柑橘黄龙病(citrus Huanglongbing,HLB)是柑橘产业健康长久发展的重大威胁.原生生物是微生物家庭的重要一员,在维护植物健康中起着不可估量的作用.本研究分析了健康与患黄龙病柑橘根际土原生生物多样性和群落结构,探究了影响原生生物群落的关键土壤化学因子.结果表明,纤毛虫门(Ciliophora)、绿藻门(Chlorophyta)、丝足虫门(Cercozoa)是健康与患黄龙病柑橘根际土的优势类群.黄龙病的发生不仅造成根际土壤中原生生物群落多样性显著降低,还导致土壤化学指标中总氮、总磷、碱解氮、速效磷和有机质含量及pH值均有所降低.RDA分析表明,Protosteliida、硅藻门(Diatomea)、隐藻门(Cryptophyceae)和叶足亚门(Heterolobosea)与速效磷呈正相关;Protalveolata与碱解氮和pH呈正相关;丝足虫门、MAST-12、顶复门(Apicomplexa)和Schizoplasmodiida与各项化学指标均呈显著负相关.相关性分析表明,黄龙病菌与捕食型和光营养型原生生物呈显著负相关.总体而言,柑橘黄龙病菌侵染引发土壤化学特性变化,显著改变了根际区域原生生物的多样性与结构,土壤有机质、总氮和pH是影响原生生物结构的关键因子.本研究有助于了解患黄龙病对柑橘根际土原生生物群落结构、多样性和土壤化学性质的影响,为柑橘黄龙病的绿色防控提供参考.

目的:探讨巨噬细胞为适应肿瘤微环境(tumor micro-environment，TME)需要而在其自身极化层面上发生谱系变化模型的特征，为进一步研究TME中巨噬细胞的可塑性提供参考。方法:取绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)转基因并已建成近交系的Foxn1 nu.B6-CAG-EGFP/SU裸小鼠骨髓细胞，分别在巨噬细胞集落刺激因子1(colony-stimulating factor 1，CSF-1)、IFN-γ＋LPS、IL-4诱导下，培养出M0、M1和M2亚型，倒置荧光显微镜观察GFP。免疫细胞化学染色法检测巨噬细胞标志蛋白和极化蛋白，并进一步与人脑胶质瘤干细胞SU3共培养。 结果:倒置荧光显微镜下，原始骨髓细胞和条件培养基培养出的M0、M1和M2都发出强烈的绿色荧光。瑞氏-吉姆萨(Wright-Giemsa)染色后，普通显微镜下能观察到巨噬细胞固有的可塑性。免疫细胞化学染色检测CD11C和CD206标志蛋白表达都呈阳性，CD68只在M1巨噬细胞上为弱阳性，CSF-1和CSF-1R在各亚型细胞上都呈强阳性。在共培养的干细胞球体中观察到了绿色荧光细胞浸润，并发生了吞噬反应。结论:本研究建立了绿色荧光裸小鼠的髓源性巨噬细胞谱系模型，包含M0、M1和M2亚型，都有巨噬细胞固有的可塑性，表达共同的标志蛋白和极化相关蛋白，具有巨噬细胞固有的吞噬功能，可用于与肿瘤细胞之间相生相克表征的研究，特别是需要示踪研究时，可通过巨噬细胞发出的绿色荧光进行识别。

目的:通过化学遗传学技术构建胰升糖素样肽1(GLP-1)神经元可控性模型大鼠，并观察GLP-1神经元兴奋性的变化对食欲的调控作用。方法:将15只大鼠分为绿色荧光蛋白(GFP)组、HM3D组和HM4D组，每组5只。分别在3组大鼠的孤束核区域注射不同组合的腺相关病毒(rAAV)，GFP组在孤束核区域注射rAAV-GLP-1-cre和rAAV-GFP-dio；HM3D组在孤束核区域注射rAAV-GLP-1-cre和rAAV-HM3D-mCherry-dio；HM4D组在孤束核区域注射rAAV-GLP-1-cre和rAAV-HM4D-mCherry-dio。通过观察腹腔注射不同剂量N-氧化氯氮平(CNO)后大鼠的摄食行为和体重变化来筛选其最佳剂量。通过与腹腔注射生理盐水进行比较来确认GLP-1神经元的可调控性。观察大鼠处死前30 min注射CNO后大鼠孤束核区域GLP-1神经元的激活数量及下丘脑POMC神经元的表达。结果:各组大鼠孤束核区域内GLP-1神经元均成功被标记，CNO注射剂量为1mg/kg时，HM3D组大鼠摄食减少( P＝0.021)，而HM4D组大鼠摄食增加( P＝0.002)。而注射剂量为0.5 mg/kg和3 mg/kg时均未出现此效应。免疫荧光结果显示，HM3D组孤束核中GLP-1神经元的兴奋性高于GFP组( P＝0.022)，GFP组高于HM4D组( P＝0.049)。腹腔注射CNO后HM3D组大鼠孤束核区域内的GLP-1神经元及下丘脑的POMC神经元表达也高于HM4D组( P＝0.003)。 结论:通过化学遗传学技术在大鼠孤束核内注射不同组合的rAAV能够成功建立GLP-1神经元可控性模型大鼠。1 mg/kg的CNO剂量能够有效激活或抑制该神经元，从而产生调控食欲的效应。

目的:探讨不同黑色素处理方法在不同程度黑色素含量黑色素瘤辅助诊断中的应用价值，以提高HE和免疫组织化学（IHC）染色质量，保证诊断的准确性。方法:运用脱黑色素法和异色染色法（AEC显色法和Giemsa双染法）对15例黑色素瘤组织（中少量黑色素组织10例，多量黑色素组织5例）进行黑色素处理，然后进行HE和IHC染色，对比观察，筛选出最佳黑色素处理方法。IHC抗体为鉴别诊断中常用的Melan A、HMB45。结果:（1）HE：0.25%高锰酸钾氧化20 min脱黑色素HE染色评分高，与0.1%、0.5%高锰酸钾组差异具有统计学意义（ P<0.05）。（2）IHC：对照组：黑色素未处理，呈棕黑色与DAB棕黄色难以区分。脱黑色素法：高锰酸钾法、改良高锰酸钾法和H 2O 2法，黑色素去除基本干净，但由于强氧化作用抗原丢失致染色减弱，部分存在脱片现象。异色染色法：Giemsa双染法将黑色素染成墨绿色，与肿瘤细胞对比明显，便于区分。AEC显色法肿瘤细胞呈红色可与黑色素区分，但染片不能长期保存。Melan A、HMB45在高锰酸钾法、改良高锰酸钾法、H 2O 2法、AEC显色法、Giemsa双染法和对照组评分差异显著，具有统计学意义（ P<0.05）。两两比较后发现，Giemsa双染法、AEC显色法和改良高锰酸钾法评分高于高锰酸钾法和对照组，差异均具有统计学意义（ P<0.05）。在中少量黑色素组织中，Melan A、HMB45在Giemsa双染法中评分显著高于改良高锰酸钾法，差异均具有统计学意义（ P<0.05）。但在多量黑色素组织中，改良高锰酸钾法评分高于Giemsa双染法，HMB45评分差异具有统计学意义（ P<0.05）。 结论:Giemsa双染法，染色清晰，对比明显，优于其他黑色素处理方法。但在不同黑色素含量组织中，Giemsa双染法适合于中少量黑色素病例；而在多量黑色素组织中，因黑色素与肿瘤细胞互相叠加区域多，不易分辨，推荐改良高锰酸钾法。

目的:探讨宫颈孤立性髓系肉瘤的临床病理特征、诊断及鉴别诊断。方法:收集2015—2021年南京医科大学第一附属医院病理科诊断的宫颈孤立性髓系肉瘤3例，观察组织病理学形态、免疫组织化学特征，并复习相关文献。结果:3例女性患者，年龄分别为68、44、66岁。临床表现均为阴道不规则出血。肉眼于颈管见浅绿色病灶（例2）。镜下肿瘤呈弥漫性浸润性生长，细胞间黏附性差，部分呈单行线状排列，肿瘤细胞形态单一，小至中等大小，胞质稀少，核染色质细腻，部分细胞核折叠、扭曲，核分裂象少见，例2、例3肿瘤细胞间可见散在分布的不成熟嗜酸性粒细胞。免疫组织化学肿瘤细胞均阳性表达髓过氧化物酶、CD43、溶菌酶、CD117、CD99。例1、例3分别于确诊后25个月、5个月死亡，例2确诊后随访20个月，一般情况尚可。结论:宫颈孤立性髓系肉瘤罕见，需结合组织形态、免疫组织化学、骨髓及外周血情况综合诊断。

目的:通过对富含黑色素的肿瘤染色方法进行改进，探索一种新的非脱色素的黑色素肿瘤免疫组织化学染色方法，以提高免疫组织化学染色质量。方法:对5例含黑色素丰富的黑色素肿瘤进行5种不同方法染色，包括3种当前使用的染色方法及改进的硫酸亚铁特殊染色与免疫组织化学双重染色；染色抗体包括鉴别诊断中常用的Ki-67、Melan A、广谱细胞角蛋白（CKpan）；比较上述抗体经5种不同方法染色的效果。结果:未脱色素组的染色结果因黑色素与二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）染色结果互相重叠，难以区分；高锰酸钾脱色素组由于氧化的作用，导致组织易脱片、抗原丢失致染色弱等问题；3-氨基-9-乙基咔唑（3-amino-9-ethylcarbazole，AEC）染色虽然能较好区分黑色素与肿瘤细胞染色，但染色较弱，且不利于长期保存；硫酸亚铁染色与免疫组织化学双重染色能很好地将肿瘤细胞染成棕黄色、黑色素染成墨绿色，既不会导致抗原丢失，又便于区分。结论:硫酸亚铁特殊染色与免疫组织化学双重染色能很好地将肿瘤中黑色素与肿瘤细胞的DAB显色结果区分开来，且不影响染色强度，显著优于现有的黑色素肿瘤免疫组织化学处理方法。

27岁，G 1P 0，平素月经规律。现孕17周，孕期体健，无化学物质、农药、放射性物质、毒物等接触史，超声显示胎儿透明隔腔显示不清，左侧侧脑室呈"泪滴状"，前角宽约5 mm，后角宽约10 mm，右侧侧脑室后角宽约9 mm，肝内见数枚强回声。因唐氏筛查提示胎儿18三体高风险(1/114)于2023年4月11日至衢州市妇幼保健院产前诊断中心咨询。孕妇夫妇系非近亲结婚，双方智力均未见异常，均无遗传病家族史。孕妇符合产前诊断指征，在超声引导下经腹羊膜腔穿刺术无菌抽取羊水样品30 mL，其中25 mL用于常规染色体核型分析，5 mL用于染色体微阵列分析(chromosomal microarray analysis，CMA)。胎儿羊水染色体核型分析结果为45，X[46]/46，X＋mar[59](图1)，孕妇夫妇外周血染色体核型均正常，该异常染色体源于新发变异，但由于分辨率较低，无法分辨mar染色体类型。胎儿羊水CMA检测结果详见图2和表1，推测mar染色体为环状X染色体。进一步应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，FISH)进行验证[X染色体探针应用FITC直接标记的着丝粒特异探针(DXZ1)(Xp11.1-q11.1)，X染色体显示绿色荧光信号](图3)，综合核型、CMA、FISH结果，提示胎儿异常微小环状染色体源于X染色体，产前诊断该胎儿为环状X染色体嵌合型Turner综合征(Turner syndrome，TS)。孕妇经遗传咨询后，于孕25周选择终止妊娠，并拒绝对胎儿进一步行遗传学检测。本研究通过了衢州市妇幼保健院医学伦理委员会的审查(伦理号：KY-2023第11号)，孕妇夫妇均已签署临床研究知情同意书。

目的:探讨不同的特殊染色方法在分泌型脑膜瘤诊断及鉴别诊断中的应用。方法:收集35例分泌型脑膜瘤与5例含小球样胶原横切面的非分泌型脑膜瘤存档病例，选取典型区域制作成组织芯片，进行特殊染色以及免疫组织化学染色。结果:分泌型脑膜瘤在镜下的结构特点为灶性上皮分化，上皮性微腺腔内含有嗜酸性玻璃样包涵体即嗜酸性分泌小体是诊断中的特异性特征。35例分泌型脑膜瘤样本的染色结果中，分泌小体过碘酸雪夫（PAS）染色强阳性，并且可以抵抗淀粉酶消化，使淀粉酶消化后PAS（D-PAS）染色呈强阳性且对比更强，阿辛蓝、黏液卡红、胶体铁、六胺银染色均呈阳性至强阳性不等，Van Gieson染色结果呈黄红色，Masson染色结果呈红色。免疫组织化学显示癌胚抗原及上皮细胞膜抗原呈不同程度的阳性反应，广谱细胞角蛋白及SSTR2呈阳性反应。而非分泌型脑膜瘤样本中，形似分泌小体的结构，其PAS、D-PAS及六胺银染色呈强阳性，阿辛蓝、黏液卡红及胶体铁染色呈阴性，Van Gieson染色结果呈红色而Masson染色结果呈绿色，证实该结构为胶原组织。结论:在分泌型脑膜瘤的组织病理学诊断及鉴别诊断中，PAS染色结合D-PAS染色、六胺银和Masson染色是识别诊断分泌小体的重要特殊染色组合。

目的:分析朊蛋白在乳头状甲状腺癌组织中的表达及与相关临床因素的关系。方法:分别收集60例经病理确诊的乳头状甲状腺癌以及60例甲状腺良性病变患者标本，应用免疫组织化学方法、免疫印迹方法及免疫荧光方法对患者样本中的朊蛋白进行检测并进行分析，同时对朊蛋白的表达与患者相关临床因素的关系之间进行统计学分析。结果:免疫组织化学检测显示乳头状甲状腺癌组织朊蛋白阳性高于甲状腺良性病变组织( χ2＝36.310、 P<0.001)、免疫印迹以及免疫荧光的方法均显示朊蛋白在乳头状甲状腺癌组织中的表达明显高于甲状腺良性病变患者[免疫印迹：(1.288±0.153)U/L比(0.667±0.036)U/L， t＝6.855， P<0.01；免疫荧光：[绿色荧光，20X：(12.911±1.947)U/L比(36.322±3.797)U/L， t＝9.502， P<0.001；红色荧光，20X：(6.259±2.062)U/L比(28.229±2.611)U/L， t＝11.437， P<0.001]；并且朊蛋白在临床III级乳头状甲状腺癌组织中的表达明显高于I期及II期的患者，并均具有统计学差异(I期比III期： χ2＝6.301、 P<0.05；II期比III期： χ2＝5.683、 P<0.05)；与是否具有淋巴转移无相关性，与患者的年龄、性别均无统计学差异。 结论:朊蛋白在乳头状甲状腺癌中的表达增加，并且与肿瘤的临床分期具有相关性，该研究为朊蛋白作为乳头状甲状腺癌靶向诊断及治疗的分子标记奠定了实验基础。

目的:探讨抑制腺苷激酶表达的间充质干细胞(ADK －-MSCs)脑内移植对氯化锂-匹罗卡品模型癫痫发作和海马神经元损伤的影响。 方法:利用包含抑制腺苷激酶表达的慢病毒载体转染小鼠骨髓间充质干细胞，制作抑制腺苷激酶表达的间充质干细胞(ADK －-MSCs)，检测其腺苷分泌量，将其移植入准备进行氯化锂-匹罗卡品造模的小鼠海马区。实验分组对照组，氯化锂-匹罗卡品造模组TLE组，和ADK －-MSCs移植后氯化锂-匹罗卡品造模组ADK －-MSCs组。造模28 d后，使用视频脑电图监测造模后自发性癫痫发作。使用尼氏染色和活性半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3免疫组织化学评估海马神经元的损伤和凋亡。造模45 d后，观察移植ADK －-MSCs细胞的存活情况。两组间比较采用 t检验。 结果:1×10 5个ADK －-MSCs细胞上清中的腺苷浓度为12.1 ng/ml。ADK －-MSCs组自发性癫痫发作频率为(8.20±2.38)次/周，明显低于TLE组[(16.40±3.20)次/周， t＝4.584， P<0.01]。尼氏染色显示400倍放大视野中ADK －-MSCs组CA1区存活神经元为(91.00±6.51)个，明显高于TLE组[(71.80±5.06)个， t＝5.199， P<0.001]；CA3区存活神经元ADK －-MSCs组[(64.20±7.98)个]明显高于TLE组[(45.75±7.63)个， t＝3.511， P<0.01]。活性Caspase-3免疫染色显示ADK －-MSCs组海马锥体神经元阳性细胞明显低于TLE组，蛋白质印迹法(Western blot)分析证实ADK －-MSCs组活性Caspase-3蛋白表达明显低于TLE组( n＝3， t＝4.302， P<0.05)。造模45 d后，通过荧光显微镜可观察到海马区存活的绿色荧光蛋白(GFP)阳性绿色荧光ADK －-MSCs细胞。 结论:抑制ADK表达的间充质干细胞脑内移植在氯化锂-匹罗卡品颞叶癫痫模型中具有抗癫痫发作和减轻神经损伤的作用。