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粟酒裂殖酵母中Atp11在线粒体中功能的研究
编辑人员丨2023/8/6
ATP是由ATP合酶复合体催化合成的,在线粒体呼吸过程中起着重要作用.旨在研究粟酒裂殖酵母中Atp11 (SPAC3A12.12)在线粒体中的功能.利用同源重组的方法构建Δatp11突变体,观察Δatp11缺失菌在以甘油为唯一碳源的非发酵培养基上的表型;通过生物信息学分析发现Atp11的N端含有一段由24个氨基酸残基组成的线粒体定位序列(MTS),为确定Atp11在细胞内的定位,在Atp11的C端添加一个GFP标签,观察绿色荧光在细胞内的位置;运用Western blotting检测atp11的缺失对线粒体基因组编码蛋白稳态性的影响.研究结果表明,Δatp11突变体在非发酵培养基上表现出生长缺陷,是线粒体呼吸缺陷菌;GFP绿色荧光定位实验结果证实了Atp11定位于线粒体中;Western blotting 检测结果显示atp11的缺失导致Cob1、Cox1、Cox2、Cox3和Atp6蛋白的表达量显著降低.综上所述,粟酒裂殖酵母Atp11定位于线粒体且是线粒体呼吸链正常发挥功能所必须的.
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编辑人员丨2023/8/6
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SIRT6在呼吸系统疾病中的作用研究进展
编辑人员丨2023/8/6
Sirtuins是一类具有单ADP-核糖基转移酶或脱酰酶活性的蛋白质,涉及影响广泛的细胞过程,如衰老、转录、细胞凋亡、炎症和抗压力,以及低热量情况下的能量效率和警觉性.Sirtuins还可以控制生物钟和线粒体生物发生.哺乳动物有7个Sirtuins.SIRT6属于Sir2蛋白家族中的一员,目前已知其拥有NAD+依赖的组蛋白去乙酰化酶、单ADP核糖基转移酶及去脂肪酰化酶等多种催化功能.SIRT6通过这数种催化功能参与机体多种生命过程,在调控DNA修复、端粒维护、炎症反应、能量代谢以及癌症的发生与发展等方面发挥重要作用.本文对SIRT6在慢性阻塞性肺疾病、特发性肺纤维化、哮喘、非小细胞肺癌等呼吸系统疾病中的作用进行综述.在慢阻肺的发病机制上,SIRT6起肺衰老的作用,表现在DNA损伤、端粒缩短、细胞自噬等相似之处.SIRT6在特发性肺纤维化中参与了肺上皮间质转化,抵抗博莱霉素诱导的肺内EMT,表现出抵抗纤维化的作用.SIRT6的去乙酰化作用可以介导支气管哮喘的气道炎症减轻,也参与自身免疫性炎症的过程.SIRT6在非小细胞肺癌的形成及生长维持中起关键作用.了解SIRT6在呼吸系统里的作用有利于揭示疾病机制及开拓全新的治疗靶位或研制新药物.
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编辑人员丨2023/8/6
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生长抑素和耐热木聚糖酶的融合表达及性质研究
编辑人员丨2023/8/5
旨在获得具有抗原性和免疫原性的融合蛋白CbXyn10C-SS,并对其进行高效表达和酶学性质分析.生长抑素(Somatostatin,SS)从多途径阻碍饲料转化效率和动物生长,使用SS免疫动物可避免其抑制作用.然而SS免疫的研究多以DNA疫苗为载体,少见重组功能性SS蛋白的高效制备方法.木聚糖酶提高饲料转化率并在饲料中广泛应用,且微生物法发酵制备重组木聚糖酶技术已经非常成熟.将SS基因连接在细菌Caldicellulosiruptor bescii来源的耐热木聚糖酶基因CbXyn10C的3'端进行融合表达.融合蛋白CbXyn10C-SS具有抗原性和免疫原性,且该蛋白的理化性质和催化常数与CbXyn10C非常相似,具高度的热稳定性和较强的催化性能,适合饲料制粒.成功高效表达了能同时作为饲用木聚糖酶和生长抑素抗原的融合蛋白CbXyn10C-SS.
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编辑人员丨2023/8/5
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端粒的替代性延长(ALT)和端粒酶非催化功能在肿瘤中的研究进展
编辑人员丨2023/8/5
端粒酶是一种具有逆转录活性的核糖核蛋白,由非编码RNA模板(端粒酶RNA成分,telomerase RNA template component,TERC)和蛋白成分共同构成,能在酶亚基(端粒酶逆转录酶,telomerase reverse transcriptase,TERT)作用下,从头合成端粒DNA序列[1].人类胚胎发育早期,很多组织可检测到端粒酶活性,但妊娠12~18周时发生了转录沉默,随着人类组织和细胞分化,端粒酶活性迅速降低.从机制上讲,除少部分通过端粒的替代性延长(altemative lengthening of telomeres,ALT)机制[2],缺乏TERT/端粒酶活性无法维持细胞持续增殖所需的端粒长度,严重缩短的端粒会触发端粒功能障碍并激活DNA损伤反应途径,从而导致细胞生长停滞.
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编辑人员丨2023/8/5
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N-乙酰基转移酶10的研究进展
编辑人员丨2023/8/5
N-乙酰基转移酶10(N-acetyltransferase 10,NAT10)是一种具有乙酰基转移酶作用的核蛋白,可催化组蛋白、非组蛋白发生乙酰化修饰.NAT10催化的非组蛋白乙酰化修饰在端粒酶活性调节、核糖体RNA的合成、DNA损伤修复、mRNA稳定性的维持等多种生命活动中扮演了重要角色,与癌症、Hutchinson-Gilford早衰综合征的发生、发展和预后密切相关.本文将从NAT10的结构与定位、生物学功能及其在疾病中的作用进行综述,以期为NAT 10的相关研究提供参考.
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编辑人员丨2023/8/5
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鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteC的原核表达、纯化与晶体培养
编辑人员丨2023/8/5
目的 鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteC是沙门菌Ⅲ型分泌系统中唯一的一种激酶,然而其与以往发现的激酶同源性均较低,其发挥激酶功能的机制尚不清楚.本研究通过基因克隆、原核表达截短鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteC-C端催化结构域,获得纯化蛋白并进行晶体培养,为揭示SteC作为激酶催化磷酸化的机制奠定基础.方法 以鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteC生物信息学分析为基础,在SteC-C端催化结构域进行片段截取,并将此结构域中仅有的第276位半胱氨酸突变为丝氨酸,利用基因克隆技术分别构建SteC C1-pGl01和SteC C1C276S-pGl01两种重组质粒,在大肠埃希菌原核体系中进行表达.依次使用镍离子亲和层析柱、凝胶层析柱进行蛋白纯化.使用12种晶体试剂盒筛选适合SteC活性(Holo)与非活性(Apo)状态晶体生长的条件,从而获得SteC不同类型的蛋白质晶体,并使用additive试剂盒寻找更利于蛋白晶体生长的条件,从而获得单晶性良好的晶体.结果 鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteC C1催化结构域相对分子质量大小为19.7×103,在原核表达体系中蛋白可溶性好、浓度高,但是蛋白性质不稳定存在二聚化现象,其突变体证明SteC Cys-276 是 SteC C1 导致二聚化的原因.两种蛋白均在 2.0 mol/LAmmonium sulfate,0.01 mol/L Magnesium sulfate heptahydrate,0.05 mol/LSodium cacodylate trihydrate(pH 6.5)条件结晶,且 SteCC1C276S 晶体结晶时间更快,添加0.1mol/L碘化钠试剂后更有助于蛋白晶体的生长.结论 成功构建SteC C1及SteC C1C276S原核表达系统并获得蛋白进行结晶培养.硫酸铵盐有助于SteC C1结构域及其突变体晶体的形成且突变体更容易结晶.SteC C1结构域蛋白晶体的培养为SteC蛋白质空间结构的解析及进一步揭示其催化磷酸化的分子机制奠定了基础.
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编辑人员丨2023/8/5
