目的:观察含有Jumonji结构域的蛋白质2D(JMJD2D)在胃癌组织的表达并探讨其临床意义。方法:收集2013年1月至2014年12月期间来自中国科学院大学附属肿瘤医院(浙江省肿瘤医院)手术治疗并经病理诊断证实的133例胃腺癌标本。采用免疫组织化学法检测133例胃癌组织及其配对的癌旁正常组织中JMJD2D的表达，应用SPSS-22统计软件分析其临床意义及与预后的关系，采用比例风险回归模型(proportional hazards model，Cox模型)多因素回归分析JMJD2D蛋白表达及其他病理参数对胃癌患者预后的预测价值。结果:胃癌组织中JMJD2D的高表达率为75.9%(101/133)，显著高于癌旁正常胃组织(高表达率2.3%，3/133， χ2＝64.821， P<0.01)，差异有统计学意义。肿瘤组织中JMJD2D高表达与患者幽门螺杆菌感染状态( χ2＝22.163， P<0.01)、肿瘤分化程度( χ2＝7.022， P<0.05)、浸润深度( χ2＝5.061， P<0.05)、淋巴结转移状态( χ2＝14.123， P<0.01)、临床TNM分期( χ2＝23.194， P<0.01)显著相关，而与患者性别、肿瘤诊断时年龄、肿瘤部位和大小无相关( χ2＝0.072、1.451、2.562、1.383， P值均>0.05)。普兰-迈耶(Kaplan-Meier)生存分析显示，JMJD2D高表达的胃癌患者与正常/低表达患者中位生存时间分别为34个月和65个月，两者差异有统计学意义( P<0.05)。比例风险回归模型(proportional hazards model，Cox模型)多因素回归分析表明JMJD2D高表达是胃癌患者独立预后因素[危险比( HR)＝2.38， P<0.01]。 结论:JMJD2D在胃癌组织中高表达，且与胃癌进展及患者预后显著相关。

目的:观察肝细胞癌中组蛋白去甲基化酶含十字形结构域蛋白-3(JMJD3)和核因子-κB(NF-κB)蛋白水平的表达，探讨两者的相关性及其蛋白表达水平与多个临床病理因素的关系。方法:采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测25例新鲜肝细胞癌组织及相对应的癌旁组织中JMJD3和NF-κB信使RNA(mRNA)表达，采用免疫组织化学法检测102例肝细胞癌及相对应的癌旁组织中JMJD3和NF-κB蛋白的表达，分析其与肝细胞癌临床病理特征的关系及上述蛋白的相关性，采用生存分析法(Kaplan-Meier)法来评估JMJD3和NF-κB蛋白的异常表达与肝细胞癌患者生存期之间的关系，Cox回归模型分析JMJD3和NF-κB蛋白的表达和临床病理参数与肝细胞癌预后的关系。结果:JMJD3和NF-κB mRNA在肝细胞癌组织中的表达水平均高于癌旁组织( t＝-15.130、-15.030， P<0.05)，差异有统计学意义，肝细胞癌组织中JMJD3阳性率[87.25%(89/102)]显著高于相应癌旁组织[57.84%(59/102)， χ2＝22.153， P<0.05]，差异有统计学意义，肝细胞癌组织中NF-κB阳性率[83.33%(85/102)]显著高于相应癌旁组织[29.41%(30/102)， χ2＝55.664， P<0.05]，差异有统计学意义。JMJD3和NF-κB表达与甲胎蛋白水平、分化程度、有无脉管癌栓、淋巴结转移及TNM分期明显相关( P<0.05)，NF-κB与结节数目明显相关( χ2＝5.133， P<0.05)，差异有统计学意义。JMJD3蛋白高表达者的生存期高于低表达者( χ2＝40.568， P<0.05)，差异有统计学意义，NF-κB蛋白高表达者的生存期低于低表达者( χ2＝48.803， P<0.05)，差异有统计学意义。Spearman相关分析结果显示JMJD3与NF-κB呈正相关( r＝0.627， P<0.05)。 结论:JMJD3和NF-κB在肝细胞癌中的异常表达与肿瘤的浸润、转移及无病生存期明显相关。

目的:探讨在砷诱导肝细胞凋亡过程中，组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（H3K27me3）水平对抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2（BCL2）基因表达的影响。方法:体外培养大鼠肝细胞BRL-3A，根据砷处理因素将实验分为两部分，未染砷时分为正常、转染试剂、阴性转染、JMJD3（H3K27me3特异性去甲基化酶）小干扰RNA（siRNA）转染、EZH2（H3K27me3甲基转移酶）siRNA转染组；染砷时分为对照、砷处理、砷+阴性转染、砷+ JMJD3siRNA转染、砷+ EZH2siRNA转染组。未染砷时siRNA和转染试剂按照100 pmol ∶ 7.5 μl比例转染细胞6 h[正常组加入与转染试剂同体积的磷酸盐缓冲液（PBS）]，再换培养基培养，共48 h；染砷时同上述方法转染和培养细胞24 h，染砷各组再加入终浓度为30 μmol/L的亚砷酸钠（NaAsO 2）处理24 h（对照组加入与NaAsO 2同体积的PBS处理24 h）。采用实时无标记细胞分析（RTCA）技术动态观察染砷时细胞增殖情况；流式细胞术检测染砷时细胞的凋亡情况；蛋白免疫印迹（Western blot）法检测未染砷时和染砷时细胞JMJD3、EZH2、H3K27me3、BCL2蛋白表达水平；染色质免疫共沉淀技术检测染砷时细胞BCL2基因启动子区H3K27me3的富集水平。 结果:对照、砷处理、砷+阴性转染、砷+ JMJD3siRNA转染、砷+ EZH2siRNA转染组细胞增殖率分别为（100.00 ± 10.43）%、（12.19 ± 3.37）%、（31.86 ± 1.95）%、（24.58 ± 3.64）%、（11.53 ± 1.11）%，细胞凋亡率分别为（1.15 ± 0.04）%、（13.06 ± 1.33）%、（17.39 ± 0.22）%、（23.90 ± 1.66）%、（15.07 ± 0.88）%，组间比较差异均有统计学意义（ F = 146.50、194.30， P均< 0.001）。JMJD3siRNA转染组H3K27me3蛋白表达水平均高于正常、转染试剂、阴性转染组，EZH2siRNA转染组则相反（ P均< 0.05）；JMJD3siRNA转染组BCL2蛋白表达水平均低于正常、转染试剂、阴性转染组，EZH2siRNA转染组则相反（ P均< 0.05），而在正常、转染试剂、阴性转染组之间，H3K27me3、BCL2蛋白表达水平均未见明显改变（ P均> 0.05）。在对照、砷处理、砷+阴性转染、砷+ JMJD3siRNA转染、砷+ EZH2siRNA转染组之间，JMJD3、EZH2、H3K27me3、BCL2蛋白表达水平比较，差异均有统计学意义（ F = 26.56、7.82、9.81、31.19， P均< 0.05）。与对照组比较，砷处理组JMJD3、EZH2蛋白表达水平均较低，H3K27me3蛋白表达水平较高，同时BCL2蛋白表达水平较低（ P均< 0.05）；与砷+阴性转染组比较，砷+ JMJD3siRNA转染组JMJD3蛋白表达水平较低，砷+ EZH2siRNA转染组EZH2蛋白表达水平较低，砷+ JMJD3siRNA转染组H3K27me3蛋白表达水平较高，同时BCL2蛋白表达水平较低，而砷+ EZH2siRNA转染组则相反（ P均< 0.05）。与对照组比较，砷处理组细胞BCL2基因启动子区（CHIP1、CHIP2）H3K27me3的富集水平均较高（ P均< 0.05）。 结论:砷通过增加BCL2基因启动子区H3K27me3的富集水平，进而抑制BCL2的表达，促进肝细胞凋亡。

目的:观察组蛋白去甲基转移酶Jmjd3在先兆子痫患者中的表达水平，探讨其介导的表观修饰调控先兆子痫患者的Th1/Th2失衡的可能作用机制。方法:收集2018年1月至2019年6月河南省人民医院产科23例初产妇先兆子痫住院患者作为研究组，选取同期在该院接受分娩的19名正常孕妇作为对照组。采用逆转录即时荧光定量PCR（RT-PCR）检测先兆子痫患者和正常孕妇外周血单个核细胞（peripheral blood monocyte cells，PBMC）中组蛋白去甲基转移酶Jmjd3 mRNA水平，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测两组孕妇外周血清γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素（IL）-4的含量；RT-PCR检测先兆子痫和对照组小鼠脾脏中Jmjd3、Tbx21和Cxcr3的mRNA水平；免疫磁珠法分选出对照组和先兆子痫小鼠脾脏初始CD4 +T细胞，Western blot检测其H3K27me1和H3K27me3水平；染色质免疫共沉淀（ChIP）分析先兆子痫小鼠脾脏中H3K27me3去甲基化修饰水平。 结果:与正常孕妇相比较，先兆子痫患者PBMC中Jmjd3 mRNA水平明显升高，血清中IFN-γ水平显著升高，IL-4水平明显降低（ P<0.01）；与正常对照组小鼠相比较，先兆子痫小鼠脾脏Jmjd3 mRNA水平明显升高，且在先兆子痫小鼠中，Tbx21和Cxcr3的表达均明显升高（ P<0.01）；先兆子痫小鼠初始CD4 +T细胞H3K27me3水平明显降低（ P<0.05），H3K27me1则没有变化；ChIP分析表明，与对照组小鼠相比较，先兆子痫组小鼠CD4 +T细胞H3K27me3在Ifng启动子区的募集明显降低，而在Il4启动子区的募集明显升高（ P<0.01）。 结论:不论是在先兆子痫患者还是小鼠中，组蛋白去甲基转移酶Jmjd3相对表达水平明显上调，进而诱导Ifng启动子区的H3K27me3发生去甲基化修饰，促进初始CD4 +T细胞向Th1细胞分化发育，导致Th1/Th2失衡，这可能是促进先兆子痫发生发展的重要原因之一。

目的:探究组蛋白去甲基化酶——含Jumonji结构域蛋白3（JMJD3）在炎症牙周组织中的表达及其对牙周炎调控的潜在机制。方法:分析2022年发表在基因表达综合数据库（GEO）中牙周组织单细胞测序的结果，并收集2021年6至12月同济大学附属口腔医院牙周病科和口腔颌面外科牙周手术和拔牙术中获取的健康及牙周炎患者的牙龈样本各9例，进行免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）。构建小鼠牙周炎模型，实验分组为：健康对照+生理盐水组、丝线结扎+生理盐水组、丝线结扎+GSK-J4（JMJD3抑制剂）组。体外使用牙龈卟啉单胞菌（Pg）来源的脂多糖（LPS）（Pg-LPS）模拟牙周炎症微环境，并使用靶向Jmjd3的小干扰RNA（siRNA）、GSK-J4分别处理巨噬细胞。siRNA转染实验分组为：阴性对照序列转染（NC）组、siRNA-Jmjd3组、NC+LPS组、siRNA-Jmjd3+LPS组。抑制剂实验分组为：二甲基亚砜（DMSO）组、GSK-J4组、DMSO+LPS组、GSK-J4+LPS组。使用蛋白质免疫印迹法、免疫荧光染色等方法探索JMJD3在体内、体外环境下对巨噬细胞极化及牙周炎症的影响。结果:牙周炎患者牙龈组织的JMJD3表达（1.97±0.91）显著高于健康牙龈组织（1.00±0.33）（ t=2.45， P=0.048）。体外实验RT-qPCR结果显示，siRNA敲低JMJD3或使用GSK-J4抑制JMJD3均可促进炎症环境下巨噬细胞的M1极化，抑制M2极化：NC+LPS组精氨酸酶Ⅰ（Arg1）的表达（0.90±0.06）显著高于siRNA-Jmjd3+LPS组（0.61±0.11）（ P<0.01）；NC+LPS组白细胞介素（Il）-6、Il-1β和肿瘤坏死因子α（Tnf-α）的表达（分别为8.50±0.16、5.56±0.20、3.44±0.16）均显著低于siRNA-Jmjd3+LPS组（分别为14.63±0.48、8.55±0.10、11.72±0.58）（均 P<0.01）。DMSO+LPS组Arg1、类几丁质酶3样分子（Ym1）、Il-10的表达（分别为0.82±0.01、0.35±0.16、1.47±0.11）均显著高于GSK-J4+LPS组（分别为0.55±0.03、0.22±0.21、0.51±0.11）（均 P<0.01）；DMSO+LPS组Il-6、Il-1β、Tnf-α的表达（分别为2.03±0.13、3.63±0.14和4.06±0.03）均显著低于GSK-J4+LPS组（分别为2.69±0.16、15.04±1.15、4.36±0.10）（均 P<0.01）。体内实验结果发现，抑制JMJD3加剧了小鼠实验性牙周炎的骨丧失，增加了小鼠炎症牙周组织中巨噬细胞的M1极化，降低了M2极化。丝线结扎+生理盐水组的颊侧釉质牙骨质界至牙槽嵴顶的距离（CEJ-ABC）、腭侧CEJ-ABC及M1/M2型巨噬细胞比值［分别为（0.26±0.03）、（0.24±0.01）mm和0.35±0.10］均显著低于丝线结扎+GSK-J4组［分别为（0.34±0.04）、（0.30±0.05）mm和2.50±0.58］（ t=3.65， P=0.006； t=2.67， P=0.049； t=7.31， P=0.004）。 结论:单细胞测序及体内外实验验证JMJD3在牙周炎牙周组织中表达上调，JMJD3可能通过调控巨噬细胞极化抑制牙周炎的牙槽骨破坏，从而在牙周炎症过程中发挥保护作用。

目的:探讨组蛋白去甲基化酶含Jumonji结构域的蛋白3（Jumonji domain-containing protein D3，JMJD3）在新生儿坏死性小肠结肠炎（necrotizing enterocolitis，NEC）肠道组织中的表达情况。方法:收集对照（先天性小肠闭锁）患儿及NEC患儿手术中切除的回肠组织进行RNA测序，筛选出差异基因。对差异基因进行组蛋白甲基化修饰酶相关基因聚类分析，筛选出目的基因赖氨酸特异性去甲基化酶6B[lysine（K）-specific demethylase 6B，KDM6B]，并采用实时荧光定量聚合酶链反应扩大样本量进行验证。蛋白免疫印迹和免疫组织化学检测JMJD3以及其底物组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（trimethylation of histone H3 at lysine 27，H3K27me3）在肠道组织中的蛋白表达情况。组间比较根据数据分布特点采用 t检验或Mann-Whitney U检验。 结果:RNA测序筛查出1 481条差异基因，其中643条基因上调，838条基因下调。筛查NEC肠道组织中30种组蛋白甲基化修饰酶的表达情况，其中KDM6B在NEC样本中差异表达最显著[Log 2（fold change）=0.769 104， P=0.009 009]。实时荧光定量聚合酶链反应结果显示，与对照组相比，KDM6B在NEC肠道组织中高表达（ P<0.05）；蛋白免疫印迹和免疫组织化学结果显示JMJD3蛋白水平在NEC肠道组织中明显增高，H3K27me3蛋白水平在NEC肠道组织中降低。 结论:在NEC肠道组织中组蛋白去甲基化酶JMJD3高表达，H3K27me3低表达。JMJD3可能通过降低H3K27me3的表达水平调控NEC的发生发展。

目的:评价组蛋白去甲基化酶(JMJD3)在小鼠药物相关性急性肾损伤(AKI)中的作用。方法:雄性C57BL/6小鼠24只，8~10周龄，体重20~30 g，采用随机数字表法分为4组( n＝6)：对照组(C组)、AKI组、JMJD3抑制剂GSKJ4对照组(GSKJ4组)和GSKJ4-AKI组。腹腔注射叶酸250 mg/kg制备药物性相关AKI模型。GSKJ4-AKI组于AKI建模前1 h、GSKJ4组于相应时点，腹腔注射GSKJ4 20 mg/kg。AKI建模后72 h时，取血液标本，测定血清BUN和Cr浓度；随后处死小鼠，取肾组织，并采用HE与PAS染色法，检测肾组织病理学形态，进行肾小管损伤评分；采用TUNEL法检测肾组织凋亡细胞数，蛋白免疫印迹法检测JMJD3、Bax和cleaved caspase-3的表达，免疫组织化学法检测JMJD3、髓过氧化物酶(MPO)、F4/80、CD3的阳性细胞数及cleaved caspase-3、Bax表达，RT-PCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的mRNA表达。 结果:与C组比较，AKI组血清BUN和Cr浓度、肾小管损伤评分升高，肾组织JMJD3、MPO、F4/80和CD3的阳性细胞数增多，凋亡细胞数增多，Bax、cleaved caspase-3、JMJD3、IL-1β mRNA、TNF-α mRNA、IL-6 mRNA和MCP-1 mRNA表达上调( P<0.05)，GSKJ4组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与AKI组比较，GSKJ4-AKI组血清BUN和Cr浓度、肾小管损伤评分降低，肾组织JMJD3、MPO、F4/80和CD3的阳性细胞数减少，凋亡细胞数减少，Bax、cleaved caspase-3、JMJD3、IL-1β mRNA、TNF-α mRNA、IL-6 mRNA和MCP-1 mRNA表达下调( P<0.05)。 结论:小鼠药物相关性AKI的发生机制可能与JMJD3表达上调，进而诱导细胞凋亡及炎症反应有关。

组蛋白的共价修饰包括乙酰化、甲基化在基因表达调控上起着重要的作用. 组蛋白H3 的N端赖氨酸(Lysine,K)修饰最为多样和重要,K4(代表 4位赖氨酸)、K9 和K27 等为甲基化修饰位点,而K9、K14 和K27 等为乙酰化修饰位点. 组蛋白乙酰化修饰拥有基因激活效应,而甲基化修饰则存在位点差异[1] . 甲基化的赖氨酸的残基以及甲基化的状态(单甲基化、二甲基化、三甲基化)能够促进或者抑制基因的转录[2] . 甲基转移酶和去甲基化酶动态调控组蛋白甲基化.

目的 探讨组蛋白去甲基化酶3(JMJD3)调控SESTRIN2蛋白重组蛋白(SESN2)介导的线粒体自噬在脓毒症心肌损伤(SIMI)中的作用,并分析其机制.方法 20只SD大鼠按随机数字表法分为对照组和SIMI组,每组10只.SIMI组大鼠腹腔注射脂多糖(LPS)10 mg/kg(2mL/kg)构建脓毒症大鼠模型,对照组大鼠按2 mL/kg注射0.9％氯化钠注射液.采用HE染色检测大鼠心脏组织病理学变化,ELISA法测定大鼠血清心肌肌钙蛋白T(cTnT)、TNF-α和IL-6水平,Western blot法测定大鼠心脏组织中JMJD3和SESN2蛋白表达水平.使用LPS(10 μg/mL)处理H9C2细胞48 h,构建脓毒症细胞模型,随机分为对照组、LPS 组、LPS+JMJD3 表达的小干扰 RNA(si-JMJD3)组、LPS+si-JMJD3+SESN2 表达的小干扰 RNA(si-SESN2)组、LPS+SESN2过表达(oe-SESN2)组和LPS+oe-SESN2+JMJD3过表达(oe-JMJD3)组.细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定细胞活性,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法测定细胞凋亡水平,ELISA法测定细胞培养上清液中TNF-α和IL-6水平,Western blot法测定凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X基因(Bax)]、自噬相关蛋白[微管相关蛋白轻链3(LC3)、重组人自噬效应蛋白(Beclin1)、选择性自噬接头蛋白(p62)]及JMJD3和SESN2蛋白表达水平.结果 与对照组比较,SIMI组大鼠心脏组织心肌纤维束排列松散,部分心肌纤维断裂溶解,伴有间质水肿和炎症细胞浸润.与对照组比较,SIMI组大鼠血清中cTnT、TNF-α和IL-6水平均升高,心脏组织中JMJD3蛋白表达水平升高,而SESN2蛋白表达水平降低(均P＜0.01).与对照组比较,LPS组细胞培养上清液TNF-α和IL-6水平升高,JMJD3蛋白表达水平升高,SESN2蛋白表达水平降低,同时,细胞活性减弱,凋亡水平增强(均P＜0.05).JMJD3敲低后SESN2蛋白表达水平升高,细胞活性增强,凋亡水平减弱,同时自噬水平增强(均P＜0.05),而进一步敲低SESN2后,以上趋势发生逆转.相反,SESN2过表达后,细胞自噬水平增强,细胞活性增强,凋亡水平减弱(均P＜0.05);而进一步过表达JMJD3后,SESN2蛋白表达水平降低,同时oe-SESN2对LPS-H9C2的作用能被oe-JMJD3逆转.结论 JMJD3通过调控SESN2介导线粒体自噬,促进心肌细胞损伤和凋亡,从而促进SIMI的发展.

[目的]明确组蛋白去甲基化酶JMJD3表达对神经胶质瘤细胞上皮细胞间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程及细胞迁移能力的影响.[方法]构建U87细胞中JMJD3过表达和沉默表达的转染体系,采用Real-time PCR、Western blotting和划痕等检测手段从mRNA、蛋白和细胞功能3个层面明确JMJD3表达对神经胶质瘤U87细胞上皮和间质标志分子表达及细胞迁移能力的影响.[结果]在U87细胞中过表达JMJD3能够显著抑制上皮标志分子E-纤黏蛋白(E-cadherin),促进间质标志分子:E-纤黏蛋白、纤黏蛋白、波形蛋白(N-cadherin/Fibronectin/Vimentin)mRNA和蛋白的表达,促进胶质瘤细胞发生EMT,同时过表达JMJD3能够有效提高细胞的迁移能力;而沉默表达JMJD3表达能够有效抑制EMT过程同时降低细胞迁移能力.[结论]JMJD3表达能够促进神经胶质瘤细胞EMT过程从而提高细胞迁移能力.