目的:研究活体骨内血管显像方法，分析其临床意义，补充相关骨科疾患诊治依据。方法:通过改进显影剂来增加局部浓度实现显影，以Lijianmin-Chengkun（LC）复合通路研究为基础，利用磁性微球理论，使用外壳为氨基（携负电荷）的Fe 3O 4磁性微球，吸附聚集离子型显影剂泛影葡胺（泛影酸根携正电荷），即通过改进显影剂的方法，使磁性微球携带显影剂，制成新的纳米粒子-磁影复合微粒，在外界磁场作用下，血液循环带来的磁影复合微粒不断在磁场区域血管内滞留聚集，磁场区域血管内磁性微球携带的显影剂浓聚达到显像浓度，实现活体骨内血管显像。并且通过调整两种试剂配比，可适度中和电荷凝结成小的集团，提高显影效率。由此分步进行了电镜实验、CT活体实验兔成像实验、实验兔组织学检查证实、CT活体人体成像试验。 结果:电镜实验：泛影葡胺，扫描电镜，微粒直径约20 nm。氨基Fe 3O 4磁性微球，扫描电镜，微粒直径约100 nm，分布较疏散均匀。两种试剂按一定比例混合后，中和电荷凝结成小的集团，但仍具备磁流体性能、强顺磁性。活体实验兔成像实验:捕捉到了理想的胫骨近端骨内血管成像。实验兔组织学检查证实:有磁场一侧胫骨近端内血管明显可见四氧化三铁分布，无磁场一侧未见。活体人体成像试验：捕捉到了理想的腓骨近端骨内血管成像。 结论:通过磁影复合微粒（磁性微球+泛影葡胺）新试剂的制作，在外界磁场作用下，达到活体骨内显影剂浓聚，在CT薄层扫描下可实现活体外径≥0.5 mm骨内血管成像。

目的:构建一种新型阿霉素-壳聚糖乳酸盐纳米缓释载体用于骨肉瘤治疗研究。方法:2%乳酸水溶液制备水溶性的壳聚糖乳酸盐，pH 5.0的反应体系中，壳聚糖乳酸盐与TPP以10:1的投料比制备载阿霉素的壳聚糖乳酸盐纳米微粒（ChLa-Dox NPs），动态光散射（DLS）分析其粒径、多分散系数、Zeta电位，扫描电镜进行微观形貌学表征，ChLa-Dox NPs的生物学效应检测则通过缓释载体体外缓释动力学、MG63骨肉瘤细胞系细胞毒性实验、细胞迁徙能力及流式细胞术检测。结果:在pH 5.0及壳聚糖乳酸盐：TPP的投料比为10:1的反应条件下制备的ChLa-DoxNPs平均粒径为142.4±1.21 μm，多分散系数（PDI）为0.14±0.01，Zeta电位为+29.2 mV。ChLa-DoxNPs在体外10h时阿霉素达到缓释平台期，缓释12 h内阿霉素累积释放率为（69.4±2.6）%；MG63细胞系骨肉瘤细胞模型实验中，空载纳米微粒组细胞存活率为92.36±3.17%，而不同载药量的ChLa-Dox NPs组具备显著的骨肉瘤细胞杀伤作用。相比空载体组，ChLa-Dox NPs对骨肉瘤细胞迁徙能力有显著的抑制作用，明显促进骨肉瘤凋亡的发生[（凋亡率为（54.08±2.53%）]。结论:经改良制备的载阿霉素壳聚糖乳酸盐纳米微粒符合抗肿瘤纳米载体的理化特性要求，生物相容性好，体外缓释动力学及抗骨肉瘤相关分子-细胞生物学检测表明其具备较好的阿霉素缓释特性，体外能有效的抑制骨肉瘤细胞增殖、迁徙并促进其凋亡，具有较明确的临床转化前景。

脊髓损伤是常见的脊柱骨折合并伤，可导致患者运动及感觉功能障碍甚至瘫痪。外泌体作为纳米级的细胞微粒参与多种疾病的发生与发展，已受到广泛关注。脊髓损伤时来源于脊髓组织细胞的外泌体对损伤进程与组织修复产生影响；另外，外泌体可作为脊髓损伤的一种新兴治疗方案也被广为研究。笔者就脊髓组织中各类细胞外泌体在脊髓损伤中的作用机制以及多种细胞来源外泌体在脊髓损伤中的修复作用进行综述，加深对外泌体在脊髓损伤中作用的认识，为研究脊髓损伤病程和治疗提供新思路。

采用乳化聚合法制备负载吉西他滨(GEM)的纳米微球(GEM-PBCA-NP)，应用化学交联法将抗黏液蛋白1(MUC1)单抗偶联GEM-PBCA-NP。采用皮下种植法建立胰腺癌荷瘤裸鼠模型，并随机分为MUC1-GEM-PBCA-NP组、GEM-PBCA-NP组、GEM组、单纯纳米颗粒组(PBCA-NP组)和对照组。结果显示，MUC1-GEM-PBCA-NP组裸鼠移植肿瘤的抑制率显著高于其他各组，治疗结束时的移植肿瘤重量显著低于其他各组。提示MUC1-GEM-PBCA-NP对裸鼠移植肿瘤具有良好的抑制生长作用。

目的:探讨不同浓度人脂肪间充质干细胞(hADMSCs)来源类外泌体纳米囊泡(NVs)和外泌体(EXOs)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)生物学功能的影响。方法:(1)通过水动力抽脂方式，从2019年6月至2020年8月就诊于福建医科大学附属协和医院的10例女性大腿获取脂肪组织(年龄18~65岁)，通过酶解分离提取第4代hADMSCs，对其进行成脂、成骨诱导分化，流式细胞仪鉴定其表面蛋白标志物。(2)制备hADMSCs-NVs和hADMSCs-EXOs并电镜观察其形态，以粒径分析仪分析其表面蛋白标志物，通过纳米颗粒跟踪仪分析颗粒大小，通过蛋白定量和纳米颗粒跟踪仪分别检测1×10 6个hADMSCs产生的NVs和EXOs总蛋白含量和颗粒数。(3)设置对照组(加入等量基础培养基)、40、60、80 μg/ml NVs组和20、40、60 μg/ml EXOs组，分别通过CCK-8增殖实验、细胞划痕试验、血管形成实验检测各组HUVECs增殖、迁移、血管再生能力。采用Graphpad Prism 7.0进行统计分析，计量资料以 ± s表示，多组间比较应用重复测量方差分析，组间两两比较应用Tukey检验， P<0.05表示差异有统计学意义。 结果:(1)光学显微镜下观察到第4代hADMSCs形态呈细长纺锤状；成脂诱导21 d后，油红O染色可见细胞内透明的脂滴被染成红色；成骨诱导14 d后，碱性磷酸酶钙钴法染色可见大量棕黑色着色区；hADMSCs表面蛋白标志物CD90、CD29为阳性。(2)透射电镜下可见hADMSCs-NVs和EXOs结构相似，都呈盘状囊泡；NVs和EXOs表面蛋白标志物CD9、CD81、IgG表达量相似；NVs和EXOs两者的粒径大小大致相同，分别为(72.00±21.51)nm和(81.27±22.37)nm；1×10 6个hADMSCs产生的NVs总蛋白含量为(140.7±5.1) μg，是EXOs的[(1.3±0.3) μg] 100倍左右；NVs颗粒数[(644.5±17.1)×10 8个/ml]是EXOs[(7.1±0.1)×10 8个/ml]的90倍左右。(3)CCK-8增殖实验中，培养12、24、48 h各组HUVECs生长趋势较为一致，吸光度值比较差异有统计学意义( P<0.01)；培养48 h，60 μg/ml NVs、40 μg/ml EXOs组吸光度值均大于对照组(均 P<0.01)，而两实验组之间差异无统计学意义( P>0.05)。细胞划痕后8、24 h，各组划痕宽度改变不完全相同，差异有统计学意义( P<0.01)；划痕后24 h，60 μg/ml NVs、40 μg/ml EXOs组划痕宽度改变均大于对照组(均 P<0.01)，而两实验组之间差异无统计学意义( P>0.05)。血管形成实验中，各组血管分支点数量与血管长度不完全相同，差异有统计学意义( P<0.01)；60 μg/ml NVs、40 μg/ml EXOs组HUVECs形成的毛细血管分支点数量均多于对照组(均 P<0.01)，而两实验组之间差异无统计学意义( P>0.05)；60 μg/ml NVs、40μg/ml EXOs组毛细血管长度均长于对照组(均 P<0.01)，而两实验组之间差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:hADMSCs-NVs的形态、大小与EXOs相似，而总蛋白量却是EXOs的100倍左右；hADMSCs-NVs和EXOs对HUVECs生物学功能的作用相近，两者最适宜的浓度分别为60 μg/ml和40 μg/ml。

白及多糖作为中药白及的活性成分,在白及块茎中的含量可达30％以上,具有止血、杀菌、促伤口愈合等功效,由α-甘露糖、β-甘露糖和β-葡萄糖构成,结构稳定,羟基丰富,生物相容性好,安全性高,在伤口敷料的制备方面具有广阔的应用前景.目前已有白及多糖与其他成分结合制备止血微粒、海绵、水凝胶及纳米纺丝材料的研究,并发现材料具有良好的止血或促伤口愈合的功效.该文分析了白及多糖成为创面敷料合成热点的原因,并对白及多糖制备的创面敷料类型进行介绍,最后综述了新型敷料的交联合成方式,以期能够为白及多糖在创面敷料领域的进一步应用开发提供理论依据.

目的:通过分析髋关节骨折患者高凝状态与其外周血中微粒（microparticles，MPs）水平的相关性，探讨清除MPs纠正髋关节骨折患者中高凝状态的可行性。方法:2018年12月至2019年9月65例我院骨科急诊收治髋关节骨折患者资料，男24例，女41例；年龄（75.6±9.8）岁（范围：58~95岁）。其中股骨颈骨折27例，转子间骨折38例，术前均摄X线片或行CT扫描确诊。同期健康体检中心健康人群20例作为对照，男8例，女12例；年龄（72.3±6.5）岁（范围：56~81岁）。实验及对照组均在清晨空腹下取2 ml抗凝全血，采用透射电镜和纳米颗粒跟踪分析仪对全血中提纯的微粒进行鉴定；全血差速离心获得无细胞血浆（cell free plasma，CFP）后采用流式细胞仪测定其中膜联蛋白-5（annexin V，AV）阳性MPs和来源于血小板AV +微粒（platelet-derived microparticles，PMPs）的数量及应用凝血和血小板功能分析仪测定凝血酶生成时间（activated clotting time，ACT）评价高凝状态程度，对与高凝状态相关的危险因素进行Logistic回归分析，判断测定MPs水平是否为高凝状态的独立危险因素，并进行相关性分析；最后应用全自动凝血分析仪测定各样本CFP在过滤去除MPs前后的凝血功能。 结果:电镜下MPs形态呈现囊泡状，具有完整的双层膜结构，大小在100~1 000 nm范围内，并且形态不均一，有不规则囊泡状和圆形的囊泡状的大体形态，纳米颗粒跟踪分析仪可以看到髋关节周围骨折患者外周血中MPs大小为（239.7±4.0）nm；对照组MPs分布大小为（247.7±3.3）nm，且二者MPs直径大小差异无统计学意义（ P>0.05）。髋关节骨折患者循环AV +MPs计数的平均水平为（564±171）个/μl，PMPs平均（326±104）个/μl，正常人群AV +MPs计数的平均水平为（252±82）个/μl，PMPs平均（192±41）个/μl，两者AV +MPs，PMPs之间的差异均有统计学意义（ P<0.05）；髋关节骨折患者ACT值平均水平为（324±94）s，而正常人群ACT平均水平为（535±76）s，二者之间的差异有统计学意义（ P<0.05）；单因素Logistic回归分析显示APTT、PMPs、AV +MPs的水平可能是高凝状态的危险因素，将其进行多因素Logistic回归分析结果显示，AV +MPs是高凝状态的独立危险因素。其与ACT间存在高度负相关（ r=-0.822， P<0.05）。CFP测定凝血功能的结果为PT（10.8±0.46）s、APTT（30.6±1.56）s、Fib（3.08±0.36）g/L、INR（0.98±0.04）s、TT（19.3±0.62）s；而CFP滤除MPs后凝血功能PT（10.8±0.52）s、APTT（32.4±3.0）s、Fib（2.90±0.33）g/L、INR（0.99±0.05）s、TT（19.9±0.63）s，凝血功能前后差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:髋关节骨折患者存在高凝状态，且AV+MPs水平是高凝状态的独立危险因素，和ACT之间具有高度相关性，并且MPs对经典的凝血功能无明显影响。

外泌体作为稳定存在于体液且富含遗传物质的双层脂质小泡，携载蛋白、核酸、脂质等活性物质，在细胞间进行信息传递并进而影响靶细胞的生物学行为。胰腺肿瘤细胞与间质细胞均可释放外泌体，存在交叉对话机制，在介导胰腺癌细胞恶性表型、耐药、免疫抑制微环境等方面具有重要作用。作为液体活检的手段之一，外泌体在胰腺癌诊断方面具有广阔的潜在应用前景。此外，外泌体表面分子具有可编辑性，作为纳米级微粒具有穿透生物屏障的能力，有望成为胰腺癌靶向及免疫治疗的载体。

目的:采用纳米磁微粒化学发光免疫技术建立尘螨过敏原第1、2组分(Der p 1、Der p 2)特异性免疫球蛋白E(sIgE)的定量检测方法。方法:通过优化试剂组份和反应模式，评估纳米磁微粒化学发光免疫技术检测Der p 1、Der p 2 sIgE的各项性能指标。同时检测50例疑似尘螨过敏患者血清Der p 1、Der p 2 sIgE水平，与Phadia系统测定结果为标准进行比较，其一致性的比较采用 Kappa检验。 结果:最佳实验体系为：磁微粒用量25 μg，反应缓冲液(pH值7.4)含0.1 mol/L Tris-HCl、质量分数0.25%酪蛋白，包被液含20 mmol/L磷酸缓冲液(PB)、质量分数1%牛血清白蛋白(BSA)，发光增强液含体积分数0.05% Triton X-100，采用两步法免疫反应，样本量为20 μl，反应温度为37 ℃。检测体系最低检出限小于0.01 kU/L，线性范围0.2~100.0 kU/L，批内、批间精密度分别小于5%、7%，Der p 1和Der p 2交叉污染率分别为0.19%、0.21%。与Phadia系统测定结果比较，Der p 1阳性、阴性符合率分别为78.0%(32/41)、9/9，一致性较好( Kappa＝0.65， P＝0.008)；Der p 2阳性、阴性符合率分别为93.3%(28/30)、85.0%(17/20)，一致性也较好( Kappa＝0.79， P＝0.003)。 结论:成功建立了尘螨过敏原Der p 1、Der p 2 sIgE纳米磁微粒化学发光免疫检测方法，其各项性能指标良好，与Phadia系统有较好的一致性。

目的:探讨巯基聚乙二醇（polyethylene glycol-thiol，PEG-SH）修饰的GNPs/miR-29纳米微粒诱导神经干细胞增殖、分化的作用。方法:采用氧化还原法制备PEG-SH修饰的GNPs/miR-29纳米微粒，检测紫外吸收光谱、粒径分布及Zeta电位。选取15只成年雄性SD大鼠，以改良Allen法构建脊髓损伤模型；在脊髓损伤区域分别植入人工合成的miR-29和PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒，采用凝胶电泳法分析miR-29表达的稳定性。取SPF级SD乳鼠10只，分离培养神经干细胞，使用Nestin、GFAP及NSE抗体鉴定细胞。以CCK-8法检测人工合成的miR-29、PEG-SH GNPs及PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒对神经干细胞活性、增殖的影响。将人工合成的miR-29、PEG-SH GNPs及PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒与神经干细胞共培养1周，观察神经元突起的密度、长度及数量。结果:PEG-SH修饰的纳米金呈棕红色；透射电镜下为均匀分布的球形；紫外吸收光谱呈现单峰波，在523 nm附近出现吸收峰值；Zeta电位随PEG-SH含量增加而逐渐增大，峰值为（22.5±5.2） mV；粒径随PEG-SH含量增加早期迅速达峰值后下降维持至稳定水平。脊髓损伤区域植入miR-29及PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒0~6 h，人工合成的miR-29组可见清晰的表达条带，但12~24 h表达条带迅速消失；PEG-SH GNPs/miR-29微粒组，始终能观察到清晰的表达条带。接种细胞第1、3、5、7天，miR-29组OD值分别为0.34±0.17、0.78±0.31、1.28±0.68、1.64±0.38，与DMEM组相比差异无统计学意义；GNPs组、PEG-SH GNPs组以及PEG-SH GNPs/miR-29组的OD值与DMEM组相比差异均无统计学意义。PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒组神经元突起的密度为（56.38±3.65） μm 2、长度为（78.25±3.72） μm、数量为（356±34.52）个/1 000倍视野，均大于miR-29组[分别为（12.53±3.26） μm 2、（11.35±3.36） μm、（158±32.85）个/1 000倍视野]、PEG-SH GNPs组[分别为（14.12±3.45） μm 2、（12.56±3.57） μm、（160±32.52）个/1 000倍视野]和生理盐水组[分别为（10.25±3.52） μm 2、（9.35±3.28） μm、（152±32.28）个/1 000倍视野]，但与胎牛血清组[分别为（56.48±3.56） μm 2、（76.85±3.65） μm、（350±35.26）个/1 000倍视野]比较差异无统计学意义。 结论:PEG-SH修饰的GNPs/miR-29纳米微粒具备良好的生物学性能，可诱导神经干细胞增殖、分化，对miR-29有一定程度的保护效应。