRE,联合mCIM和eCIM判断其产金属β-内酰胺酶和丝氨酸碳青霉烯酶的情况.结果 共检出329株CRE,以肺炎克雷伯菌为主(59.0％),分布科室广泛,其中重症医学科和神经外科分别占16.4％和16.1％,感染部位多见于呼吸道(39.2％).CRE总体对米诺环素和替加环素耐药率较低,分别为25.1％和2.9％,对其他常用抗菌药物的耐药率均高于50.0％.随机选取的80株CRE中有57株产碳青霉烯酶,其中产金属β-内酰胺酶的CRE 28株.结论 武汉大学人民医院CRE耐药形势严峻,应随时监测,并根据药物敏感性试验结果合理用药.eCIM联合mCIM检测成本低、操作简单,是一种经济、高效的表型筛选方法.

目的 应用乙二胺四乙酸改良碳青霉烯灭活法(eCIM)联合改良碳青霉烯灭活法(mCIM)检测肺炎克雷伯菌(KPN)中碳青霉烯酶的分型,并初步评估其用于分型的效能.方法 以KPN为研究对象,eCIM联合mCIM试验分析产金属酶和丝氨酸酶碳青霉烯酶的表型,以PCR为金标准,评估eCIM联合mCIM试验检测碳青霉烯酶分型的准确率.结果 检测94株耐碳青霉烯类KPN,其中87株mCIM试验阳性,为产碳青霉烯酶株;7株mCIM阴性,为非产碳青霉烯酶株.产碳青霉烯酶菌株中75株eCIM阴性,为丝氨酸酶表型;12株eCIM阳性,为金属酶表型.PCR检测碳青霉烯酶编码基因阳性株87株,其中丝氨酸酶KPC-2基因阳性76株,金属酶IMP基因阳性12株,1株同时携带KPC-2和IMP基因.x2分析两种方法检测结果的一致性,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 eCIM联合mCIM试验检测KPN中碳青霉烯酶分型,与PCR结果一致,不需购买特殊试剂,操作简便,易于推广,可为临床抗感染用药及医院感染控制提供重要参考.

目的 评价改良碳青霉烯灭活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)和EDTA碳青霉烯灭活试验(EDTA-carbapenem inactivation method,eCIM)对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的检测性能.方法 收集2017年1月至2018年9月重庆市16家区县医院临床分离的136株碳青霉烯耐药或敏感的肠杆菌科细菌,采用PCR方法检测碳青霉烯酶基因,mCIM和eCIM筛选碳青霉烯酶表型,并对基因检测结果与表型筛选试验结果进行分析和评价.结果 85株碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌中79株检出碳青霉烯酶基因,共表达A类和B类碳青霉烯酶基因8株,占比10.13％(8/79),碳青霉烯酶表型筛选试验mCIM阳性78株,eCIM阳性44株.51株碳青霉烯敏感菌株未检测到碳青霉烯耐药基因且mCIM均为阴性.mCIM筛选肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的灵敏度为98.7％ (95％CI:92.2～99.9),特异性为100.0％(95％CI:92.1～ 100.0),Kappa值为0.985;eCIM筛选金属酶灵敏度为85.7％ (95％CI:72.1～93.6),特异性为94.4％(95％CI:80.0～99.0),Kappa值为0.787;eCIM筛选丝氨酸酶灵敏度为89.5％(95％ CI:74.3～ 96.6),特异性为100.0％(95％ CI:90.6～ 100.0),Kappa值为0.904.结论 mCIM联合eCIM检测可有效筛选产碳青霉烯酶菌株,但随着共表达A类和B类碳青霉烯酶菌株的分离率增加会降低对金属酶筛选的灵敏度.