本研究采用UPLC法建立适用于鉴别溪黄草药材4种基原植物溪黄草Rabdosia serra(Maxim.)H.Hara、线纹香茶菜 Rabdosia lophanthoides(Buch.-Ham.ex D.Don)H.Hara、纤花香茶菜 Rabdosia lophanthoides var.graciliflora(Benth.)H.Hara和长叶香茶菜Rabdosia stracheyi(Benth.ex Hook.f.)Hara的特征图谱,并结合特征图谱的相似度评价、聚类分析(cluster analysis,CA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)以及正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares-discriminate analysis,OPLS-DA)对4种基原植物的共有成分与差异性成分进行研究.从溪黄草、线纹香茶菜、纤花香茶菜和长叶香茶菜的特征图谱中分别标定了 19、24、26、21个特征峰.除溪黄草外,其他3种基原植物各自样品的相似度较高;但是不同基原植物之间的相似度具有一定的差异性.通过CA、PCA可将溪黄草与其他3种基原植物明显区分,通过OPLS-DA可将线纹香茶菜、纤花香茶菜和长叶香茶菜区分.该研究建立的UPLC特征图谱结合化学计量学方法较全面地反映了溪黄草药材4种基原植物的化学成分,方法简便快速、专属性强,可为溪黄草药材的基原鉴别和质量分析与评价提供参考.

目的:探讨狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮(WSTF)对氧化应激损伤LO2细胞的保护作用.方法:通过细胞毒性实验确定给药范围,建立过氧化氢(H2 O2)致LO2细胞损伤模型,用含不同浓度WSTF的培养液与急性损伤肝细胞共孵育不同时间,采用MTT比色法测定细胞活力,检测谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙二醛(MDA)的水平,评价WSTF对肝细胞损伤的保护作用.检测细胞线粒体膜电位和细胞内活性氧簇(ROS)水平,分析WSTF抑制H2 O2诱导LO2细胞凋亡情况.结果:0.3 mmol·L-1 H2 O2处理LO2细胞4 h构建H2 O2损伤LO2细胞模型,确定0.0312～0.125 mg·ml-1 WSTF为保护LO2细胞损伤的给药浓度范围.WSTF可抑制H2 O2对肝细胞的损伤,并明显降低H2 O2致急性损伤肝细胞的ALT、AST释放量和MDA水平,逆转H2 O2诱导LO2肝细胞线粒体膜电位去极化和细胞内ROS升高.结论:WSTF体外给药对肝细胞损伤有保护作用.

目的 构建溪黄草与线纹香茶菜的简单重复序列区间(inter-simple sequence repeat,ISSR)反应体系,为溪黄草药材种质资源的遗传多样性分析奠定基础.方法 通过设定溪黄草ISSR-PCR的各反应因子的不同梯度,对反应条件进行优化,建立适合溪黄草与线纹香茶菜的ISSR反应体系;以溪黄草DNA为模板,用该体系对100条引物进行初筛,用线纹香茶菜进行复筛,并用23个溪黄草、16个线纹香茶菜单株样品验证体系稳定性.结果 建立了溪黄草和线绞香茶菜ISSR最佳反应体系(25 μL):2×Taq Master Mix 12.5 μL(Mg2+浓度4mmol·L-1,dNTP浓度0.4 mmol·L-1)、引物0.6 μmol·L-1、模板DNA 10 ng.结论 建立的溪黄草和线纹香茶菜的ISSR反应体系稳定可靠、标记位点清晰、检测多态性能力强,可较好地应用于溪黄草与线纹香茶菜的ISSR遗传多样性分析的研究.

为进行中药溪黄草基原植物的品种鉴定,采用光镜和电镜对线纹香茶菜(原变种)[lsodon lophanthoides var lophanthoides]叶上腺毛的发育进行细胞学研究.结果表明,线纹香茶菜具有头状腺毛和盾状腺毛2种类型.头状腺毛无色透明,由1个基细胞、1个柄细胞和1或2个头部分泌细胞构成;盾状腺毛为红色,由1或2个基细胞、1个柄细胞和4～8个分泌细胞构成头部.2种腺毛均由原表皮细胞经两次平周分裂形成,后因柄细胞和头部细胞所处的分化状态不同而形成两类腺毛.2种腺毛超微结构表明,质体、高尔基体和粗面内质网为主要分泌物产生和运输的细胞器.当盾状腺毛成熟时,角质层下间隙充满了分泌物,其分泌物的性质很可能决定了线纹香茶菜腺毛的颜色.

目的:观察狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮对人肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用,探讨其机制.方法:建立荷瘤裸鼠动物模型,给药后观察并测量裸鼠瘤体,计算体积大小,并绘制生长曲线.分离瘤体后,计算抑制率,病理组织学检查,TUNEL染色检测移植瘤细胞凋亡.透射电镜观察瘤组织细胞的自噬小体和细胞超微结构,Western blot法检测Beclin1、Atg5、CyclinD1、Caspase-3、Bax、Bcl-2、nm23-Hl和MMP-9蛋白表达.结果:与模型对照组比较,狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮50、100、200 mg/kg具有显著抑制移植瘤生长的作用(P＜0.01).与5-氟尿嘧啶20 mg/kg相比,狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮100 mg/kg+5-氟尿嘧啶20 mg/kg联合应用能显著地降低肿瘤/体重比(P＜0.01).病理组织检查发现,与模型对照组比较,狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮50、100、200 mg/kg能促使癌细胞核分裂相对减少,肿瘤细胞发生凋亡,可见比较明显的重度坏死.TUNEL染色实验发现,与模型对照组比较,5-氟尿嘧啶20 mg/kg、华蟾素624 mg/kg、联合组、狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮100、200 mg/kg能诱导细胞凋亡,移植瘤细胞凋亡率均有显著提高(P＜0.01).电镜观察移植瘤细胞超微结构发现,与模型对照组比较,联合用药组、狭基线纹香荼菜水溶性总黄酮各剂量组可抑制细胞自噬体的形成.与模型对照组比较,狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮100、200 mg/kg能促使细胞核固缩,碎裂、溶解,出现凋亡小体.Western blot法分析表明,与模型对照组比较,狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮三个剂量组、联合组及两个阳性药组能显著上调Bax和Caspase-3蛋白和下调Bcl-2和Survivin蛋白的表达水平,诱导移植瘤HepG2细胞发生凋亡(P＜0.01),能抑制Beclin1、Atg-5、CyclinD1、MMP-9等蛋白的表达,能促进nm23-Hl蛋白的表达(P＜0.01),抑制HepG2细胞转移,进而抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长.结论:狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮可以抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长.

目的 研究荔波产香茶菜Isodon amethystoides的化学成分.方法 选用硅胶、MCI gel CHP 20P、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等方法进行分离和纯化,通过波谱数据、理化性质结合参考文献鉴定化合物结构.结果 从荔波产香茶菜甲醇提取物中分离得到了18个化合物,分别鉴定为线纹香茶菜酸(1)、雪花草丁素(2)、4,9α-环氧-3,4-开环异海松烷-7,15-二烯-3-酸(3)、3,4-开环异海松烷-4(18),7,15-三烯-3-酸甲酯(4)、3,4-开环异海松烷-4(18),7,15-三烯-3-酸(5)、异海松烷-7,15-二烯-3-酮(6)、异海松烷-7,15-二烯-3β3-醇(7)、山姜萜醇(8)、(-)-丁香三环烷-2,9-二醇(9)、乌苏酸(10)、齐墩果酸(11)、3-表-马斯里酸(12)、7α-羟基谷甾醇(13)、β-谷甾醇(14)、豆甾醇(15)、芝麻素(16)、泡桐素乙酯(17)、邻苯二甲酸二丁酯(18).结论 化合物4为首次分离得到的天然产物,2～9、15～18为首次从香茶菜中分离到.

目的:对布依药野苏麻的二萜类成分进行研究,为其资源开发利用提供参考.方法:采用硅胶柱、Sehadex LH-20凝胶柱、MCI柱等对野苏麻的95％甲醇提取物进行分离纯化,通过波谱分析(质谱、氢谱、碳谱)技术鉴定所得化合物的结构,并与民间混用苗药"喔嘎良"的活性成分进行比对.结果 与结论:从野苏麻中分离鉴定出10个二萜类化合物,分别为细锥香茶菜乙素(化合物Ⅰ)、大锥香茶菜乙素(化合物Ⅱ)、细锥香茶菜甲素(化合物Ⅲ)、Enanderianin N(化合物Ⅳ)、细锥香茶菜丁素(化合物Ⅴ)、大锥香茶菜甲素(化合物Ⅵ)、线纹香茶菜酸(化合物Ⅶ)、Rubesanolide D(化合物Ⅷ)、Excisanin D(化合物Ⅸ)、Excisanin K(化合物Ⅹ),其中化合物Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ均为首次从该植物中分离得到;化合物Ⅶ(线纹香茶菜酸)为布依药野苏麻与苗药"喔嘎良"中共同含有的活性成分.

药材溪黄草来源于唇形科香茶菜属植物,现为《中华人民共和国药典》(2020年版)四部收载品种.但历史上溪黄草的应用较为混乱,各家对其来源植物意见相左.结合近年来国内外研究报道,对溪黄草的基源植物(线纹香茶菜、狭基线纹香茶菜、纤花线纹香茶菜及同属植物溪黄草)及其化学成分与药理作用的研究进展进行综述.溪黄草主要含有萜类、酚酸类、黄酮类、甾醇类等化学成分,具有保肝、抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗氧化、抗炎、免疫调节等多种药理作用.

目的:分析和评价溪黄草药材种质资源的表型多样性,为其种质资源的创新利用和线纹香茶菜2个变种的分类学研究提供依据.方法:观测来自23个居群的溪黄草、纤花香茶菜和狭基线纹香茶菜的9个表型性状,并进行方差分析、主成分分析和聚类分析.结果:9个表型性状在居群间存在显著(P＜0.05)或极显著差异(P＜0.01),在居群内差异不明显,其中溪黄草表型性状变异系数为7.93％ ～ 31.24％,纤花香茶菜、狭基线纹香茶菜为7.78％～29.71％;主成分分析显示,前三个主成分累积贡献率为溪黄草85.69％,纤花香茶菜和狭基线纹香茶菜 81.78％,叶长宽比和千粒重均未被提取;系统聚类将溪黄草居群聚为3类,狭基线纹香茶菜未单独聚为一类,与纤花香茶菜一起聚为5类.结论:溪黄草药材种质资源具有较丰富的表型多样性,P2、P3、P7、P8、P10、P11、P18、P19居群长势较优,可考虑从中筛选优良种质;基于表型性状多样性分析纤花香茶菜与狭基线纹香茶菜差异不明显,建议将二者合并为纤花香茶菜.

为了评价中药材溪黄草的三种基原——线纹香茶菜[Rabdosia lophanthoides(Buch.-Ham.ex D.Don)Hara]、纤花(细花)线纹香茶菜[Rabdosia lophanthoides var.graciliflora(Benth.)Hara]与溪黄草[Rabdosia serra (Maxim.)Hara]的安全性,采用SPF级昆明种(KM)小鼠分别灌服以上三种植物的提取物,对其急性毒性进行评价.三种植物提取物的最大给药剂量为每天每公斤300 g生药(约为临床人拟用剂量的1154倍),随后连续观察14 d.结果 显示,线纹香茶菜、纤花(细花)线纹香茶菜与溪黄草对小鼠体重、摄食量均无明显影响,给药组至试验结束时小鼠无死亡或明显的毒性反应.实验结果提示中药材溪黄草3种基原植物的安全性良好.