目的:分析河北省保定市1起人间布鲁菌病（简称布病）聚集性疫情的流行病学和分离菌株遗传学特征，为布病疫情防控提供科学依据。方法:采用虎红平板凝集试验和试管凝集试验对2018年保定市1起人间布病疫情中的高危人群（ n=22）进行布鲁菌抗体检测；对布病患者（ n=3）血液进行培养，对分离出的菌株进行传统法鉴定，运用多位点可变数目串联重复序列分析（MLVA）和多位点序列分析（MLST）方法分析菌株的遗传学特征。 结果:高危人群血清布鲁菌抗体阳性率为4.55%（1/22）。3名患者血培养均检出布鲁菌可疑菌株（菌株编号：BDY-1、BDY-2、BDY-3），并鉴定为羊种生物3型布鲁菌。MLVA结果显示，BDY-1与BDY-2菌株是同一基因型，BDY-3菌株在Bruce04和Bruce16位点分别增加了2个串联重复序列，在Bruce30位点少了3个串联重复序列，3株菌株panel 1（MLVA-8）基因型为42，panel 1 + panel 2A（MLVA-11）基因型为116，均属于"东地中海组"，且与羊种生物3型布鲁菌聚类最近。MLST分析显示，3株菌株均为ST8型。结论:该起疫情的病原菌是羊种生物3型布鲁菌。今后保定市布病防控工作应加强高危人群的健康教育和行为干预。

目的:分析山西省晋中市人间布鲁氏菌病（布病）疫情动态及流行特点，为制定防控措施提供科学依据。方法:收集2013-2020年"中国疾病预防控制信息系统"布病疫情数据和晋中市历年布病防控监测资料，描述性分析晋中市布病流行特征及血清学与病原学监测结果。结果:2013-2020年晋中市累计报告布病病例5 235例，年均发病率为19.60/10万，各年发病率比较差异有统计学意义（χ 2 = 561.09， P < 0.001）。报告病例数最多的地区为平遥县（903例），发病率最高的地区为榆社县（59.78/10万）。历年各月均有发病，季节发病明显，发病高峰为3-7月份，占病例总数的60.50%（3 167/5 235）。人群分布以男性、20~60岁、农民为主，分别占81.07%（4 244/5 235）、85.06%（4 453/5 235）、81.34%（4 258/5 235）。流行病学调查高危职业人群33 522人，血清学检查24 544人，血清学阳性率为4.45%（1 091/24 544）；病原学培养样本263份，检出布鲁氏菌52株，检出率为19.77%，均为羊种3型。 结论:近年来晋中市布病疫情呈散发态势，发病有明显地区差异，职业人群仍为目前防控重点。建议继续开展职业人群监测，做好健康教育和行为干预，及时掌握疫情动态，有效控制布病疫情。

目的:了解云南省人间布鲁氏菌病的流行特征，为制定布鲁氏菌病精准防控策略提供可靠的科学依据。方法:收集中国疾病预防控制中心信息系统中2019年1月至2021年12月云南省人间布鲁氏菌病疫情资料和云南省各州（市）上报的布鲁氏菌病年度监测数据，采用描述性流行病学方法，对布鲁氏菌病的流行概况，三间分布（时间、地区、人群）特征及血清学、病原学监测结果进行分析。结果:2019 - 2021年云南省累计报告布鲁氏菌病病例1 408例，年均发病率为1.00/10万；发病数从2019年的321例增加至2021年的701例，发病率从2019年的0.68/10万增加至2021年的1.50/10万。发病时间主要集中在4 - 9月（857例）。报告发病数居前3位的地区依次为昆明市（483例）、曲靖市（379例）、红河哈尼族彝族自治州（281例），共占总病例数的81.18%（1 143/1 408）。发病年龄主要集中在20 ~ < 70岁，占89.70%（1 263/1 408）；男性958例、女性450例，男女性别比为2.13 ∶ 1.00；职业以农民为主，占84.02%（1 183/1 408）。2019 - 2021年云南省共监测布鲁氏菌病重点人群血清26 280份，血清学检测阳性572份，阳性率为2.18%（572/26 280）。共从全省医院病例血液标本中分离出布鲁氏菌169株，其中羊种3型155株、羊种1型14株。结论:2019 - 2021年云南省人间布鲁氏菌病发病呈上升趋势，以夏秋季高发，发病人群主要为青中年男性农民，应加强高发季节重点人群的疾病监测与健康教育。

目的:分析青海省人间布鲁氏菌病（布病）流行规律与趋势，对2005-2019年布鲁氏菌分离株进行分子分型，为制定青海省布病预防控制策略提供依据。方法:收集中国疾病预防控制信息系统青海省2005-2019年布病报告数据，描述和分析其时间、地区和人群三间分布。采用BCSP31聚合酶链式反应（BCSP31-PCR）、AMOS聚合酶链式反应（AMOS-PCR）和多位点串联重复序列分析（MLVA-16）方法鉴定布鲁氏菌分离株，进行聚类分析。结果:2005-2019年青海省累计报告病例577例，平均发病率为0.07/10万，不同年份差异有统计学意义。一年四季均可发病，集中在每年的3-10月。577例病例分布在6个自治州（市）的31个县（市、区）中，病例数位居前5位的是门源回族自治县（22.88 %，132/577）、天峻县（10.57 %，61/577）、西宁市（10.57 %，61/577）、河南蒙古族自治县（10.51 %，58/577）和海晏县（9.53 %，55/577）。年龄范围8~82岁，男女性别比为1.8∶1（374/203），职业分布以牧民为主（47.83 %，276/577）。从人全血中分离的10株菌株均为羊种Ⅲ型布鲁氏菌，分为5种基因型（2种基因型为单基因型，3种基因型为相同基因型），MLVA-16分型和聚类分析结果显示，同青海省已发表文献的26株羊种Ⅲ型布鲁氏菌的遗传关系较近。 结论:青海省布病疫情呈回升趋势，应加强人群监测和疫情通报，MLVA-16分型呈基因多态性，提示MLVA-16可用于遗传多样性分析和分子流行病学溯源调查，以提高布病监测能力。

目的:了解陕西省布鲁氏菌病发病情况及分离菌株或核酸的基因型,掌握其流行病学及分子遗传特征,为陕西省人间布鲁氏菌病的精准防控提供科学依据。方法:登录中国疾病预防控制信息系统收集2020年陕西省人间布鲁氏菌病的发病数据,分析流行特征;应用细菌学及PCR方法对分离菌株或核酸进行鉴定,进一步采用多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)方法进行分子分型,利用BioNumerics(Version 7.6)软件对MLVA结果进行分析。结果:2020年陕西省共报告人间布病1 086例,发病率为2.80/10万,涉及86个县(区),流行高峰在3 - 9月(865例),男女性别比为2.68∶ 1.00(791∶ 295),30 ~ 69岁年龄段占79.74%(866例),农民占83.43%(906例)。36株分离菌株生物型鉴定结果显示,4株是羊种变异型,3株是羊种1型,29株是羊种3型。36株分离菌株及7份核酸经BCSP31-PCR均鉴定为布鲁氏菌属,经AMOS-PCR均鉴定为羊种布鲁氏菌。经MLVA-16分型,panel1结果显示有2种基因型:42型(1-5-3-13-2-2-3-2)、63型(1-5-3-13-2-3-3-2),panel2A结果显示均为4-41-8,panel2B结果显示具有高度的多变性;36株分离菌株及7份核酸分为33种基因型,其中27种基因型为单分离株,6种基因型为共享型。结论:陕西省人间布鲁氏菌病防控形势严峻。MLVA-16是一种成熟的基因分型方法,确定了陕西省布鲁氏菌分离株或核酸存在多种基因型,可为人间布鲁氏菌病精准防控、暴发疫情分析及流行病学溯源提供科学依据。

目的:了解四川省人间布鲁氏菌病（简称布病）分离菌株的分型情况。方法:66株菌株分离自2014 - 2020年四川省人间布病确诊病例，分别应用BCSP31-PCR、AMOS-PCR方法对分离菌株进行属、生物型鉴定；选用多位点序列分型（MLST）-9方法对分离菌株进行分型实验，通过在线全球MLST数据库对比序列型（ST）；并通过BioNumerics 7.6软件，使用最小生成树（MST）对新发现和已知ST序列进行聚类分析。结果:2014 - 2020年四川省自人间布病确诊病例分离的66株菌株均为布鲁氏菌属，其中羊种布鲁氏菌65株，牛种布鲁氏菌1株。存在3个已知ST（ST-8、ST-39、ST-2）和1个新发现型别（ST-101）。其中，ST-8为四川省主要ST（90.91%，60/66），另有4株羊种布鲁氏菌为ST-39，1株牛种布鲁氏菌为ST-2。新发现型别ST-101于2019年分离自乐山市，属羊种布鲁氏菌克隆群，与ST-8进化关系紧密。结论:四川省布鲁氏菌主要流行株为羊种布鲁氏菌，主要基因型为ST-8，同时存在少量ST-39、ST-101、ST-2。

目的:观察青海省青藏高原喜马拉雅旱獭分离的布鲁氏菌的多位点可变数目串联重复序列分析（multiple locus variable-number tandem repeat analysis，MLVA）分型，探讨其与既往青海省布鲁氏菌分离菌株间的亲缘关系。方法:2019年3月至2020年10月，采集青海省青藏高原喜马拉雅旱獭全血样本，对虎红平板凝集试验（rose bengal test，RBT）布鲁氏菌抗体阳性样本进行病原体分离培养，采用传统生物学方法和分子生物学方法（BCSP31-PCR和AMOS-PCR方法）进行菌株鉴定。同时，应用MLVA方法对分离菌株进行基因分型，并结合既往青海省不同宿主分离的70株布鲁氏菌的基因型，应用聚类分析方法探讨菌株间的亲缘关系。结果:共采集青藏高原喜马拉雅旱獭全血样本1 466份，从其中64份RBT阳性样本中分离培养出2株布鲁氏菌，分别命名为QH2013054、QH2013062，经传统生物学和分子生物学方法鉴定为羊种布鲁氏菌生物Ⅲ型。MLVA分型结果显示，QH2013054与QH2013062菌株在Bru16位点有差异，为不同的MLVA基因型。聚类分析结果显示，QH2013054菌株与7株菌株具有相同的MLVA基因型，其中6株来自共和县同一个家庭的3名农民和3只羊，1株来自门源回族自治县农民；QH2013062菌株与4株菌株具有相同的MLVA基因型，其中3株来自门源回族自治县的3名农民，1株来自互助土族自治县农民。结论:从青海省青藏高原喜马拉雅旱獭中分离的布鲁氏菌与在本省人、羊中分离的部分布鲁氏菌具有相同的MLVA基因型，推测宿主人、羊、青藏高原喜马拉雅旱獭可能具有共同的传染源。

目的:利用布鲁菌Omp31的单克隆抗体，初步建立布鲁菌抗原流式细胞术（FCM）检测方法，分析该方法在人布鲁菌病（简称布病）临床样本检测中的价值。方法:牛种布鲁菌2308、104M、S19，羊种布鲁菌M5-90和猪种布鲁菌S2共5个菌株，经超声破碎，获得其菌液上清，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法和蛋白免疫印迹法（Western blot），检测已制备的抗布鲁菌Omp31单克隆抗体5H3对上述5个菌株的识别能力。构建Omp31重组真核表达载体（pcDNA3.1-Omp31）并转染人胚肾细胞（293FT细胞），Western blot检测Omp31蛋白的表达。羊种布鲁菌弱毒疫苗株M5-90侵染人急性单核细胞白血病细胞系（THP-1细胞），构建含菌单核吞噬细胞。将5H3抗体用异硫氰酸荧光素（FITC）或藻红蛋白（PE）标记，采用FCM，利用FITC-5H3抗体检测pcDNA3.1-Omp31转染293FT细胞和含菌单核吞噬细胞，鉴定该抗体对细胞内布鲁菌抗原的识别能力，初步建立FCM的检测方法，并测定FITC-5H3抗体在FCM中的灵敏度。利用双抗体（PE-5H3和FITC-CD14）的流式细胞染色测定人外周血单个核细胞（PBMCs），分析该方法应用于人布病临床检测的可行性。结果:抗布鲁菌Omp31单克隆抗体5H3不仅能识别羊种布鲁菌M5-90菌株和猪种布鲁菌S2菌株，还能识别缺失Omp31基因的牛种布鲁菌2308、104M、S19菌株。FITC-5H3抗体可用于流式细胞染色识别细胞内的布鲁菌抗原，表达Omp31的293FT阳性细胞比例约为59.3%，疫苗株M5-90侵染的THP-1阳性细胞比例约为6.2%，检测293FT阳性转染细胞的灵敏度为4%。初步建立了基于PE-5H3和FITC-CD14的双抗体染色的FCM检测方法，该方法检测布病患者PBMCs中的双抗体阳性细胞比例（1.93%）高于健康人群（< 0.30%，阴性）。结论:利用FCM，初步建立了荧光素标记抗布鲁菌Omp31单克隆抗体5H3检测细胞内布鲁菌抗原的方法，并发现5H3抗体能识别牛种布鲁菌，弥补了布鲁菌抗原检测中Omp31的应用缺陷。此方法的建立为布病病原学检测方法的研究提供了新策略，为检测试剂的开发提供了新材料。

目的:了解杭州市非职业人群布鲁菌病（简称布病）的流行病学特征，为非职业人群布病患者的诊断及提出下一步防控措施提供依据。方法:采用回顾性分析方法，收集2008-2019年杭州市报告的布病患者的基本信息、流行病学特征、临床特征及实验室检测资料。资料来源于杭州市疾病预防控制中心历年确诊布病病例的个案调查表及布病防治工作年报，分析其中非职业人群布病患者的流行病学特征、临床特征及诊断情况等。结果:2008-2019年杭州市共报告非职业人群布病患者76例，占总报告布病病例的34.23%（76/222）。76例非职业人群布病患者中，男性47例、女性29例，男女性别比为1.62∶1.00；年龄为（47.37 ± 16.04）岁，范围为6~84岁。3-5月是非职业人群布病发病的高峰期，占59.21%（45/76）；主要感染途径是直接接触和消化道途径，占80.26%（61/76）。临床症状以发热[100.00%（76/76）]、多汗[73.68%（56/76）]、肌肉关节疼痛[69.74%（53/76）]为主；诊断时间为27（14，49）d，最长诊断时间为190 d，其中39例（51.32%，39/76）患者出现了误诊。经医院实验室全自动血培养仪常规培养提示疑似布鲁菌60株，经分型鉴定羊种布鲁菌54株，符合率为90.00%。2015-2019年患者血培养率（88.46%，46/52）明显高于2008-2014年（58.33%，14/24），差异有统计学意义（χ 2=8.968， P < 0.05）。 结论:2008-2019年杭州市非职业人群布病发病有季节性，感染方式多样，临床症状不典型、易误诊。高发季节对疑似布病患者开展血培养有利于布病的早期诊断。

目的:建立实时荧光定量PCR方法检测布鲁氏菌基因组内IS711转座酶基因（orfA基因）的拷贝数，并应用于布鲁氏菌种与生物型的鉴定。方法:构建基于Taqman探针法实时荧光定量PCR技术的orfA基因拷贝数的检测体系。设计bcsp31基因和orfA基因的引物和探针，应用实时荧光定量PCR方法同时检测同一菌株相同DNA浓度下的bcsp31基因和orfA基因含量，获得2个基因的循环数（CT值），再根据bcsp31基因和orfA基因CT值的差异，换算出待检测布鲁氏菌菌株基因组内orfA基因的拷贝数。同时，将布鲁氏菌16M菌株DNA进行2倍递减稀释，验证检测体系的稳定性。结果:当16M菌株DNA浓度相差2倍时，实时荧光定量PCR方法同时检测bcsp31基因和orfA基因，测得的CT值差值均值均为1.00，95%置信区间为0.95~1.05，标准差为0.17，变异系数为0.17。应用该检测体系检测30株布鲁氏菌菌株DNA中orfA基因的拷贝数，发现羊种生物1~3型菌株分别有6、9和7个拷贝数；猪种生物2型菌株有10个拷贝数，与其他4个猪种生物型（1、3~5）菌株拷贝数不同；绵羊附睾种菌株有37个拷贝数；8个牛种生物型（1~7、9）菌株拷贝数稳定在5~6个。结论:成功建立了一种检测布鲁氏菌orfA基因拷贝数的实时荧光定量PCR方法，该方法能够鉴定部分布鲁氏菌种与生物型菌株。