目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-4699-3p在卵巢癌细胞株中的表达，观察其靶向调控线粒体核糖体蛋白S23(MRPS23)表达的能力及对卵巢癌细胞迁移和增殖的影响。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-4699-3p在卵巢癌细胞株(OVCAR-3、SKOV-3、HO-8910、OC3、A2780)和正常卵巢上皮细胞(IOSE80)中的表达。采用脂质体转染法分别将miR-4699-3p模拟物或阴性对照miR-NC转染至miR-4699-3p表达最低的细胞株，定义为实验组和对照组。qRT-PCR验证转染效率。生物信息学技术预测miR-4699-3p的候选靶基因，双荧光素酶报告基因实验鉴定其对靶基因的调控能力。qRT-PCR和Western blot检测MRPS23在mRNA和蛋白水平的表达变化。细胞计数法(CCK-8)和Transwell迁移实验分别检测miR-4699-3p对卵巢癌细胞增殖和迁移能力的影响。结果:miR-4699-3p在卵巢癌细胞株中的表达明显低于正常卵巢上皮细胞( P<0.05)，在OVCAR-3细胞中的表达最低( P<0.01)。转染miR-4699-3p后，实验组OVCAR-3细胞中miR-4699-3p表达量显著升高( P<0.01)，证明转染成功。生物信息学软件预测，miR-4699-3p的候选靶基因可能是线粒体核糖体蛋白S23(MRPS23)，双荧光素酶报告基因实验证实miR-4699-3p可直接靶定MRPS23基因mRNA的3′-非翻译区(UTR)( P<0.01)。与对照组OVCAR-3细胞相比，实验组过表达miR-4699-3p后，MRPS23基因在mRNA和蛋白表达水平均明显降低( P<0.01)，细胞转移和细胞周期调控蛋白Twist、Slug、CDK6、Cyclin D3表达均降低( P<0.05)，OVCAR-3细胞的增殖能力降低( P<0.05)，OVCAR-3细胞迁移能力降低( P<0.01)。 结论:miR-4699-3p在卵巢癌细胞株中低表达，上调OVCAR-3细胞中的miR-4699-3p表达可通过干扰MRPS23基因表达，抑制卵巢癌细胞增殖和迁移能力。

目的:评价瞬时受体电位M2(TRPM2)-钙调磷酸酶A(CnA)-线粒体动力相关蛋白1(Drp1)通路在丙泊酚减轻小鼠肝缺血再灌注致肾损伤中的作用。方法:SPF级雄性C57BL6小鼠24只，8周龄，体重20～23 g，采用随机数字表法分为4组( n＝6)：假手术组(S组)、肝缺血再灌注组(IR组)、丙泊酚组(P组)和TRPM2激动剂腺苷二磷酸核糖(ADPR)+丙泊酚组(AP组)。采用夹闭肝左、中叶门静脉和肝动脉60 min恢复灌注的方法制备肝缺血再灌注损伤模型。P组于造模前1 h时腹腔注射生理盐水0.2 ml，造模前30 min时腹腔注射1%异丙酚30 mg/kg；AP组于造模前1 h时腹腔注射ADPR 10 mg/kg(溶于0.2 ml生理盐水中)，造模前30 min腹腔注射1%异丙酚30 mg/kg；S组和IR组分别于造模前1 h和30 min时腹腔注射等体积生理盐水。于再灌注6 h时摘眼球采血检测血清BUN、Cr、ALT和AST水平，然后处死小鼠取肾组织，透射电镜下观察线粒体超微结构，并计算线粒体长径，采用Western blot法检测TRPM2、CnA、磷酸化Drp1(p-Drp1) Ser637和cleaved caspase-3的表达。 结果:与S组比较，IR组、P组和AP组血清BUN和Cr浓度升高，肾组织TRPM2、CnA和cleaved caspase-3表达上调，p-Drp1 Ser637表达下调，线粒体长径缩短( P<0.05)；与IR组比较，P组血清BUN和Cr浓度降低，肾组织TRPM2、CnA和cleaved caspase-3表达下调，p-Drp1 Ser637表达上调，线粒体长径延长( P<0.05)，线粒体损伤减轻，血清ALT和AST浓度差异无统计学意义，AP组血清BUN和Cr浓度差异无统计学意义( P>0.05)；与P组比较，AP组血清BUN和Cr浓度升高，肾组织TRPM2、CnA和cleaved caspase-3表达上调，p-Drp1 Ser637表达下调，线粒体长径缩短( P<0.05)，线粒体损伤加重。 结论:丙泊酚减轻小鼠肝缺血再灌注致肾损伤的机制与其抑制肾组织TRPM2的表达，降低胞内CnA的水平，抑制Drp1 Ser637去磷酸化有关。

目的 探讨金匮肾气丸治疗肾阳虚证的可能作用机制.方法 60只Wistar大鼠随机分为正常组20只和造模组40只,将造模成功的38只大鼠再随机分为中药组和模型组各19只,中药组大鼠给予金匮肾气丸8.44g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组大鼠给予生理盐水3 ml灌胃,每日1次,连续3周.分别取正常组、模型组和中药组大鼠的股骨髁松质骨,进行总蛋白的提取与制备;采用蛋白质双向凝胶电泳技术展示各组大鼠股骨踝松质骨蛋白质组图谱,应用PDQuest 8.0软件分析各组间差异表达蛋白点,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)初步鉴定差异表达蛋白点.结果 各组大鼠股骨髁松质骨双向凝胶电泳图谱的蛋白点数目均为552个;与正常组比较,模型组有23个差异表达的蛋白质;与模型组比较,中药组有16个差异表达的蛋白质.给予金匮肾气丸溶液后,肾阳虚模型大鼠股骨髁松质骨中原来表达上调的磷酸甘油酸激酶1及表达下调的14-3-3ζ蛋白、网钙蛋白3、原肌球蛋白异构体2α-3链、原肌球蛋白α-4链、原肌球蛋白异构体α-1链、40s核糖体蛋白sa、半乳糖凝集素1、线粒体ATP合成酶亚基α、膜联蛋白A1、GDP解离抑制因子1、Ⅰ型胶原α-1链、LOC683667蛋白、膜联蛋白A5、过氧化氧化还原蛋白2和蛋白质二硫键异构酶A3均出现表达趋势的反向调整.结论 金匮肾气丸对肾阳虚证的调节可能涉及股骨髁松质骨结构构成、物质转运、能量代谢和细胞增殖与凋亡等方面.

[目的]研究并比较冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis (Berk.) Sung et a1.寄主白马蝠蛾Hepialus baimaensis Liang和云南蝠蛾Hepialus yunnanensis Yang,Li et Shen体内微生物群落组成及其功能差异,初步分析蝠蛾体内微生物群落对冬虫夏草菌侵染蝠蛾的影响.[方法]对白马蝠蛾(Hb)和云南蝠蛾(Hy)4-5龄期幼虫内微生物进行Ion S5TMxL高通量测序,并利用生物信息学软件对细菌和真菌群落分别进行群落组成、LefSe(LDAEffect Size)、功能预测分析和比较分析.[结果]Hb组细菌共鉴定17门145属;Hy组细菌共鉴定23门202属.Hb组细菌中肉杆菌属Carnobacterium相对丰度占比最高,为95.55％;Hy组细菌中沃尔巴克氏体Wolbachia占主要比例(85.28％).Hb组真菌共鉴定4门114属;Hy组真菌共鉴定5门113属.Hb组真菌中假裸囊菌属Pseudogymnoascus为最优势属(46.23％),Hy组真菌中菌刺孢属Mycocentrospora为最优势属(37.87％).LefSe分析Hb组中有5个细菌分类单元和12个真菌分类单元与Hy组具有显著差异,而Hy组中有7个细菌分类单元和9个真菌分类单元与Hb组具有显著差异.两组样本细菌群落进行COG功能预测,Hb组更偏向氨基酸转运与代谢功能,而Hy组更偏向翻译、线粒体的结构与发生功能.两组样本细菌群落进行KEGG功能预测,Hb组中DNA解旋酶、ATP结合区和ABC转运蛋白丰度较高,Hy组中辅酶Q还原酶、推定转座酶和核糖体丰度较高.真菌群落FUNGuild分析,Hb组中46.26％的真菌属于动物病原菌-土壤腐生真菌类别;而Hy组占比最高真菌类别为植物病原菌(38.31％).两组真菌样本进行KEGG和MetaCyc pathway功能预测,两组样本中真菌功能丰度较高的类别均与基础代谢或生理功能相关.[结论]白马蝠蛾和云南蝠蛾4-5龄期幼虫体内细菌和真菌组成及其功能存在一定差异,而与其它寄主蝠蛾相比,白马蝠蛾4-5龄期幼虫内细菌和真菌组成存在相同的类群.本研究发现,白马蝠蛾4-5龄期幼虫内优势菌属肉杆菌属和假裸囊菌属很可能在冬虫夏草寄主蝠蛾生长发育、冬虫夏草侵染等过程中发挥重要作用.