目的 探讨美洲大蠊多肽(PAE2)逆转人肝癌多药耐药细胞株HepG2/ADM的作用及机制.方法 噻唑蓝(MTT)法检测HepG2/ADM细胞对不同化疗药物的耐药性以及PAE2联合化疗药物(5-氟尿嘧啶、阿霉素、环磷酰胺、长春新碱、奥沙利铂)对HepG2/ADM细胞增殖的影响;激光共聚焦观察PAE2对HepG2/ADM细胞中药物累积的影响;Western blotting法检测PAE2对HepG2/ADM细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X,Bax)、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase 9,Caspase-9)、DNA 修复酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)表达的影响;qRT-PCR 法检测PAE2对多药耐药蛋白1(multiple drug resistance 1,MDR1)、乳腺癌耐药相关蛋白(breast cancer resistant protein,BCRP)和酶介导的多药耐药途径中蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)、拓扑异构酶Ⅱ(topoisomerase Ⅱ,Top Ⅱ)的mRNA表达.结果 PAE2抑制HepG2/ADM细胞增殖,呈时间和剂量相关性.PAE2可逆转HepG2/ADM对不同化疗药物的耐药性;PAE2可上调HepG2/ADM细胞中阿霉素水平,呈剂量相关性.PAE2可显著上调耐药细胞中Bax、cleaved Caspase-9p37蛋白表达水平(P＜0.05、0.01),显著下调Bcl-2蛋白表达水平(P＜0.01),对cleavedPARP蛋白表达无显著影响.PAE2均显著下调HepG2/ADM细胞中MDR1、BCRP、PKC、Top Ⅱ mRNA水平(P＜0.01).结论 PAE2可以通过减少药物外排、促进细胞凋亡、下调耐药蛋白表达等途径逆转HepG2/ADM细胞的多药耐药性.

本研究探讨了美洲大蠊多肽PAE2逆转人肝细胞肿瘤耐药细胞株BEL-7402/5-FU的多药耐药性作用及机制.以人肝细胞肿瘤敏感细胞株BEL-7402、人肝细胞肿瘤耐5-氟尿嘧啶(5-FU)细胞株BEL-7402/5-FU和Balb/c-nude小鼠为研究对象,采用噻唑蓝比色分析法检测BEL-7402/5-FU 细胞的多药耐药性和交叉耐药性,通过激光共聚焦显微镜观察阿霉素在BEL-7402/5-FU 细胞中的累积.使用实时荧光定量聚合酶链式反应和免疫细胞化学染色法检测BEL-7402/5-FU 细胞中 P-糖蛋白 1(P-glycoprotein 1,P-gp1)、多药耐药相关蛋白 1(multi-drug resistance protein 1,MRP1)、肺耐药相关蛋白1(lung resistance protein 1,LRP1)以及乳腺癌耐药蛋白 1(breast cancer resistance protein 1,BCRP1)的 mRNA 和蛋白的相对表达量,确定美洲大蠊多肽PAE2逆转多药耐药性的机制.此外,在Balb/c-nude小鼠中,建立BEL-7402/5-FU细胞的腋下移植瘤模型,观察美洲大蠊多肽PAE2对腋下移植瘤小鼠的免疫器官、肝肾功能、肿瘤抑制与诱导肿瘤细胞调亡、调节肿瘤组织多药耐药相关蛋白等环节的影响.结果显示,美洲大蠊多肽PAE2能有效逆转BEL-7402/5-FU细胞的多药耐药性和交叉耐药性,作用机制可能与下调多药耐药相关蛋白的表达水平有关,降低了多药耐药细胞对抗肿瘤药物的外排能力、影响抗肿瘤药物分子代谢,从而达到逆转人肝细胞癌多药耐药的作用.

目的:探讨美洲大蠊多肽PAE2体内逆转肝癌多药耐药(MDR)的作用及机制.方法:采用Balb/c-nude小鼠腋下接种HepG2和HepG2/ADM细胞分别建立肝癌敏感株动物模型和肝癌MDR动物模型,模型制备成功后,将裸鼠随机分为正常组,HepG2模型组,HepG2/ADM模型组,索拉菲尼组[30mg·kg-1,灌胃(ig)],HepG2/ADM+PAE2[静脉注射(iv)]低、中、高剂量组(50,100,200 mg·kg-1),HepG2/ADM+PAE2ig低、中、高剂量组(50,100,200 mg·kg-1),脱脂膏组(200 mg·kg-1,ig),美洲大蠊前期粗提物CⅡ-3组(200 mg·kg-1,ig),每2日测量1次裸鼠体质量及肿瘤体积,并记录,末次给药后,次日取裸鼠肿瘤组织,记录瘤质量,采用免疫组织化学(IHC)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定美洲大蠊多肽PAE2对肿瘤组织中P糖蛋白(P-gp),肺耐药相关蛋白(LRP),乳腺癌耐药蛋白(BCRP),蛋白激酶C(PKC),谷胱甘肽巯基转移酶-π(GST-π),拓扑异构酶Ⅱ (ToPoⅡ ),MDR基因1(MDR1)及MDR相关蛋白1(MRP1)蛋白水平和基因水平表达的影响.另同时设置口服和静脉2种给药组别以研究美洲大蠊PAE2的基本药代动力学特征.结果:裸小鼠体质量方面,造模成功后,与正常组比较,裸小鼠体质量明显减轻(P＜0.05),经各药物治疗后,体质量有一定回升,但仍然不及正常裸小鼠.抑瘤作用方面,与模型组比较,美洲大蠊多肽PAE2iv组中剂量组抑瘤效果最好(P＜0.05),口服给药组抑瘤作用随剂量的增加而增加,高剂量组效果最好(P＜0.05),美洲大蠊前期粗提物CⅡ-3无明显抑瘤作用,脱脂膏具有一定的抑瘤效果(P＜0.05).MDR相关蛋白和酶方面,美洲大蠊多肽PAE2在体内对MDR相关的蛋白和酶均有一定影响,主要可能通过抑制肿瘤组织内LRP,BCRP表达和不同程度影响上述相关蛋白、基因表达而抑制细胞内药物外排,从而促进肿瘤凋亡,且作用优于美洲大蠊前期粗提物CⅡ-3和脱脂膏.结论:美洲大蠊多肽PAE2可能通过影响介导MDR的相关蛋白和酶的表达,减少药物外排,促进细胞内药物累积、细胞凋亡,从而发挥逆转HepG2/ADM细胞Balb/c-nude小鼠移植瘤MDR的作用.

目的 探究美洲大蠊多肽PAE2对HepG2/ADM移植瘤裸鼠凋亡蛋白表达及血管生成的影响.方法 将HepG2或HepG2/ADM细胞株接种于裸鼠皮下构建裸鼠肝癌皮下移植瘤模型.接种HepG2细胞的8只模型鼠为敏感组;接种HepG2/ADM细胞的模型鼠随机分为耐药组、阳性对照组和低、中、高剂量实验组,每组8只;另取8只正常裸鼠作为正常组.阳性对照组灌胃给予30 mg·kg-1索拉非尼;低、中、高剂量实验组分别灌胃给予50,100和200 mg·kg-1多肽PAE2;正常组、敏感组和耐药组均灌胃给予等量0.9％NaCl.7组裸鼠每天给药1次,连续给药14 d.测定肝指数及脾指数,用蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平,用免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达水平.结果 敏感组、耐药组、阳性对照组及低、高剂量实验组的肝指数分别为(73.37±0.08),(54.78±12.62),(49.88±6.54),(44.54±4.83)和(53.39±2.55)mg·g-1,脾指数分别为(10.87±1.08),(7.72±2.53),(5.43±0.99),(5.72±1.07)和(6.37±1.32)mg·g-1,Bax相对表达量分别为0.65±0.06,0.62±0.04,0.68±0.01,0.85±0.14和0.81±0.12,Bcl-2相对表达量分别为0.80±0.22,0.96±0.32,0.37±0.16,0.54±0.15和0.14±0.05,VEGF表达量分别为0.05±0.01,0.07±0.01,0.06±0.01,0.07±0.01和0.05±0.01.与耐药组相比,低剂量实验组的肝指数、脾指数、Bcl-2和VEGF表达量均显著降低,Bax表达量显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 多肽PAE2可通过促进移植瘤细胞凋亡及抑制肿瘤血管生成来逆转肝癌的多药耐药.

目的 基于腺苷酸活化蛋白激酶靶点在动物水平上探讨美洲大蠊多肽PAE2逆转肝癌多药耐药细胞BEL-7402/5-FU的机制研究.方法 以Balb/c-nude裸鼠为实验对象,建立裸鼠皮下人肝癌BEL-7402和BEL-7402/5-FU细胞瘤模型(敏感肝癌细胞模型和耐药肝癌细胞模型).将裸鼠分为正常组、敏感组(敏感肝癌细胞模型)、耐药组(耐药肝癌细胞模型),索拉菲尼组(耐药肝癌细胞模型,给予30 mg·kg-1阳性药索拉菲尼)和高、中、低剂量实验组(耐药肝癌细胞模型,分别给予200,100,50 mg·kg-1多肽PAE2).计算裸鼠抑瘤率及脏器指数;以生化分析仪检测裸鼠生化指标;以苏木精-伊红(HE)染色法观察肿瘤组织及肝组织的病理学变化;以实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测肿瘤组织中侵袭转移相关因子mRNA表达水平.结果 敏感组、耐药组、索拉菲尼组和高、中、低3个剂量实验组MMP2表达水平分别为0.01±0.00,1.00±0.00,0.02±0.01,0.01±0.01,0.07±0.02和0.00±0.00;这6组的MMP9表达水平分别为0.01±0.02,1.00±0.00,0.18±0.08,0.01±0.00,0.04±0.01和0.00±0.00;这6组的4EBP1表达水平分别为0.23±0.08,1.00±0.00,1.80±0.30,0.20±0.06,0.66±0.16和0.12±0.06.PAE2组与耐药组相比,各项mRNA表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 美洲大蠊多肽PAE2可通过腺苷酸活化蛋白激酶靶点影响裸鼠肿瘤细胞的侵袭转移因子,降低肿瘤组织中MMP2等mRNA的侵袭,从而抑制裸鼠肿瘤的生长.