目的:探讨应用转染重组大鼠血小板衍生生长因子-BB (rrPDGF-BB)基因的大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）对于牵张成骨的治疗效果。方法:2019年10月至2020年6月,选取48只幼年SD大鼠培养出48瓶BMSCs,其中24瓶使用慢病毒转染rrPDGF-BB基因；同时随机选取雄性成年SD大鼠72只,制作大鼠右侧股骨牵张成骨模型,将大鼠平均分为3组,分别在各组牵张间隙注射PBS(空白对照组)、未干预的BMSCs（阴性对照组）和转染rrPDGF-BB基因的大鼠BMSCs（实验组）,随后用影像学和组织学染色方法等评价该实验结果。将数据进行统计学分析, P<0.05为差异有统计学意义。 结果:培养的大鼠BMSCs长势良好,第3代BMSCs低表达CD34（0.1%）和CD45（2.8%）、高表达CD29（95.1%）,和文献描述的BMSCs表型一致；转染基因后,发现绿色荧光的表达随着转染时间的延长而逐渐增强,证实转染成功；制作大鼠股骨牵张成骨模型后,经过14 d牵张,所有大鼠达到预期牵张距离；在2、4、8周不同时间点观察,股骨标本大体观察,实验组牵张间隙可见连续性骨痂,硬度、颜色接近正常骨组织,牵张间隙活动度较差,低于空白对照组；X线片提示,实验组牵张间隙新生骨痂更多,骨髓腔较对照组提前再通；Micro-CT检查提示,实验组愈合较好,离断端已连接,矢状面可见骨髓腔再通；标本Micro-CT参数表明,实验组骨小梁厚度（0.297±0.005）mm、骨小梁数量（1.663±0.032）mm、骨体积分数（59.832±2.187）%和骨密度（0.586±0.014）g/cm 3最大,实验组骨小梁分离度（0.399±0.051）mm最小,各组之间差异有统计学意义（ P<0.05）；苏木精-伊红（HE）染色和VEGF免疫组化染色证实,实验组较空白对照组更早、更多形成血管及软骨细胞。8周时实验组镜下可见新生骨痂连接成片,骨髓腔有再通趋势,腔内可见大量红细胞。 结论:研究结果表明注射rrPDGF-BB基因转染的BMSCs可能促进大鼠牵张区新骨的形成,缩短新生骨痂的矿化时间,促进牵张成骨区域新生骨的成熟。

目的 血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)是血小板衍生生长因子家族成员之一,可刺激血管平滑肌细胞增殖和迁移,在血管生成中起重要作用,但在中枢神经系统中的作用尚不清楚.本研究采用慢性社会挫败应激建立小鼠抑郁症模型,研究海马齿状回区PDGF-BB对抑郁样行为的作用及其机制.方法 采用化学遗传学结合行为学实验研究MS-DG环路对慢性社会挫败应激模型小鼠抑郁样行为的影响;应用分子生物学技术、免疫荧光成像检测MS-DG环路依赖的PDGF-BB对DG脑区神经发生的影响.结果 ①化学遗传学抑制MS-DG神经投射增加DG脑区PDGF-BB表达,并产生抗抑郁作用,而激活MS-DG神经投射产生相反的作用.② 抑制MSGABA+-DG神经投射激活海马DG区生长抑素阳性中间神经元,促进 PDGF-BB 表达.③海马DG区过表达PDGF-BB改善慢性社会挫败应激诱导的小鼠抑郁样行为,而海马DG区注射 PDGF-BB 中和抗体阻断抑制MS-DG神经投射介导的抗抑郁作用.④海马齿状回区注射PDGF-BB重组蛋白逆转慢性社会挫败应激诱导的海马神经发生损伤和新生神经元树突形态异常.⑤ 特异性沉默神经干细胞 PDGF-β受体导致海马神经发生受损,并增加小鼠对应激的易感性.结论 抑制小鼠MSGABA+-DG神经投射促进DG区生长抑素阳性中间神经元释放 PDGF-BB,通过激活神经干细胞PDGF-β受体,进而逆转慢性应激所致成年海马神经发生损伤,缓解小鼠抑郁样行为.

目的:优化人血小板衍生生长因子BB亚型(PGDF-BB)包涵体复性方法与纯化条件,获得具有较好生物活性的重组PGDF-BB蛋白.方法:对PGDF-BB包涵体以梯度尿素进行变性,选择最佳包涵体变性浓度;比较不同复性条件下的复性率,稳定PGDF-BB包涵体复性方法;参照该蛋白的理化性质,选择适合PGDF-BB重组蛋白的纯化方法.结果:原核系统内实现了PGDF-BB的高表达;通过优化包涵体复性方法,重组蛋白的包涵体复性率可达40％以上;经过多个纯化方法相结合,PGDF-BB的纯度达到95％.结论:通过实验条件的优化,提高了PGDF-BB包涵体复性率,获得高纯度、高生物活性的重组PGDF-BB蛋白.

目的 探讨肉苁蓉苯乙醇总苷(phenylethanol glyco-sides from cistanche tubuiosa,CPhGs)脂质体对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)凋亡的影响及其抗肝纤维化的相关分子机制.方法 培养HSC-T6,取生长状态良好的对数生长期细胞用于实验,采用重组大鼠血小板衍生生长因子BB(rrPDGF-BB)刺激HSC-T6,构建体外肝纤维化模型.MTT法测定CPhGs脂质体(29.45、14.72、7.36 mg·L-1)对HSC-T6增殖的影响;AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡双染试剂标记后,流式细胞仪检测CPhGs脂质体不同浓度组的细胞凋亡率;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测 α-SMA、Collagen I、CollagenⅢmRNA的表达水平;Western blot法检测CPhGs脂质体对p-JNK蛋白表达的影响.结果 不同浓度CPhGs脂质体均可抑制rrPDGF-BB诱导的HSC-T6的增殖;CPhGs脂质体(29.45、14.72 mg·L-1)组凋亡率明显升高;qRT-PCR结果显示,CPhGs脂质体不同浓度组均可下调α-SMA、Collagen I、CollagenⅢmRNA水平的表达,并能降低p-JNK蛋白的表达.结论 CPhGs脂质体能抑制大鼠HSC-T6的增殖并诱导其凋亡,其作用可能与抗肝纤维化有关.

目的:探讨毛蕊花糖苷对血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)诱导的大鼠肝星状细胞(HSC)活化、迁移、胶原沉积、纤维化作用的影响,并进一步探讨其对ERK1/2、Akt信号通路表达的影响.方法:HSC细胞分为毛蕊花糖苷(1.5、3.0、6.0 mg/L)组[重组大鼠PDGF-BB(rrPDGF-BB)预处理24h后,不同浓度的毛蕊花糖苷干预],PDGF-BB组(rrPDGF-BB预处理24h,无毛蕊花糖苷干预),对照组(无rrPDGF-BB预处理,无毛蕊花糖苷干预);分别采用划痕实验检测细胞迁移能力,ELISA法检测Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)含量,Western blot检测纤维化HSC活化标志物α-SMA蛋白、凋亡效应分子caspase-3,及ERK1/2、Akt信号通路相关蛋白的表达水平.结果:与对照组比较,PDGF-BB组能促进HSC的迁移(P＜0.01),毛蕊花糖苷(1.5、3.0、6.0 mg/L)组能明显抑制HSC的迁移(P＜0.01),且毛蕊花糖苷抑制HSC的迁移有明显的剂量依赖性(r=0.894,P=0.038);随着受试物浓度的增加,Col-Ⅰ分泌呈现降低趋势,其中毛蕊花糖苷6 mg/L组抑制胶原产生的作用效果最明显(P＜0.01);毛蕊花糖苷(1.5,3.0,6.0 mg/L)组能够抑制α-SMA蛋白的表达、激活caspase-3的活性,使ERK1/2、P-ERK1/2、Akt、P-Akt蛋白表达明显降低,且测定蛋白的表达在毛蕊花糖苷各剂量组间也呈现一定的剂量-效应关系(0.826＜r＜0.997,P＜0.01).结论:毛蕊花糖苷可抑制rrPDGF-BB诱导的HSC的活化、迁移和纤维化作用,其机制可能与毛蕊花糖苷激活caspase-3,阻断ERK1/2、Akt信号通路,抑制HSC中细胞外基质过度沉积及胶原形成有关.

目的:体外评价不同浓度人重组血小板衍生生长因子BB(recombinant human platelet derived growth factor-BB,rhPDGF-BB)对糖尿病大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)迁移的影响,以及基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor 1,SDF-1)和其G蛋白偶联受体CXCR4调控作用的相关机制,为rhPDGF-BB应用于临床糖尿病患者相关骨修复再生治疗提供理论基础.方法:建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠动物模型.体外培养糖尿病大鼠BMSCs,作为对照组.采用Transwell小室趋化模型,以浓度0、10、50、100 ng/mL rhPDGF-BB作用BMSCs,检测其体外趋化作用;定时定量RCR检测BMSCs SDF-1、CXCR4mRNA的表达变化,筛选出药物最佳作用浓度:应用PI3K/Akt抑制剂,反向证实rhPDGF-BB对BMSCs的SDF-1、CXCR4表达的调节作用.采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠,1周后选取大鼠尾静脉血糖浓度高于16.7 mmol/L者为建模成功大鼠.与糖尿病大鼠的BMSCs相比,rhPDGF-BB促进糖尿病大鼠BMSCs的迁移,50 ng/mL rhPDGF-BB为促进糖尿病大鼠BMSCs迁移的最佳作用浓度,PI3K/Akt抑制剂明显抑制糖尿病大鼠BMSCs的迁移.结论:rhPDGF-BB促进糖尿病大鼠BMSCs的迁移,并通过SDF-1/CXCR4轴,调节糖尿病大鼠BMSCs的迁移.

目的 探讨肉苁蓉苯乙醇总苷(CPhGs)脂质体对重组大鼠血小板衍生生长因子-BB(rrPDGF-BB)诱导的大鼠肝星状细胞(HSC)增殖作用的影响及其抗肝纤维化的相关分子机制.方法 取生长状态良好的对数生长期HSC用于实验,置于CPhGs脂质体浓度为117.79、58.90、29.45、14.72、7.36、3.68、1.84、0.92和0.46 mg/L的完全培养液,求出半数抑制浓度(IC50);rrPDGF-BB刺激后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定29.45、14.72、7.36 mg/LCPhGs脂质体对HSC增殖的影响;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、工型胶原、ATF-2 mRNA的表达水平;采用Western blot法检测CPhGs脂质体对p-p38蛋白表达的影响.结果 (1)对细胞增殖的影响:对不同时间点结果分析显示,与Normal组比较,细胞培养48 h时,rrPDGF-BB组HSC细胞明显增多;CPhGs脂质体各剂量组抑制rrPDGF-BB诱导的HSC增殖作用,培养48 h效率最高;对不同浓度结果分析显示,与rrPDGF-BB组比较,不同浓度CPhGs脂质体组均可抑制rrPDGF-BB诱导的HSC-T6的增殖.(2) qRT-PCR结果:CPhGs脂质体各剂量组间比较,随CPhGs脂质体药物浓度增大,α-SMA、工型胶原和ATF-2 mRNA水平显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05),其中以CPhGs脂质体29.45 mg/L组抑制效果最明显.(3) Western blot分析结果:p-p38蛋白的表达水平在CPhGs脂质体不同浓度组表达均下降,差异有统计学意义(P＜0.05);CPhGs脂质体各剂量组间比较,p-P38蛋白随CPhGs脂质体干预剂量增大,表达水平显著下降(P＜0.05).结论 CPhGs脂质体能抑制rrP-DGF-BB诱导的大鼠HSC增殖,从而起到抗肝纤维化的作用.

目的 研究芦荟多糖对糖尿病足溃疡大鼠创面愈合的影响及相关机制.方法 采用腹腔注射1％链脲佐菌素(STZ)60 mg·kg-1的方法构建糖尿病大鼠模型,另选取15只大鼠为空白组,腹腔注射等量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液;糖尿病大鼠模型构建成功后制备糖尿病足溃疡创面模型.将糖尿病足溃疡大鼠随机分为模型组、实验组和对照组,各15只.实验组于创面外敷浸湿10％芦荟多糖溶液的纺纱,对照组外涂重组牛碱性成纤维细胞生长因子,空白组和模型组外敷浸湿生理盐水的纺纱,每日换药2次,直至创面完全愈合.观察各组糖尿病大鼠创面愈合情况,用酶联免疫吸附法测定糖尿病足溃疡大鼠血清碱性成纤维因子(bFGF)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)及白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;用蛋白质印迹(WB)法检测创面组织Wnt/β-catenin蛋白表达.结果 治疗后14 d,空白组、模型组、实验组和对照组糖尿病足溃疡大鼠的创面愈合率分别为(95.46±2.14)％,(65.15±2.48)％,(89.45±3.15)％,(85.46±2.75)％,与模型组比较,其他各组差异均有统计学意义(P<0.05).与空白组相比,模型组大鼠血清bFGF、PDGF-BB水平降低,而血清IL-1、TNF-α水平升高(均P<0.05);与模型组比较,实验组和对照组血清bFGF、PDGF-BB水平升高,而血清IL-1、TNF-α水平降低(均P<0.05).治疗后14 d,空白组、模型组、实验组和对照组大鼠创面组织R-脊椎蛋白3(Rspo3)蛋白表达量分别为1.15±0.21,0.45±0.14,0.89±0.12,0.96±0.10;糖原合成激酶-3β(GSK-3β)蛋白表达量分别为0.24±0.03,1.16±0.34,0.49±0.05,0.52±0.12;β-连环素(β-catenin)蛋白表达量分别为0.99±0.10,0.36±0.05,0.67±0.04,0.82±0.06,与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 芦荟多糖可降低糖尿病足溃疡大鼠血清炎性因子水平,升高生长因子水平,同时可调控Wnt/β-catenin通路蛋白表达进而促进大鼠创面愈合.

目的:基于网络药理学方法分析黄芪治疗免疫球蛋白A肾病(IgAN)的多成分、多靶点、多通路作用机制,为该药材的基础研究和临床应用提供依据.方法:通过GeneCards,TCMID及中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)等数据库检索和文献挖掘筛选黄芪活性成分、作用靶点及与IgAN相关的疾病靶点,运用Cytoscape 3.7.1软件绘制网络图,利用网络拓扑分析黄芪治疗IgAN的关键靶点,采用R语言中的不同软件包分别进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.在此基础上,通过体外细胞实验验证黄芪中活性成分黄芪甲苷对人肾小球系膜细胞磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/肿瘤抑制基因p53(PI3 K/Akt/p53)信号通路的激活作用.结果:筛选得到黄芪25个活性成分,49个药物-疾病共同作用靶点.GO功能富集分析包含条目84个,主要涉及细胞核激素受体结合、细胞核受体活性、脱氧核糖核酸结合转录激活因子活性等.KEGG通路富集分析包含通路88条,主要与PI3K/Akt信号通路、低氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、晚期糖基化终末产物/晚期糖基化终末产物受体(AGE/RAGE)信号通路等密切相关.体外细胞实验证实,黄芪甲苷可通过调控PI3K/Akt/p53信号通路抑制重组人血小板衍生生长因子BB诱导的人肾小球系膜细胞增生.结论:黄芪多种活性成分可能通过作用于细胞凋亡、氧化应激和炎症反应等相关的靶点及通路,起到治疗IgAN的作用,为IgAN的新药开发及机制研究提供了思路.

该研究探讨了成纤维细胞生长因子9(fibroblast growth factor 9,FGF9)在肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)及肺血管平滑肌细胞表型转化中的作用.建立野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导的大鼠肺动脉高压模型,Western blot检测大鼠肺组织中FGF9的表达情况.血小板衍生生长因子-BB(platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)诱导肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)表型转化,Western blot检测PASMCs中FGF9的表达情况.重组人成纤维细胞生长因子9(recombinant human fibroblast growth factor 9,rhFGF9)干预PASMCs,通过划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测细胞表型相关蛋白[α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)]、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及血小板衍生生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptor β,PDGFR-β)的表达水平.siRNA抑制FGF9后,Western blot检测PASMCs表型与PCNA蛋白水平.结果显示,大鼠肺组织及PASMCs中FGF9的表达显著降低(P＜0.05);PDGF-BB下调PDGFR-β与收缩表型标志物α-SMA的表达(P＜0.05),同时上调PCNA与合成表型标志物OPN的表达(P＜0.05),且细胞的迁移能力增加;rhFGF9抑制PDGF-BB诱导的细胞表型转化和细胞迁移,而不影响PCNA与PDGFR-β的表达;下调FGF9可降低α-SMA(P＜0.05)的表达,而PCNA与OPN的表达无显著改变,即下调FGF9后,平滑肌细胞的收缩表型发生改变.总之,rhFGF9抑制PDGF-BB诱导的平滑肌细胞表型转化和迁移,下调FGF9能改变平滑肌细胞的收缩表型,提示FGF9可能参与肺动脉高压的病理过程.