目的 观测小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)诱导的胰岛素分泌细胞(IPCs)在大鼠胰腺脱细胞支架上的生长及功能发挥.方法 经脾动脉持续灌注洗脱剂制备胰腺脱细胞支架,对其进行组织染色,DNA、糖胺多糖(GAG)含量,生物相容性检测.含小鼠肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)、胰腺十二指肠同源异型盒-1(PDX-1)和神经源性分化因子-1(NeuroD1)的腺病毒联合导入mBMSCs,免疫荧光、实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测胰岛素(Insulin)表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测不同浓度葡萄糖刺激后胰岛素分泌情况.IPCs再种植于脱细胞支架内,培养后行苏木素-伊红(HE)染色、免疫荧光、FQ-PCR检测细胞生长及功能发挥.结果 经灌注后未见细胞残留,可见细胞外基质(ECM)保留,DNA定量提示细胞含量为(44.92±3.89) ng/mg(t=15.160,P=0.001),GAG含量为(30.27±2.70) ng/mg,(t=2.862,P=0.046),免疫组织化学显示胶原Ⅰ、纤连蛋白保留.三基因修饰的mBMSCs Insulin表达阳性,葡萄糖刺激试验显示其对不同浓度葡萄糖有反应.将IPCs在胰腺脱细胞支架内循环灌注培养,HE染色显示细胞在支架内生长良好,免疫荧光和FQ-PCR显示Insulin表达阳性,与二维培养比较,Insulin表达提高(t=15.030,P=0.004).结论 制备的大鼠胰腺脱细胞支架保存了基本的脉管结构及ECM,生物相容性良好.PDX-1、NeuroD1和MafA协同促进mBMSCs分化并获得Insulin合成和分泌能力.经三维循环灌注培养,IPCs能够在支架内生长及发挥功能,且细胞功能得到促进.

目的:体外评价不同浓度人重组血小板衍生生长因子BB(recombinant human platelet derived growth factor-BB,rhPDGF-BB)对糖尿病大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)迁移的影响,以及基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor 1,SDF-1)和其G蛋白偶联受体CXCR4调控作用的相关机制,为rhPDGF-BB应用于临床糖尿病患者相关骨修复再生治疗提供理论基础.方法:建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠动物模型.体外培养糖尿病大鼠BMSCs,作为对照组.采用Transwell小室趋化模型,以浓度0、10、50、100 ng/mL rhPDGF-BB作用BMSCs,检测其体外趋化作用;定时定量RCR检测BMSCs SDF-1、CXCR4mRNA的表达变化,筛选出药物最佳作用浓度:应用PI3K/Akt抑制剂,反向证实rhPDGF-BB对BMSCs的SDF-1、CXCR4表达的调节作用.采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠,1周后选取大鼠尾静脉血糖浓度高于16.7 mmol/L者为建模成功大鼠.与糖尿病大鼠的BMSCs相比,rhPDGF-BB促进糖尿病大鼠BMSCs的迁移,50 ng/mL rhPDGF-BB为促进糖尿病大鼠BMSCs迁移的最佳作用浓度,PI3K/Akt抑制剂明显抑制糖尿病大鼠BMSCs的迁移.结论:rhPDGF-BB促进糖尿病大鼠BMSCs的迁移,并通过SDF-1/CXCR4轴,调节糖尿病大鼠BMSCs的迁移.

目的 研究微弧氧化钛表面对2型糖尿病大鼠骨髓基质干细胞成骨分化与种植体骨结合的影响.方法 对TC4表面微弧氧化处理获得微纳米表面,高糖高脂饮食结合腹腔内注射链脲佐菌素溶液建立2型糖尿病大鼠模型,分离大鼠骨髓基质干细胞.接种细胞到微弧氧化钛表面,观察细胞附着形态、增殖活性、碱性磷酸酶(ALP)活性和成骨分化相关基因.植入微弧氧化种植体到2型糖尿病患者股骨内,荧光素标记新骨形成.采用激光共聚焦显微镜(EDS)观察新骨形成速度,苦味酸品红染色观察骨结合率.采用配对t检验(SPSS 2.0软件)分析实验组和对照组之间细胞增殖、成骨分化相关基因表达、碱性磷酸酶半定量活性、新骨形成量和骨结合率差异(α=0.05).结果 TC4经酸蚀处理后形成粗糙表面,经微弧氧化处理后可以观察到微纳米结构的孔隙.EDS检测到微弧氧化后的钛表面有钠、硅和磷等元素.微弧氧化钛表面的细胞伸展形态由于对照组,ALP活性增加,成骨分化基因表达上调.动物实验显示微弧氧化钛表面种植体新骨形成速度在前两个月快于对照组,骨结合率高于对照组.结论 对TC4表面微弧氧化处理后可以促进2型糖尿病大鼠骨髓基质干细胞成骨分化与种植体骨结合.

目的:研究黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,AS-Ⅳ)联合骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)诱导的糖尿病肾病(Diabetic nephrology,DN)大鼠肾脏的保护作用.方法:8周龄正常雄性SD(Sprague Dawley,SD)随机选取8只作为正常对照组,其余大鼠给予腹腔注射60 mg/kg剂量STZ建立糖尿病模型.造模成功的大鼠随机分为模型组、BMSCs组和BMSCs+ AS-Ⅳ组,每组8只.BMSCs+AS-Ⅳ组给予AS-Ⅳ口服灌胃治疗.BMSCs组与BM-SCs+AS-Ⅳ组给予尾静脉注射BMSCs,正常对照组和模型组尾静脉注射相同剂量的无血清DMEM培养基.于第10周末收集大鼠24小时尿液,并留取肾脏组织,测定24h尿白蛋白排泄,观察肾脏病理改变,并采用免疫组织化学方法检测肾组织中α-SMA、Desmin、Nephrin、NOX4的表达.结果:与模型组相比,BMSCs组与BMSCs+ AS-Ⅳ组大鼠的肾脏病理损伤明显改善,肾小球系膜细胞增生,系膜基质增多;肾组织中NOX4、Desmin和α-SMA蛋白表达降低,Nephrin蛋白表达增加,24 h尿白蛋白排泄均明显减轻,且BMSCs联合AS-Ⅳ治疗组效果更显著(P＜0.05).结论:AS-Ⅳ联合BMSCs治疗可缓解糖尿病肾病大鼠肾脏病理损伤,改善DN大鼠肾组织的氧化应激,改善肾脏足细胞转分化,从而减轻蛋白尿排泄,具有肾脏保护作用.

目的:探究2型糖尿病(T2DM)大鼠骨髓干细胞(BMSCs)和脂肪干细胞(ADSCs)生物学性能差异.方法:构建T2DM大鼠模型;培养ADSCs和BMSCs;检测细胞克隆能力及增殖活性;定向诱导检测成骨差异;qPCR检测成骨基因的表达;SEM、HE染色比较两种细胞膜片差异.结果:从T2DM大鼠可获得ADSCs和BMSCs;ADSCs有更强的克隆形成和增殖能力;BMSCs的成骨分化显著高于ADSCs,但ADSCs能形成较多的胶原纤维,COL-1的表达量显著高于BMSCs;ADSCs膜片可形成更多的细胞层及细胞外基质.结论:T2DM大鼠的ADSCs成骨低于BMSCs,但具有更好的增殖能力,能形成更多细胞外基质.