目的:探讨SET结构域分支型组蛋白赖氨酸甲基转移酶1（SETDB1）基因在卵巢高级别浆液性癌（HGSOC）组织中的表达，并探讨其对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞增殖、侵袭能力的影响及其分子机制。方法:（1）收集2009年1月至2014年12月在郑州大学第一附属医院接受初次手术治疗且临床病理资料完整的90例HGSOC患者的癌组织标本，以同期收治的30例因子宫肌瘤行子宫及双侧附件切除术患者的正常卵巢组织标本为对照。应用荧光定量PCR技术、免疫组化法检测SETDB1 mRNA、蛋白在HGSOC组织、正常卵巢组织中的表达，分析SETDB1蛋白表达与HGSOC患者临床病理特征、预后的关系；（2）荧光定量PCR技术检测卵巢癌细胞系A2780、COC1、OVCAR3、SKOV3细胞中SETDB1 mRNA的表达。（3）过度表达及沉默SETDB1基因的卵巢癌细胞株的构建及筛选后，活细胞计数法检测转染后卵巢癌细胞的增殖能力，穿膜（transwell）小室实验检测转染后卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。（4）蛋白印迹（western blot）法检测转染后卵巢癌细胞中磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路关键分子［包括磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）］及上皮-间质转化（EMT）相关蛋白［包括E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、锌指转录因子（Slug）、波形蛋白（vimentin）］的表达。结果:（1）与正常卵巢组织比较，HGSOC组织中STEDB1 mRNA、蛋白的表达水平均显著增高（ P均<0.01），且STEDB1蛋白表达与HGSOC患者的手术病理分期、淋巴结转移状态均显著有关（ P均<0.05）；Kaplan-Meier法生存分析显示，SETDB1蛋白阳性表达患者的中位总生存时间显著短于SETDB1阴性表达者（分别为31.0、43.4个月， P=0.020）。（2）卵巢癌细胞系A2780、COC1、OVCAR3、SKOV3细胞中SETDB1 mRNA的表达水平，均显著高于正常卵巢细胞系T29细胞（ P均<0.01）。（3）沉默SETDB1基因表达的SKOV3-shSETDB1-1、SKOV3-shSETDB1-2细胞的增殖、侵袭和迁移能力，均显著低于其对照SKOV3-NC细胞（ P均<0.01）；过度表达SETDB1基因的OVCAR3-SETDB1细胞的增殖、侵袭和迁移能力，均显著高于其对照OVCAR3-NC细胞（ P均<0.01）。（4）与对照SKOV3-NC细胞比较，沉默SETDB1基因表达的SKOV3-shSETDB1-1、SKOV3-shSETDB1-2细胞中p-Akt、p-mTOR、N-cadherin、Slug、vimentin蛋白的表达强度均显著降低，E-cadherin蛋白的表达强度均显著增高；与对照OVCAR3-NC细胞比较，过度表达SETDB1基因的OVCAR3-pSETDB1细胞中p-Akt、p-mTOR、N-cadherin、Slug、vimentin蛋白的表达强度显著增高，E-cadherin蛋白的表达强度显著降低。 结论:SETDB1基因在HGSOC组织和卵巢癌细胞中均呈高表达，过度表达SETDB1基因可促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭，其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路及促进肿瘤细胞EMT相关。

目的:探讨长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光老化中miRNA-26a的表达情况，以及上调或下调miR-26a表达对全基因组甲基化水平、靶基因组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2（EZH2）及细胞老化的影响。方法:以10 J/cm 2 UVA照射人皮肤成纤维细胞，分别在第0、3、7天提取RNA，实时定量反转录PCR（RT-PCR）检测miR-26a的表达；通过转染miR-26a模拟物（mimic）和miR-26a抑制物（inhibitor）上调或下调miR-26a的表达，通过荧光显微镜观察和实时定量PCR检测miR-26a表达量，并评估转染效率。将人皮肤成纤维细胞分为空白对照组（不做任何处理）、UVA组（UVA照射）、miR-26a-mimic组（转染miR-26a-mimic）、UVA+miR-26a-mimic组（转染miR-26a-mimic后UVA照射）、miR-26a-inhibitor组（转染miR-26a-inhibitor）、UVA+miR-26a-inhibitor组（转染miR-26a-inhibitor后UVA照射）。第7天完成UVA照射后，收集各组细胞，采用流式细胞仪检测细胞周期，DNA甲基化定量检测试剂盒检测全基因组甲基化水平，RT-PCR检测EZH2、DNA甲基转移酶1（DNMT1）mRNA以及miR-26a的表达，Western印迹检测EZH2以及DNMT1蛋白的表达。采用单因素方差分析及LSD- t检验进行统计学分析。 结果:随着培养时间的延长，对比空白对照组，UVA照射组中miR-26a表达量逐渐增高，在UVA照射第7天后，两组间miR-26a表达水平差异有统计学意义（ t=5.295， P < 0.05）。miR-26a mimic/miR-26a inhibitor转染HSF后，细胞内均有较高的荧光表达，提示均具有较高的转染效率。流式细胞仪检测显示，空白对照组、UVA组、miR-26a-mimic组、UVA+miR-26a-mimic组、miR-26a-inhibitor组、UVA+miR-26a-inhibitor组G1期细胞比例分别为52.82% ± 2.56%、78.56% ± 4.34%、53.63% ± 3.13%、89.52% ± 4.17%、54.39% ± 3.86%、65.34% ± 4.78%，各组间差异有统计学意义（ F=46.728， P < 0.01），其中UVA组高于空白对照组（ t=8.848， P < 0.01），UVA+miR-26a-mimic高于miR-26a-mimic组（ t=11.922， P < 0.01）和UVA组（ t=3.154， P < 0.05），UVA+miR-26a-inhibitor组高于miR-26a-inhibitor组（ t=3.087， P < 0.05），但低于UVA组（ t=3.547， P < 0.05）。全基因组甲基化水平检测显示，上述各组甲基化水平（ A450值）分别为0.676 ± 0.024、0.323 ± 0.043、0.506 ± 0.035、0.169 ± 0.024、0.602 ± 0.036、0.422 ± 0.029，各组间差异有统计学意义（ F=97.402， P < 0.01），其中UVA组低于空白对照组（ P < 0.01），UVA+miR-26a-mimic低于miR-26a-mimic组（ P < 0.01）和UVA组（ P < 0.01），UVA+miR-26a-inhibitor组低于miR-26a-inhibitor组（ P < 0.01），但高于UVA组（ P < 0.05）。RT-PCR和Western印迹显示，6组细胞间EZH2、DNMT1 mRNA和蛋白表达水平差异均有统计学意义（均 P < 0.05），其中UVA组均低于空白对照组（ P < 0.05），UVA+miR-26a mimic组均低于miR-26a mimic组（ P < 0.05）和UVA组（ P < 0.05），而UVA+miR-26a inhibitor组均低于miR-26a inhibitor组（ P < 0.05），但均高于UVA组（ P < 0.05）。 结论:在UVA照射诱导皮肤成纤维细胞光老化中，miR-26a表达上调，细胞增殖活性下降，全基因组甲基化水平降低；上调miR-26a的表达，可下调其靶基因EZH2及甲基化相关基因DMNT1的表达，促进细胞光老化，反之，下调miR-26a的表达，可上调EZH2及DNMT1的表达，抑制细胞光老化。

目的:评价大鼠神经病理性痛时背根神经节(DRG)常染色质组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶2(G9a)与钠依赖激活的钾离子通道(Slack通道)的关系。方法:清洁级健康雄性SD大鼠48只，1月龄，体重100~120 g，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：假手术组(S组)、载体+假手术组(VS组)、载体+神经病理性痛组(VN组)和G9a敲减+神经病理性痛组(GN组)。S组2月龄时行假手术；VS组1月龄时于L 4和L 5DRG分别显微注射AAV5 1 μl，饲养至2月龄时行假手术；VN组和GN组1月龄时于L 4和L 5 DRG分别显微注射AAV5或AAV5-G9a CRISPR/Cas9 KO质粒1 μl，2月龄时采用脊神经节结扎法制备神经病理性痛模型。每组取6只大鼠，于DRG显微注射前(T 0)、造模前(T 1)、造模后3、5和7 d(T 2~4)时，测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。于最后1次行为学测试结束后，处死大鼠，取L 4，5节段DRG，采用Western blot法测定G9a、组蛋白H3的赖氨酸残基9二甲基化(H3K9me2)和Slack的表达。于造模后7 d时，每组取6只大鼠，培养原代DRG神经元，全细胞膜片钳技术在电压钳模式下记录DRG神经元中的Slack电流和脊髓背角浅层兴奋性突触后膜电流(mEPSCs)的振幅和频率。 结果:与S组比较，VN组T 2~4时TWL缩短，MWT降低，脊髓背角G9a和H3K9me2表达上调，Slack表达下调，DRG神经元Slack通道电流振幅和频率降低，mEPSC频率升高( P<0.05)，VS组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与VN组比较，GN组T 2~4时TWL延长，MWT升高，脊髓背角G9a和H3K9me2表达下调，Slack表达上调，DRG神经元Slack电流的振幅和频率升高，mEPSC频率降低( P<0.05)。 结论:大鼠神经病理性痛的机制与上调DRG G9a的表达，从而抑制Slack通道表达和开放有关。

目的:探讨赖氨酸甲基转移酶SET8介导AKT信号通路在调控高磷诱导的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）钙化中的作用及机制。方法:（1）选取雄性SD大鼠进行体内实验并随机分为假手术组和慢性肾衰竭血管钙化组。取胸主动脉，采用von Kossa染色检测钙化情况；免疫组化法检测SET8和Caspase-3表达情况。（2）体外实验进行原代VSMCs培养，将细胞随机分为正常组和高磷组（10 mmol/L β-甘油磷酸）。采用邻甲酚酞络合酮比色法及茜素红染色检测细胞钙化情况；流式细胞法检测细胞凋亡情况；RT-PCR和Western印迹法检测SET8、AKT和Caspase-3的表达。（3）为进一步验证SET8在VSMCs凋亡中的作用，采用脂质体转染法，分3组：SET8-短发夹RNA（shRNA）组、空质粒组和正常对照组。采用邻甲酚酞络合酮比色法及茜素红染色检测细胞钙化情况；流式细胞法检测细胞凋亡情况；RT-PCR和Western印迹法检测SET8、AKT、Caspase-3的表达。结果:（1）体内实验中，慢性肾衰竭血管钙化组的血管钙盐沉积量明显高于假手术组（ P<0.05）；免疫组化结果提示，与假手术组相比，血管钙化组SET8表达明显降低，Caspase-3表达明显升高（均 P<0.05）；相关分析显示，血管组织SET8表达水平与钙含量、Caspase-3表达呈负相关（ r=-0.948， P<0.01； r=-0.961， P<0.01）。（2）体外实验中，高磷组钙盐沉积明显高于正常组（ P<0.05）；流式细胞术检测结果显示，高磷组VSMCs的凋亡率明显高于正常组（ P<0.05）；RT-PCR和Western印迹显示，与正常组相比，高磷组SET8和AKT的mRNA和蛋白表达下降，Caspase-3的mRNA和蛋白表达升高（均 P<0.05）。（3）干扰SET8基因表达后，VSMCs钙化及凋亡率明显增加，AKT的mRNA和蛋白表达下降，Caspase-3的mRNA和蛋白表达升高（均 P<0.05）。 结论:SET8可以抑制血管钙化，其机制之一可能为通过促进AKT活化，抑制Caspase-3的表达，从而抑制VSMCs凋亡，进而参与调控高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化。

目的 阐明过表达GATA2对鸡前脂肪细胞转录表达的影响.方法 培养鸡前脂肪细胞ICP1,转染pCMV-myc-GATA2 或 pCMV-myc 质粒,Western blot 验证细胞中 GATA2过表达情况,RNA-seq研究过表达GATA2对细胞转录组表达变化,ChIP-seq研究GATA2在基因组的结合情况,Real-time PCR验证部分差异表达基因、ChIP-PCR验证GATA2对TAF3基因的集合情况.结果 转染pCMV-myc-GATA2可以在ICP1细胞过表达GATA2蛋白,过表达GATA2后,ICP1细胞中942个基因表达上调,840个基因表达下调(P＜0.05),富集分析显示差异表达基因与核糖体和线粒体的结构和功能相关(P＜0.01);GESA分析显示,过表达GATA2的ICP1细胞中 RNA聚合酶Ⅱ转录起始复合物、核糖体生物生成、丙酸代谢和氧化磷酸化相关基因集表达上调;组蛋白赖氨酸N甲基转移酶、核转录抑制复合体形成、脂肪因子和钙离子等信号通路相关基因集表达下调.ICP1细胞中ChIP-seq鉴定出2 833个GATA2结合的基因组峰,涉及2 018个基因.Motif分析显示GATA2结合(T/A)GATA模序;富集分析显示这些基因参与胚胎发育、信号传导、细胞代谢和细胞间相互作用.差异表达基因和GATA2结合基因取交集获得105个基因,富集分析显示这些基因与转录、转录后调控、细胞间相互作用、信号传导和细胞周期相关(P＜0.001).结论 GATA2可以与鸡前脂肪细胞的基因组结合调节其转录组表达模式.

目的 探究赖氨酸乙酰转移酶 8(KAT8)在结直肠癌细胞增殖过程中所扮演的角色及潜在作用机制.方法 通过TCGA数据库的RNA-seq数据分析KAT8 在结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织的表达情况;集落形成实验和CCK8 法检测KAT8 敲低细胞的增殖;利用GEO数据库对KAT8 敲低细胞与对照细胞的差异基因进行分析,并进一步进行功能通路富集分析;利用cBioPortal网站分析结直肠癌数据库中KAT8 与调控N6-甲基腺苷(m6A)相关基因的相关性;Western blot 检测KAT8 和METTL3 的蛋白表达.结果 与人正常结直肠组织相比,KAT8 在结直肠癌中高表达(P＜0.05);敲低或选择性抑制KAT8 抑制结直肠癌细胞系增殖(P＜0.05);敲低KAT8 降低结直肠癌细胞总RNA的m6A修饰水平(P＜0.05);敲低KAT8 抑制METTL3 的表达(P＜0.05);过表达METTL3 能够逆转敲低KAT8抑制的细胞增殖(P＜0.05).结论 KAT8 通过增强METTL3 介导的m6A修饰进而促进结直肠癌细胞系的增殖.

目的 研究在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肺泡上皮细胞间质转化(EMT)进程中lncSIL的作用及其相关信号通路.方法 采用 Western blot 法研究沉默 lncSIL 后对TGF-β1 诱导 EMT 进程中细胞标志蛋白 E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)表达的影响;通过RNA pulldown分析lncSIL相互作用蛋白,并检测过表达或沉默lncSIL后对其靶基因组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶(EZH2)以及下游因子P21 蛋白(P21)和细胞周期蛋白依赖性激酶 6(CDK6)表达的影响,并结合流式细胞术分析lncSIL对细胞周期进程的作用.结果 沉默lncSIL后,间质细胞标志蛋白α-SMA和Col I表达升高,肺泡上皮细胞标志蛋白E-cad表达下降;RNA pulldown实验结果显示EZH2 是与lncSIL 相互作用的靶蛋白,并且沉默 lncSIL 后EZH2 表达升高,其下游基因 P21 表达下调,CDK6 表达上调,同时S期细胞的数量显著升高;过表达lncSIL时,EZH2与CDK6 表达下调,P21 表达上调,同时S期细胞的数量明显降低.结论 lncSIL通过负向调控EZH2/P21/CDK6 信号通路抑制细胞周期进程进而抑制TGF-β1 诱导的肺泡上皮细胞向间质转化.

目的 探讨赖氨酸甲基转移酶SET8对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)向成骨样细胞分化的影响.方法 体外分离培养大鼠VSMCs,将VSMCs随机分为正常对照组(未转染)、空质粒组(转染NS-shRNA)、SET8-shRNA组.应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测SET8和调节成骨与软骨分化的关键转录因子RUNX2 mRNA和蛋白的表达水平;应用酶联免疫法检测碱性磷酸酶(ALP)活性.结果 SET8-shRNA可成功抑制VSMCs中SET8的表达;RT-PCR及Western blot结果显示,SET8-shRNA组RUNX2 mRNA和蛋白的表达较正常对照组和空质粒组明显下降(P<0.05).ALP活性测定结果显示,SET8-siRNA组ALP活性较正常对照组和空质粒组显著降低(P<0.05).结论 干扰SET8基因表达能够抑制大鼠VSMCs向成骨样细胞转分化.

[目的] hDOT1L基因在白血病发病机制中的作用和临床意义,并分析其可能的作用机理,以期揭示白血病治疗的新靶点.[方法]收集和提取非恶性血液病患者和各组白血病患者的骨髓单个核细胞(BMMNC).RT-PCR检测各组细胞内hDOT1L、HOXA9、HOXA10、MLL-AF10 (MLLT10)的mRNA表达水平.应用Western blot法检测各组细胞内hDOT 1L蛋白的表达及H3K79双甲基化蛋白表达水平,并检测各组p-MAPK、p-AKT和PI3K蛋白的表达水平.[结果]RT-PCR结果显示,急性髓系白血病(AML)组、急性淋巴细胞白血病(ALL)组及急性白血病复发(AL-relapse)组BMMNC中hDOT1L、HOXA9、HOXA10、MLL-AF10基因在mRNA水平明显高于对照组和急性白血病缓解组(AL-CR组),且差异显著(P＜0.01);AML组、ALL组及AL-relapse组组间比较及AL-CR组与对照组比较均无明显差异(P＞0.05).Western blot检测结果表明,AML组和ALL组及AL-relapse组BMMNC中hDOT1L和H3K79-me2(双甲基)蛋白表达水平及AKT、p-AKT和PI3K蛋白显著高于对照组和AL-CR组,并有统计学意义(P＜0.01);AML组和ALL组及AL-relapse组之间比较及AL-CR组与对照组比较上述蛋白表达水平均无统计学差异(P＞0.05).[结论] hDOT1L是一种新型的组蛋白赖氨酸甲基转移酶,它可能通过提高H3K79的甲基化水平,诱导其下游HOXA9、HOXA10、MLL-AF10基因的表达,及影响细胞内其他信号通路参与急性白血病的发生,并与疾病的预后息息相关;阻断此通路可能是治疗白血病的一个新思路.

目的:探讨检测肝癌组织中组蛋白第三亚基四号赖氨酸的三甲基化(H3 K4me3)蛋白的表达与肿瘤病理特点和肝癌患者生存预后的相关性.方法:免疫组化和Western-blot检测H3 K4 me3和组蛋白甲基转移酶(SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3)在肝癌组织(n=168)和细胞株中的表达.此外,实验结果还在另外一个肝癌组织芯片(n=147)中进行验证.H3K4me3表达的最佳分界点(optimal cut-point)由X-tile程序确定,患者的预后由Kaplan-meier生存曲线描述.结果:H3K4me3高表达于肝癌细胞系和肝癌组织,其高表达与肝癌尤其是早期TNM1/2期患者的较差总体生存显著相关.单因素和多因素分析均提示H3K4me3表达水平是患者预后的独立危险因素.此外,H3K4me3和SMYD3在两组肝癌组织中均存在正相关表达.结论:H3K4me3表达水平能成为肝癌患者术后生存的预测因子,其高表达可能与SMYD3有关.