目的:构建表达结核分枝杆菌( Mycobacterium tuberculosis， Mtb)潜伏期表达抗原Rv3133c，通过人群以及小鼠实验评价其免疫原性。 方法:构建重组质粒pPROEX-Rv3133c，诱导表达并纯化蛋白质，经Western blot鉴定后，用全血干扰素释放试验评价重组蛋白rRv3133c在 Mtb感染人群中的免疫原性；联合佐剂DC免疫小鼠，检测小鼠血清中rRv3133c特异性抗体分泌水平、脾细胞中抗原特异性Th1型细胞因子分泌水平以及脾细胞中多功能T细胞免疫应答水平和肺脏组织细胞因子mRNA表达水平。 结果:成功构建表达rRv3133c。rRv3133c可刺激 Mtb感染者尤其是潜伏感染者产生高水平的IFN-γ。免疫小鼠后，rRv3133c+DC组小鼠脾脏IFN-γ、TNF-α、IL-2水平，以及IFN-γ +TNF-α +CD4 +T细胞数量和肺脏组织中抗原特异性IFN-γ、TNF-α、iNOS的mRNA表达水平均高于BCG组，但低于BCG+rRv3133c+DC组；rRv3133c+DC组和BCG+rRv3133c+DC组小鼠血清中IgG2a/IgG1比值均大于1，显著高于BCG组。 结论:rRv3133c具有良好的免疫原性，可以诱发机体产生较强的Th1型免疫应答，是结核病亚单位疫苗的潜在候选靶抗原。

脊柱是骨关节结核的常发部位，临床及影像学表现不典型，需要同血管畸形、骨相关肿瘤、脊柱感染性疾病等进行鉴别诊断。本文报道了1例主诉为后颈部僵硬、疼痛的飞行人员，影像学磁共振示：颈 4-5椎体及椎体附件周围液性暗区，实验室检查示：38kD结核抗体阳性，结核特异性T细胞γ干扰素释放试验阳性，临床诊断颈椎结核。予以常规四联药物抗结核治疗后症状消失，影像学及实验室检查均提示结核治愈，患者恢复飞行工作。

γ-干扰素释放试验(IGRA)通过检测特异性抗原刺激T细胞产生的γ-干扰素来判断结核感染，弥补了PPD试验的不足，但临床中应注意其存在假阴性的情况。目前的研究显示，患者的全身状态(年龄、营养状态、等位基因和种族)，基础疾病与免疫功能(人类免疫缺陷病毒感染、糖尿病、恶性肿瘤、淋巴细胞下降)，结核的病情(病程、痰菌情况、抗结核治疗、肺部病灶范围)，检测方法及环境影响免疫功能药物的使用，吸烟等均可能造成IGRA假阴性。在实际临床工作中，需要警惕导致IGRA假阴性的各种影响因素，不可根据阴性结果轻易排除结核感染。

目的:探讨QuantiFERON-TB Gold Plus（QFT-Plus）在鉴别活动性结核病（ATB）与潜伏性结核感染（LTBI）中的潜在价值。方法:病例对照研究。2019年4至11月，使用QFT-Plus对西安市某结核定点医院108名健康志愿者及30例确诊ATB患者进行检测，分组并分析临床特征。使用流式细胞技术分析QFT-Plus新添加抗原体外刺激IFN-γ释放水平（TB2-TB1）与ATB患者外周血T淋巴细胞亚群分布的关系。以QFT-Plus阳性志愿者为LTBI组，确诊ATB患者为ATB组，使用受试者工作曲线（ROC）评价TB2-TB1鉴别诊断ATB与LTBI两组人群的潜在价值。结果:QFT-Plus TB2-TB1水平与ATB患者CD8+T细胞在外周血T淋巴细胞中所占比例呈正相关（ r=0.586， P=0.004），与CD4+T细胞所占比例及CD4/CD8比值呈负相关（ r=-0.511， P=0.015及 r=-0.520， P=0.013）。ATB组外周血TB2-TB1水平[0.47（0.12，1.17）IU/ml]明显高于LTBI组[0.01（-0.08，0.22）IU/ml]，差异有统计学意义（ U=233.5， P<0.001）。QFT-Plus TB2-TB1水平能有效区分ATB患者和LTBI人群，ROC曲线下面积（AUC）为0.771（95 %CI=0.653~0.889， P<0.001）。 结论:QFT-Plus抗原刺激CD8+T细胞免疫应答产生的IFN-γ水平（TB2-TB1）具有鉴别ATB与LTBI的潜在价值。

目的:评价以干扰素诱导蛋白-10（IP-10）为靶标的新型结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测技术，即结核感染T细胞检测（PCR荧光探针法，简称IP-10.TB）在结核病辅助诊断中的性能，及该检测技术与结核感染T细胞斑点检测（T-SPOT.TB）技术的一致性。方法:2018年3月至2019年11月，在首都医科大学附属北京胸科医院前瞻性纳入疑似结核病患者，并募集结核分枝杆菌低感染风险人群。所有入组者同时行外周血IP-10.TB检测和T-SPOT.TB检测，受试者操作特征曲线计算两种检测技术的诊断价值，两种检测技术的一致性分析采用kappa检验，IP-10相对表达量和释放γ-干扰素的斑点形成细胞数量的相关性分析采用Pearson检验。结果:纳入结核病患者235例、非结核病患者110例、结核分枝杆菌低感染风险人群153例进行最终分析。IP-10.TB检测（3/498，0.60%）和T-SPOT.TB检测（6/498，1.21%）获得的不确定结果比例差异无统计学意义（ P = 0.32）。在489例有效检测标本中，IP-10.TB检测的敏感度和特异度分别为91.3%（95% CI 86.8% ~94.6%）和81.1%（95% CI 75.8% ~85.7%），其中结核分枝杆菌低感染风险人群中的诊断特异度为98.0%（95% CI 94.4% ~99.6%）；T-SPOT.TB检测的敏感度和特异度分别为93.0%（95% CI 88.9% ~96.0%）和83.8%（95% CI 78.7% ~88.1%），其中结核分枝杆菌低感染风险人群中的诊断特异度为100%（95% CI 97.6% ~100.0%）。两种检测技术的诊断敏感度和特异度差异均无统计学意义（ P>0.05）。两种检测技术的阳性符合率为91.0%（95% CI 87.5% ~94.5%），阴性符合率为88.9%（95% CI 84.9% ~92.9%），总符合率为90.0%（95% CI 87.3% ~92.6%），一致性检验kappa值为0.80（95% CI 0.75 ~0.85， P<0.001）。 结论:IP-10.TB检测具有与T-SPOT.TB检测一致的诊断性能，可用于结核病辅助诊断。

目的 评价重组结核杆菌融合蛋白皮肤试验(EC-ST)筛查艾滋病病毒感染者和艾滋病患者(HIV/AIDS)结核分枝杆菌潜伏感染(LTBI)的效果,为EC-ST筛查HIV/AIDS病例LTBI的适用性提供依据.方法 于2023年4-6月,选择江苏省扬州市在管在治的HIV/AIDS病例为研究对象,通过问卷调查收集基本资料,分别采用EC-ST和γ-干扰素释放试验(IGRA)筛查LTBI.以IGRA结果为诊断标准,分析EC-ST筛查阳性率、灵敏度、特异度和一致率,以及CD4+T淋巴细胞(CD4)计数对EC-ST筛查效果的影响.结果 纳入HIV/AIDS病例523例,其中男性458例,占87.57%;女性65例,占12.43%;年龄M(QR)为48.00(21.00)岁.EC-ST阳性率为7.27%,IGRA阳性率为7.46%,差异无统计学意义(P>0.05).两种方法的一致率为94.84%,Kappa值为0.621(95%CI:0.489～0.752,P＜0.05);EC-ST的灵敏度为64.10%,特异度为97.31%.CD4计数<500和≥500个/μL组比较,两种方法的一致率分别为95.32%和94.44%,Kappa值分别为0.568和0.650(均P＜0.05),EC-ST阳性率、灵敏度和特异度差异无统计学意义(均P>0.05);CD4计数<200和≥200个/μL组比较,两种方法的一致率分别为96.55%和94.62%,Kappa值分别为0.648和0.619(均P＜0.05),EC-ST阳性率、灵敏度和特异度差异无统计学意义(均P>0.05).结论 EC-ST筛查HIV/AIDS病例LTBI的效果与IGRA存在一致性,且不受CD4计数水平的影响.

目的 探讨结核分枝杆菌(MTB)游离DNA(cfDNA)检测技术在肺外结核诊断中的应用价值.方法 选取2021年7月至2022年12月该院收治的高度疑似肺外结核患者266例作为研究对象,根据临床诊断结果,分为肺外结核组117例和非结核组149例.所有患者均采集脑脊液、胸腔积液、尿液及血液标本,并同时进行MTB cfDNA检测、结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测(GeneXpert MTB/RIF)、涂片抗酸染色及血液标本结核感染T细胞γ干扰素释放试验(TB-IGRA).通过分析4种检测方法的效能指标评估MTB cfDNA检测技术在肺外结核病诊断中的临床价值.结果 MTB cfDNA检测法对脑脊液、胸腔积液、尿液中 MTB的检出率均显著高于涂片抗酸染色(χ2=5.714、9.289、9.226,P=0.017、0.002、0.002).虽然MTB cfDNA检测法对脑脊液、尿液中 MTB的检出率高于GeneXpert MTB/RIF,但差异无统计学意义(χ2=0.143,P=0.705;χ2=0.648,P=0.421);MTB cfDNA检测法对胸腔积液中 MTB的检出率显著高于GeneXpert MTB/RIF(χ2=4.222,P=0.040).在肺外结核组,MTB cfDNA检测法的 MTB检出率为26.50%(31/117),显著高于GeneXpert MTB/RIF[15.38%(18/117)]和涂片抗酸染色[3.42%(4/117)],差异均有统计学意义(χ2=4.362,P=0.037;χ2=24.492,P<0.05);而TB-IGRA的 MTB检出率为72.65%(85/117),显著高于 MTB cfDNA检测(χ2=49.850,P<0.001).MTB cfDNA检测法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为26.50%、100.00%、100.00%、63.40%,其灵敏度显著高于GeneXpert MTB/RIF(15.38%)和涂片抗酸染色(3.42%),但低于TB-IGRA(72.65%),差异均有统计学意义(P<0.05).结论 MTB cfDNA检测在肺外结核诊断中具有较高的灵敏度及特异度,故MTB cfDNA检测在肺外结核诊断中具有较好的应用前景.

目的 筛选并验证主要组织相容性复合物-Ⅰ (MHC-Ⅰ)限制性结核抗原肽作为结核感染γ干扰素释放测定(IGRA)试剂在HIV感染人群结核诊断中的临床应用价值.方法 以RD区编码蛋白为候选抗原,利用计算机软件预测与HIV感染人群MHC-Ⅰ高频分子高度亲和的CD8+T淋巴细胞表位,人工合成含有CD8+T淋巴细胞表位的多肽进行体外筛选试验,用筛选所得混合多肽池为IGRA试剂,与相对分子质量为6 000的早期分泌抗原靶(ESAT-6)和相对分子质量为10 000的培养滤液蛋白(CFP-10)比较,在HIV感染人群中的灵敏度和特异度.结果 最终获得8个重叠多肽池,Rv0222176-191、Rv1980c122-138、Rv1985c105-120、Rv3425141-165、Rv3873133-151、Rv3873158-166、Rv387878 86和Rv3879c673-690,可刺激结核患者外周血CD8+T淋巴细胞产生γ干扰素,但对健康对照PBMC无刺激效应.在检测25例结核分枝杆菌合并HIV感染者血样时,由这8个重叠多肽池混合而成的IGRA刺激剂(CP)的灵敏度与rESAT 6/CFP10 (CE)的灵敏度均较低(68％比48％,x2=2.052,P=0.152),但二者共同作为IGRA刺激剂(CP+CE)时灵敏度达92％,显著高于rESAT6/CFP10(x2=11.523,P＜0.01),且不影响特异度.结论 筛选出来的含CD8表位的RD区合成肽可提高IGRA试剂盒检测HIV感染/艾滋病患者的灵敏度,进而提高该人群的结核病检出率.

患者女,52岁,因双眼先后肿胀伴疼痛2个月余于2015年9月24日于我院眼科就诊. 患者于2015年7月无明显诱因突然出现左眼肿胀伴疼痛,8月右眼出现相似症状,门诊以"双眼眶多发肿物"收入院. 患者否认全身病史,无长期用药及遗传病史. 既往于2013年及2014年发生下肢"皮肤过敏",具体治疗不详. 眼科检查:双眼视力矫正0.8;眼压:右眼19 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),左眼15.5 mmHg;左眼外斜约15 °,左眼外转及右眼上转受限;双眼睑轻度肿胀伴下垂,平视压迫额肌后右眼上睑缘遮蔽上方角膜约5 mm,左眼上睑缘遮蔽上方角膜约4 mm(图1),无眼睑退缩、迟落现象;双眼上下睑可触及多个结节样肿物,质地中硬,边界清晰,与眼睑皮肤及眼球无粘连;双眼球突出,Hertel眼压突出度计测量(正常范围为12～14 mm):右眼22 mm,左眼25 mm;双眼结膜充血、水肿,以穹窿部为著,角膜透明,前房清,余未见明显异常;眼眶CT:双侧眶隔前眼球周围弥漫性增厚软组织影,多考虑为炎性假瘤;双眼磁共振成像( MRI):双侧上下睑内(泪腺区)异常软组织影,考虑良性病变,血管瘤及炎性假瘤可能(图2);眼部B超:双眼上方眶内低回声肿物:右眼肿物大小23 .7 mm ×22 .8 mm,左眼肿物大小22.0 mm ×17.1 mm,边界不清,内回声欠均匀,双眼眼外肌增粗,回声不均,左眼球后可见不规则形低回声区;实验室检查:抗核抗体1:32阳性;类风湿因子20.9 kU/L;血常规、自身抗体、免疫五项、甲状腺功能五项、红细胞沉降率、抗中性粒细胞胞质抗体均在正常范围,梅毒、艾滋病病毒( HIV)、γ干扰素释放结核感染T细胞斑点试验( T-Spot )均为阴性;胸部薄层CT:肺纹理增多、紊乱,见散在小斑片状、结节状高密度影,边界模糊;纵隔结构清楚,纵隔及双肺门见多发肿大淋巴结(图3);磁共振全身弥散加权成像:纵隔及双侧肺门内多发肿大淋巴结,双侧腋窝内,腹腔肠系膜根部多发小淋巴结,均考虑反应增生型淋巴结;请相关科室会诊,考虑炎性假瘤或结缔组织病可能性大,遂行左眼眶肿物部分切除术送病检,术中于左眼眶上方充分暴露肿物并取出包块,包膜较完整,表面光滑,大小1.3 cm ×1.0 cm ×0.3 cm.

目的 探讨胸腔积液行γ-干扰素释放试验(IGRA )对结核性胸膜炎临床诊断价值.方法 选取甘孜州人民医院2016年6月至2017年6月收治的结核性胸膜炎患者68例为研究对象(结核组) ,另选择同期肺炎性胸膜炎患者70例(炎性组) 、恶性肿瘤患者70例(恶性组)作为对照,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA )行胸腔积液的结核感染T细胞γ-干扰素释放试验(TB-IGRA )检测,同时对结核组患者行外周全血IGRA 检测,收集数据并进行统计学分析.结果 结核组胸腔积液结核分枝杆菌γ-干扰素体外释放试验(TB-IGRA )检测干扰素-γ(IFN-γ)浓度[179 .3(158 .1～276 .2)ng/L]显著高于炎性组患者胸腔积液的IFN-γ浓度[86 .7(55 .1～162 .2)ng/L]及恶性组患者胸腔积液的IFN-γ浓度[92 .7(48 .1～178 .3)ng/L] ,差异有统计学意义(P＜0 .05) ;外周全血 TB-IGRA检测IFN-γ浓度显著低于胸腔积液,差异有统计学意义(P＝0 .012) ;胸腔积液 TB-IGRA诊断结核性胸膜炎的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均明显高于外周全血,差异有统计学意义(P＜0 .05) ;胸腔积液TB-IGRA诊断核性胸膜炎的ROC曲线下面积高于外周全血.结论 胸腔积液 TB-IGRA 是诊断结核性胸膜炎重要的实验室指标,其诊断效率高于外周全血TB-IGRA .