2019年国际糖尿病足工作组对糖尿病足防治指南进行了更新。有关使用干预措施促进糖尿病足愈合的部分提出13项推荐。3项新增加的推荐：对于难愈合的神经-缺血性溃疡在最佳标准的治疗之外考虑使用寡糖敷料；对难以愈合的溃疡在最佳标准的治疗之外考虑使用自体白细胞、血小板和纤维蛋白补片；在最佳的标准治疗之外考虑局部使用胎盘衍生产品。与2015版指南一致的推荐有10项，包括强烈推荐5项和弱推荐5项。了解指南的更新对糖尿病足的临床和科研工作大有裨益。

目的:观察核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体激活对胰腺星状细胞(PSCs)增殖、迁移及细胞外基质沉积的影响。方法:对大鼠PSCs进行分离培养与鉴定，根据是否给予细菌脂多糖(LPS)10 μg/ml预处理24 h分为对照组和LPS组，ELISA法检测PSCs培养液中NLRP3炎症小体相关分子的表达；通过携带靶向NLRP3基因的shRNA慢病毒载体感染PSCs的方法构建NLRP3基因表达抑制的PSCs细胞株，根据有无LPS预处理和是否慢病毒干扰NLRP3表达，将PSCs分为LPS+阴性对照组和LPS+慢病毒组，采用CCK-8法和Transwell小室实验分别检测细胞增殖及迁移能力变化；采用免疫荧光染色检测PSCs细胞外基质α-SMA和collagen沉积；采用RT-qPCR检测PSCs促纤维化因子TGF-β的变化。结果:培养24 h的PSCs胞质内富含高亮环形脂滴，细胞表达desmin。培养7 d后，细胞体积变大，脂滴基本消失，细胞活化并表达α-SMA。LPS组PSCs上清液中caspase-1、IL-1β、IL-18水平均显著高于对照组(1.55±0.04比0.65±0.03；2.02±0.04比1.05±0.05；1.70±0.05比0.97±0.03)。慢病毒感染PSCs后，慢病毒组NLRP3蛋白表达量(0.25±0.04)显著低于阴性对照组(0.68±0.05)。对照组、LPS组、LPS+阴性对照组、LPS+慢病毒组PSCs培养48 h后的 A490值分别为0.61±0.02、1.15±0.06、0.96±0.05、0.56±0.01，迁移细胞数分别为(64.12±4.58)、(121.67±8.02)、(111.67±4.67)、(69.67±8.08)个/高倍视野，α-SMA蛋白沉积量分别为0.78±0.05、4.12±0.04、3.81±0.06、0.88±0.05，collagen蛋白沉积量分别为0.65±0.03、3.43±0.02、2.67±0.02、0.48±0.03，TGF-β mRNA表达量分别为0.22±0.03、0.89±0.01、0.86±0.03、0.43±0.02。LPS组、LPS+阴性对照组的 A490值、迁移细胞数、α-SMA和collagen蛋白表达水平及TGF-β mRNA表达量均显著高于对照组及LPS+慢病毒组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:NLRP3炎症小体可通过调控PSCs生物学功能，促进其细胞增殖和迁移能力，从而加剧细胞外基质沉积和胰腺纤维化形成。

目的:探讨双氢睾酮和羟基氟他胺（以下称为DH）最佳配比，构建雄激素及其拮抗剂双重释放系统，分析该系统在小鼠Ⅲ度烧伤创面修复中的应用效果。方法:该研究为实验研究。取HaCaT细胞，按随机数字表法（分组方法下同）分为空白组（不加药物培养）、低基线组、中基线组、高基线组，对后3组细胞均分别加用3种配比的DH培养。中配比下，从低到高3个基线组中双氢睾酮质量依次为1.4、2.8、4.0 μg，羟基氟他胺质量依次为1.2、1.6、2.0 μg，以此为基准，小配比下，双氢睾酮质量减少1/2，羟基氟他胺质量增加1/2；大配比下，双氢睾酮质量增加1/2，羟基氟他胺质量减少1/2。培养2 d，采用细胞计数试剂盒8检测细胞增殖水平（样本数为4）。取16只6~8周龄雄性BALB/c小鼠，于其背部制备Ⅲ度烧伤创面后，分为空白组、小配比组、中配比组和大配比组（每组4只小鼠），伤后7 d于后3组小鼠创面局部滴加含不同配比DH的生理盐水［从小到大3个配比组中DH总量分别为127.5、165.0、202.5 μg，双氢睾酮与羟基氟他胺质量比（以下称为药物质量比）分别为8∶9、8∶3、8∶1］，之后每48小时重复给药1次，直至伤后27 d；对空白组小鼠创面于前述时间点滴加生理盐水。观察伤后0（即刻）、7、14、21、28 d创面愈合情况并计算伤后7、14、21、28 d创面愈合率（样本数为4）；伤后28 d，取创面组织，行苏木精-伊红染色后观察再上皮化情况，行Masson染色后观察胶原纤维情况并分析胶原纤维占比（样本数为3）。取20只6~8周龄雄性BALB/c小鼠，于其背部制备Ⅲ度烧伤创面后，分为普通支架组和小比例支架组、中比例支架组、大比例支架组（每组5只小鼠），伤后7 d开始对创面分别持续外敷运用静电纺丝技术制备的不含药物的聚己内酯支架和含药物质量比为1∶3、1∶1、3∶1的DH的聚己内酯支架（即雄激素及其拮抗剂双重释放系统，DH总量均约为1.7 mg）直至实验结束。同前动物实验于相同时间点行组织病理学分析（样本数为3）；伤后7、14 d，收集创面分泌物，通过16S核糖体RNA高通量测序分析菌群相对丰度（样本数为3）。结果:培养2 d，在小配比下，低基线组、高基线组HaCaT细胞增殖水平均显著高于空白组（ P<0.05）。随着伤后时间的延长，4组小鼠创面均不断缩小。伤后14 d，大配比组小鼠创面愈合率为72.5%（61.7%，75.1%），与空白组的53.3%（49.5%，64.4%）相近（ P>0.05）；小配比组与中配比组小鼠创面愈合率分别为74.2%（71.0%，84.2%）和70.4%（65.1%，74.4%），均显著高于空白组（ Z值均为-2.31， P<0.05）。伤后21 d，小配比组小鼠创面愈合率显著高于空白组（ Z=-2.31， P<0.05）。伤后28 d，3个配比组小鼠创面完全再上皮化且表皮均较空白组厚；与空白组比较，3个配比组小鼠创面组织中胶原纤维含量均更多且排列更有序，小配比组和大配比组小鼠创面组织中胶原纤维占比均明显增大（ P<0.05）。伤后28 d，普通支架组小鼠创面部分上皮化，3个比例支架组小鼠创面基本完全上皮化，其中小比例支架组小鼠创面表皮最厚；小比例支架组小鼠创面组织中胶原纤维占比较普通支架组明显增大（ P<0.05）。伤后7 d，4组小鼠创面分泌物中相对丰度较高的菌群包括棒状杆菌属、葡萄球菌属、红球菌属菌；伤后14 d，4组小鼠创面分泌物中相对丰度较高的菌群包括寡养单胞菌属、红球菌属、葡萄球菌属菌，且3个比例支架组小鼠创面分泌物中菌群种类数都多于普通支架组。 结论:药物质量比相对较小的DH，具有促进HaCaT细胞增殖的作用；8∶9为双氢睾酮与羟基氟他胺的最佳质量比，该质量比DH可以促进小鼠Ⅲ度烧伤创面再上皮化与胶原沉积，促进创面愈合。构建的含药物质量比为1∶3的DH的雄激素及其拮抗剂双重释放系统有助于小鼠Ⅲ度烧伤创面的再上皮化和胶原沉积，且可改善创面菌群多样性。

目的 探讨利拉鲁肽对DM小鼠肝脏损伤的改善作用及对肝脏纤维化、衰老和氧化应激的影响.方法 30 只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照(Con)组,模型组(Mod)和利拉鲁肽组(Lir),每组各 10 只.Western blot法检测衰老标志性分子p21、p16、肿瘤抑制蛋白(p53)及炎症因子TNF-α、IL-1β蛋白表达,Masson和天狼猩红染色分析利拉鲁肽对肝脏纤维化的影响,比较各组活性氧簇(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)氧化应激指标.结果 Mod组TNF-α、IL-6、IL-1β、p16、p21、p53、有丝分裂抑制因子、TNF-α、IL-6、IL-1β、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达高于Con、Lir组(P<0.05).Mod组ROS、MDA高于Con、Lir组,SOD、谷胱甘肽过氧化物酶低于Con、Lir组(P<0.05).Mod组天狼猩红染色阳性面积、Masson染色阳性面积高于Con、Lir组(P<0.05).结论 利拉鲁肽可缓解肝脏衰老、炎症和纤维化,对DM造成的肝脏损伤具有保护作用.

目的:采用网络药理学-分子对接的方法,探讨黄芪桂枝五物汤预防运动性疲劳(Exercise-induced fatigue,EF)的作用机制,并进行动物实验验证分析.方法:通过网络药理学工具获得黄芪桂枝五物汤预防EF的有效成分、核心靶点和信号通路.构建EF大鼠模型,进行HE染色、ELISA、PCR法验证网络药理学预测的主要靶点及预防效果.结果:筛选出黄芪桂枝五物汤中43个活性成分和242个潜在靶点,运动性疲劳潜在靶点1 002个;药物和疾病交集靶点104个,包括AKT1、IL6、TNF、IL1B、PPARG、PTGS2等.KEGG富集分析结果包括AGE-RAGE信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路、HIF-1信号通路等;分子对接结果显示豆甾醇、刺芒柄花素及原阿片碱等活性成分与PTGS2、PTGS1、CHRM1等关键靶点表现出良好的对接活性,黄芪桂枝五物汤可能通过影响AKT1、IL-6、TNF、IL-1B、PPARG、PTGS2等靶蛋白的表达进而调控炎症反应和细胞凋亡.黄芪桂枝五物汤可以使大鼠肌纤维排列更紧密,增强大鼠四肢肌力、运动耐力、心脏供血能力,且缓解心脏过度代偿.与正常对照组比较,模型对照组游泳力竭时间与四肢抓力显著减少,血清中肌酸激酶(CK)、血乳酸(BLA)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、缺氧诱导因子(HIF-1α)的含量显著升高,血管内皮生长因子(VEGF)与促红细胞生成素(EPO)的含量显著降低(P＜0.01),雌激素受体1(Esr1)表达下调,前列腺素内过氧化物合酶2(Ptgs2)、蛋白激酶1(Akt1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Pparg)和果寡糖(Fos)mRNA表达上调(P＜0.05);与模型对照组比较,黄芪桂枝五物汤组游泳力竭时间与四肢抓力显著增加,血清中CK、BLA、IL-6、TNF-α、HIF-1α的含量显著减少;VEGF、EPO的含量显著增加(P＜0.01);Esr1 mRNA表达上调,Ptgs2、Akt1、Pparg、Fos mRNA表达下调(P＜0.05).结论:黄芪桂枝五物汤中槲皮素、β-谷甾醇、山柰酚等化合物发挥核心作用,通过影响PTGS2、PTGS1、ADRB2等靶蛋白的表达并参与AGE-RAGE、TNF、IL-17信号传导途径,发挥预防运动性疲劳的作用.

患者,男,66岁,因"颈部不适伴双下肢乏力16天,加重伴双上肢乏力10小时"于2022年6月1日至我院就诊.患者16天前无明显诱因下出现颈部不适、酸痛感,傍晚时出现四肢乏力,以双下肢为著,尚能行走,伴有尿潴留,次日双下肢无力明显加重,需坐轮椅.于外院行颈椎MRI结果示颈髓2～6水平局部高信号,考虑炎性改变.脑脊液常规、生化、培养结果均未见异常;血清及脑脊液中枢神经系统脱髓鞘自身抗体[水通道蛋白4(AQP4)抗体、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)抗体及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体]结果均为阴性;血和脑脊液均未发现寡克隆区带.

目的 对从防风中分离得到的均一多糖SP800301 进行结构解析,确定化学结构.方法 采用二乙氨基乙基(DEAE)-纤维素、葡聚糖凝胶G-75 等柱色谱法,分离纯化防风多糖;采用电喷雾串联质谱、气相色谱质谱联用、核磁共振等技术,对分离得到的防风均一多糖SP800301 的分子量分布、单糖组成、寡糖片段、糖残基类型和糖苷键连接方式等进行分析,确定结构;采用电子显微镜和原子力显微镜扫描法表征防风均一多糖SP800301 的外貌特点.结果 防风多糖SP800301 均一性良好,分子量为9.1×104 g/mol,糖醛酸含量52.72%,由鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,摩尔比为4.3∶58.1∶25.4∶5.0∶7.3.主要以聚半乳糖醛酸为主链,支链由鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖、葡萄糖和阿拉伯糖组成,其中,阿拉伯糖在支链末端,糖链中部分半乳糖醛酸形成了甲酯.结论 明确了防风中均一多糖SP800301 的化学结构,丰富了防风中多糖的化学成分内涵,为进一步研究防风多糖的免疫调节作用机制奠定基础,为防风在临床的应用提供科学依据.

目的 探讨冲和膏通过蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)自噬通路介导核苷酸结合寡聚酸结构域样受体蛋白 3(NLRP3)炎症小体失活对糖尿病大鼠溃疡创面愈合的作用机制.方法 采用高糖高脂饲料喂养、腹腔注射链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)联合皮肤缺损方法构建糖尿病溃疡 SD大鼠创面模型36 只,将大鼠随机分为模型组、冲和膏组和生长因子组,每组 12 只.另取 12 只SD大鼠构建普通创面模型作为空白组.空白组和模型组不进行药物干预,冲和膏组和生长因子组分别外敷冲和膏、生长因子凝胶,观察记录各组大鼠创面愈合情况.给药第 7 天和第 14 天分别取材,HE染色观察创面组织病理学改变,并进行成纤维细胞计数;ELISA法检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;免疫组化检测创面肉芽组织自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达水平;Western Blot法检测创面肉芽组织炎症小体相关蛋白NLRP3、含Caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1、Pro-Caspase-1 及Akt/mTOR自噬通路相关蛋白Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的表达情况.结果 与空白组比较,模型组在第 7 天和第 14 天创面病理损伤修复延缓,单位面积成纤维细胞数量较少(P＜0.01),炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α水平升高(P＜0.01),创面组织中ASC、Pro-Caspase-1、Caspase-1、NLRP3 表达水平升高(P＜0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ以及mTOR、p-mTOR、Akt、p-Akt表达水平降低(P＜0.01);与模型组比,第 7 天和第 14 天冲和膏组和生长因子组病理损伤明显改善,单位面积成纤维细胞数量明显增加(P＜0.01),炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α水平明显降低(P＜0.01),创面组织中ASC、Pro-Caspase-1、Caspase-1、NLRP3表达水平降低(P＜0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ以及mTOR、p-mTOR、Akt、p-Akt表达水平升高(P＜0.01,P＜0.05).结论 冲和膏可降低炎症反应,促进成纤维细胞生成,调控Akt/mTOR通路介导NLRP3 炎症小体失活,改善创面自噬水平,从而促进糖尿病大鼠溃疡创面愈合.

目的 对防风Saposhnikovia divaricata中分离得到均一多糖的结构及其免疫调节活性进行研究.方法 采用DEAE-纤维素、Sephadex G-75等柱色谱法,对防风多糖进行系统分离纯化,采用ESI-MSn、GC-MS、NMR等谱学技术,对分离得到的防风多糖SP800203的相对分子质量分布、单糖组成、寡糖片段、糖残基类型和糖苷键连接方式等进行分析,确定其结构.采用细胞实验和斑马鱼实验,研究防风多糖SP800203的免疫调节活性.结果 从防风中分离得到防风多糖SP800203,糖醛酸质量分数为75.73％,相对分子质量约为7.14×104,由鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖和半乳糖醛酸组成,单糖物质的量比为2.8∶6.7∶6∶84.5.主链由半乳糖醛酸聚合而成,2条支链分别由阿拉伯糖、半乳糖醛酸、半乳糖、鼠李糖,以及阿拉伯糖、半乳糖醛酸、半乳糖聚合而成,二者分别通过β、α糖苷键与主链相连.防风多糖SP800203可以促进巨噬细胞一氧化氮、肿瘤坏死因子-α、白介素-1β和白介素-6的释放,增加斑马鱼的免疫细胞密度和巨噬细胞数量.结论 防风多糖SP800203为从防风中分离得到的新的均一多糖,具有良好的免疫调节活性;研究结果为阐明防风免疫调节作用机制奠定了基础,为防风临床应用及进一步研究与开发提供科学依据.

聚合度 2?6 的可溶性纤维寡糖是一种具有多种生物功能的低聚糖,它能够促进双歧杆菌(Bifidobacteria)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracei)等肠道益生菌的增殖,因此对人体肠道微生态具有调节作用.本研究通过在大肠杆菌中表达纤维寡糖磷酸化酶(cellodextrin phosphorylase,CDP),构建Cc 01 菌株,并与之前构建的COS 01 菌株联合使用,建立了基于COS 01、Cc 01 的三酶级联反应催化底物葡萄糖和蔗糖合成纤维寡糖反应体系.经过优化后,最终可溶性纤维寡糖的产量达到97 g/L,纯度约为 97%,其中含有纤维二糖(16.8 wt%)、纤维三糖(49.8 wt%)、纤维四糖(16.4 wt%)、纤维五糖(11.5 wt%)和纤维六糖(5.5 wt%).在纤维寡糖对益生菌株生长促进作用的测试中,以菊粉、低聚木糖、低聚果糖为基准,干酪乳杆菌(WSH 004)、副干酪乳杆菌(WSH 005)以及嗜酸乳杆菌(WSH 006)利用纤维寡糖(聚合度2?6)为碳源进行生长后,益生菌的生物量(OD600)相比对照增加约 2 倍.该研究证明了三酶级联反应能够高效合成纤维寡糖,并表明聚合度 2?6 的纤维寡糖是一类具有促进肠道微生物增殖的功能性碳水化合物.