目的 探讨中药经后增殖方对环磷酰胺诱导的卵巢功能不全小鼠卵巢储备功能与细胞凋亡状态的改善作用.方法 将30只雌性小鼠随机分为环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)组、环磷酰胺+经后增殖方(JHZZR)组和空白对照组,经颈椎脱臼处死后取血清及卵巢组织待测.采用ELISA方法检测血清抗苗勒氏管激素(AMH)、促卵泡生成激素(FSH)和雌二醇(E2)水平,卵巢组织HE染色后计数各级卵泡数目,同时采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)方法检测卵巢组织凋亡因子Caspase3 mRNA的表达水平,用TUNEL法检测卵巢颗粒细胞的凋亡状态.结果 与空白对照组相比,Cy组和Cy+JHZZR组小鼠卵巢内各级发育中卵泡数量均明显减少,闭锁卵泡增多.Cy+JHZZR组窦前卵泡与窦状卵泡数量较Cy组有所增加,闭锁卵泡数量减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).与Cy组比较,Cy+JHZZR组小鼠血清中AMH水平明显升高[(6.12±1.66)ng/mL vs.(4.48±1.77)ng/mL,P＜0.05],而FSH和E2水平差异无统计学意义(P＞0.05).Cy组和Cy+JHZZR组小鼠卵巢组织Caspase3 mRNA相对表达量分别为5.86±1.33和4.45±1.02,均高于空白对照组(2.89±1.10,P＜0.01),而两组间差异也有统计学意义(P＜0.05).空白对照组、Cy组和 Cy+JHZZR 组的凋亡指数(apoptosis index,AI)分别为(8.37±3.17)％、(16.85±5.46)％和(12.80±3.34)％,Cy组和Cy+JHZZR组的AI均较空白对照组明显升高,且Cy+JHZZR组的AI低于Cy组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 经后增殖方可以改善环磷酰胺诱导的卵巢功能不全小鼠卵巢储备功能,并降低卵巢细胞的凋亡状态.

目的 观察益气血法经后增殖方通过p38MAPK/CK2/IκBα/NF-κB通路对控制性超促排卵(COH)大鼠卵巢GDF9分泌及颗粒细胞(GCs)凋亡的影响.方法 建立COH大鼠模型,18只大鼠随机分为自然排卵组(NO组)、COH组、COH+经后增殖方组(COH+JHZZG组).qRT-PCR和Western blot法检测p38MAPK、CK2、IκBα、NF-κB、GDF9 mRNA和蛋白的表达水平,TUNEL法检测卵巢GCs凋亡率.结果 与NO组比较,COH组大鼠卵巢组织p38MAPK、NF-κB表达升高,CK2、IκBα、GDF9表达下降,卵巢GCs凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.01);与COH组比较,COH+JHZZG组大鼠卵巢组织p38MAPK、NF-κB表达下降,CK2、IκBα、GDF9表达升高,差异有统计学意义(P<0.01);卵巢GCs凋亡率下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论 益气血法经后增殖方通过p38MAPK/CK2/IκBα/NF-κB通路促进COH大鼠卵巢GDF9的分泌,抑制卵巢GCs的凋亡,从而提高COH卵细胞质量.

[目的]观察益气血法经后增殖方(由党参、白术、茯苓、熟地黄、白芍、当归、川芎、鹿角霜、山萸肉、菟丝子、杜仲等组成)对多囊卵巢综合征(PCOS)所致排卵障碍性不孕患者促排卵治疗中的排卵率和妊娠率的影响,探讨其治疗效果及可能的作用机制.[方法]将60例PCOS所致排卵障碍性不孕患者随机分为治疗组和对照组,每组各30例.对照组给予枸橼酸氯米芬胶囊促排卵治疗,治疗组在对照组的促排卵方案基础上于月经或孕激素撤退性出血第5天开始同时服用经后增殖方,2组患者均以治疗1个月经周期为1个疗程.观察2组患者月经第2～5天的血清雌二醇(E2)、促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、孕酮(P)等性激素水平情况以及月经第2～5天和注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)日的血清生长分化因子9(GDF9)、骨形态发生蛋白15(BMP15)水平变化情况,分析2组患者的排卵率、妊娠率和临床疗效.[结果](1)性激素水平方面:于月经第2～5天,2组患者的血清性激素E2、FSH、LH、P水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(2)血清GDF9、BMP15水平方面:于月经第2～5天和HCG日,2组患者的血清GDF9、BMP15水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(3)排卵率和妊娠率方面:治疗组的排卵率和妊娠率分别为93.33%(28/30)、26.67%(8/30),均显著高于对照组的70.00%(21/30)、13.33%(4/30),组间比较(χ2检验),差异均有统计学意义(P＜0.05).(4)疗效方面:治疗组的总有效率为93.33%(28/30),对照组为70.00%(21/30);组间比较(秩和检验),治疗组的疗效明显优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]益气血法经后增殖方能提高PCOS所致排卵障碍性不孕患者促排卵治疗中的排卵率和妊娠率,由此推断经后增殖方能提高促排卵治疗中的卵细胞质量及胚胎着床潜能.

目的 研究经后增殖方对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞Fas凋亡通路的影响,探讨中药改善卵母细胞质量的作用机制.方法 建立超排卵大鼠模型,30只大鼠随机分为空白组、阳性组和中药组.实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测大鼠卵巢组织中Fas、Fasl、Caspase-8、Caspase-3基因及蛋白的表达.结果 阳性组各基因及蛋白表达均增高,与空白组比较差异具有显著性(P<0.05).中药组各基因及蛋白表达均低于阳性组,其中Fas、Fasl、Caspase-8表达水平与阳性组相比差异具有统计学意义(P<0.05),而Caspase-3表达水平与阳性组无统计学差异(P>0.05).中药组与空白组相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 经后增殖方能抑制超排卵大鼠卵巢组织Fas、Fasl、Caspase-8、Caspase-3的表达,抑制颗粒细胞凋亡,推测Fas通路可能是经后增殖方改善卵母细胞质量的作用机制之一.

目的 观察经后增殖方含药血清对超排卵大鼠卵巢的卵丘-卵母细胞复合体(COCs)及卵丘细胞(CCs)中生长分化因子9(GDF9)及Bim表达的影响,探讨其治疗效果及作用机制.方法 制备大鼠超排卵卵巢模型,收集COCs和CCs,分别与雌性SD超排卵大鼠空白血清和经后增殖方药物血清在体外共同培养,各分3组:空白血清组(空白组)、含药血清组(对照组)、含药血清+ GDF9受体阻断剂组(实验组),共6组.24 h后收集COCs和CCs,实时荧光定量PCR检测GDF9和Bim mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测GDF9蛋白表达水平.结果 (1)对照组COCs中GDF9 mRNA表达水平明显高于空白组和实验组(P＜0.05);对照组和实验组COCs中Bim mRNA表达水平均明显低于空白组(P＜0.05);对照组COCs中GDF9蛋白表达水平明显高于空白组(P＜0.05),亦高于实验组,但差异无统计学意义(P＞0.05).(2)CCs中GDF9 mRNA表达水平在3组间的差异性比较结果与COCs中一致;对照组和实验组CCs中Bim mRNA表达水平均明显低于空白组(P＜0.05);对照组CCs中Bim mRNA表达水平明显低于实验组(P＜0.05);对照组CCs中GDF9蛋白表达水平明显高于空白组和实验组(P＜0.05).(3)对照组COCs中GDF9 mRNA表达水平明显高于CCs中(P＜0.05),其余组内COSs和CCs比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经后增殖方舍药血清能提高COCs和CCs中GDF9的表达水平,维持COCs和CCs中Bim的低水平表达,抑制细胞凋亡,促进卵泡发育;COCs较剔除卵母细胞的CCs更有利于GDF9 mRNA的表达.