目的:探讨美洲大蠊多肽PAP-2对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用.方法:通过小鼠腋窝皮下注射H22肝癌小鼠腹水构建荷瘤小鼠模型.将70只小鼠随机分为模型组(生理盐水)、5-氟尿嘧啶组(阳性药对照,20 mg/kg)以及美洲大蠊提取物的脱脂膏组(200 mg/kg,以提取物量计)、CⅡ-3组(从浸膏中提取的以多肽为主要活性成分的组分,200 mg/kg,以提取物量计)和多肽PAP-2高、中、低剂量组(从CⅡ-3中分离得到,200、100、50 mg/kg,以单体量计),每组10只.5-氟尿嘧啶组小鼠隔天腹腔注射给药1次,其余各组小鼠均每天灌胃给药1次,给药周期均为10 d.给药结束后,观察小鼠瘤块变化并测定其脏器(脾、胸腺、肝)指数,苏木精-伊红染色后观察其瘤组织病理变化,并采用酶联免疫吸附试验法测定其血清中血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-4的含量.结果:脱脂膏、CⅡ-3和不同剂量的PAP-2均能不同程度地抑制荷瘤小鼠瘤块的生长并升高其脏器指数,且PAP-2的作用具有一定的量效关系.其中,PAP-2高剂量组的抑瘤率(38.95％)显著高于脱脂膏组和CⅡ-3组(P<0.05),并与5-氟尿嘧啶组(40.87％)接近(P>0.05);PAP-2高剂量组小鼠脾指数、胸腺指数、肝指数较模型组均显著升高(P<0.05),并显著高于CⅡ-3组(P<0.05),且其肝指数显著高于脱脂膏组(P<0.05).此外,PAP-2还可降低荷瘤小鼠血清中VEGF和IL-4含量、升高其血清中IL-1β含量,其中PAP-2高剂量组与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05);并且PAP-2高剂量组小鼠血清中IL-1β含量显著高于脱脂膏组和CⅡ-3组(P<0.05),IL-4含量显著低于脱脂膏组和CⅡ-3组(P<0.05),但是其血清中VEGF含量显著低于脱脂膏组和CⅡ-3组(P<0.05).结论:美洲大蠊多肽PAP-2对H22荷瘤小鼠具有一定的抑瘤作用,可升高其脏器指数,降低其血清中VEGF、IL-4含量并升高其血清中IL-1β含量.

目的:探讨美洲大蠊多肽对血管生成的作用,探讨其机制.方法:以人脐静脉内皮细胞HUVECs和人肝癌HepG2细胞为研究对象,采用噻唑蓝(MTT)比色法和细胞划痕实验,观察不同质量浓度(6.25,12.5,25,50,100 mg·L-1)的美洲大蠊多肽(PAP-1 ～3),脱脂膏和美洲大蠊多肽前体物CⅡ-3对HUVECs增殖、迁移的影响,另设正常组和沙利度胺组;采用小管形成实验检测各组HUVECs小管形成能力;通过细胞间黏附实验,观察不同质量浓度(25,50,100 mg·L-1)的美洲大蠊提取物处理后人肝癌HepG2细胞同HUVECs之间黏附能力;利用免疫细胞化学染色和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组HUVECs中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达.结果:MTT比色法结果显示,多肽均能抑制HUVECs的增殖(P＜0.05),呈剂量依赖关系.不同质量浓度多肽分别作用24,48,72 h,PAP-2的抑制作用优于PAP-1,PAP-3 (P ＜0.05).不同质量浓度的CⅡ-3和脱脂膏作用,HUVECs的存活率明显升高.细胞划痕实验结果显示多肽均能抑制HUVECs迁移(P＜0.05),且随药物浓度的增加,抑制迁移的作用也越强.其中PAP-2的作用优于PAP-1和PAP-3(P＜0.05);CⅡ-3在一定程度上能抑制HUVECs迁移,但是剂量越大,抑制作用越弱;脱脂膏作用后,HUVECs迁移能力增强.小管生成实验结果显示,多肽均能抑制HUVECs小管形成(P＜0.05),且随着给药浓度的增大,抑制作用越强.其中,PAP-2对小管形成的抑制作用优于PAP-1和PAP-3(P＜0.05).CⅡ-3和脱脂膏一定程度上促进HUVECs小管的形成.细胞间黏附实验结果显示,多肽均能阻断HepG2同HUVECs之间的黏附(P＜0.05),其中PAP-2对HepG2同HUVECs间黏附的阻断作用强于PAP-1和PAP-3 (P ＜0.05).相反,CⅡ-3和脱脂膏在一定程度上却能促进HepG2同HUVECs间黏附.免疫细胞化学染色和ELISA实验结果显示,多肽均能够下调HUVECs细胞中VEGF含量(P＜0.05),且呈浓度依赖性.其中,PAP-2对VEGF的下调作用优于PAP-1和PAP-3(P＜0.05).而CⅡ-3和脱脂膏能上调HUVECs中VEGF的表达.结论:美洲大蠊多肽对HUVECs的侵袭和转移,分化形成小管的能力有一定抑制作用,并能下调细胞中VEGF蛋白的表达.其中,美洲大蠊多肽的作用优于CⅡ-3和脱脂膏,多肽中PAP-2的作用较优.

目的:探究美洲大蠊含药血清对人肝癌HepG2细胞的影响及可能的作用机制.方法:采用MTT法测量HepG2细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,酶联免疫吸附试验检测细胞上清中IFN-γ、IL-4、TNF-α的含量.结果:美洲大蠊含药血清组对肝癌HepG2细胞增殖均有不同程度的抑制作用,作用呈时间-浓度依赖性.其多肽PAP-2组的抑制率明显高于CⅡ-3及脱脂膏组,且PAP-2联用5-FU组抑制率明显高于单用PAP-2组,具协同作用.各血清组均能诱导HepG2细胞凋亡,并呈浓度依赖性,使细胞周期阻滞于S期或G2/M期.各血清组能下调IFN-γ表达,并呈浓度依赖性,并且联合5-FU用药具有协同作用;均能不同程度上调肝癌HepG2细胞IL-4、TNF-α的表达,与浓度呈负相关.结论:美洲大蠊含药血清能抑制HepG2细胞增殖,诱导HepG2细胞凋亡并抑制细胞周期的发展,且能够调节细胞因子,发挥免疫作用.

目的 探讨美洲大蠊多肽PAP-2对肝癌免疫微环境的影响,及其作用机制.方法 通过给昆明种小鼠注入H22细胞悬液构建Balb/c小鼠肝癌原位移植瘤模型,将原位移植瘤小鼠随机分为10组:模型组,5-氟尿嘧啶组(20 mg·kg-15-FU),美洲大蠊多肽PAP-2低、中、高剂量组(50、100、200 mg·kg-1 PAP-2),5-氟尿嘧啶(20 mg·kg-15-FU)+PAP-2低、中、高剂量组(50、100、200 mg·kg-1 PAP-2),美洲大蠊CⅡ-3组(200 mg·kg-1 CⅡ-3),脱脂膏组(200 mg·kg-1脱脂膏),5-Fu组隔天给药1次,其余各药物组每天1次,腹腔注射.通过检测抑瘤率、胸腺指数及脾指数,检测肿瘤组织中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和IL-1β的表达水平,检测小鼠脾细胞中相关淋巴细胞的变化水平.结果 模型组、5-氟尿嘧啶组、美洲大蠊多肽PAP-2高剂量组、5-FU+PAP-2高剂量组、美洲大蠊CⅡ-3组、脱脂膏组的瘤质量分别为(0.96±0.15)、(0.33±0.19)、(0.30±0.23)、(0.12±0.04)、(0.35±0.12)和(0.41±0.06)g,IL-1β含量分别为(18.93±2.68)、(28.88±1.14)、(23.20±2.79)、(24.47±1.79)、(21.65±3.09)和(21.25±2.78)pg·mL-1,TNF-α含量分别为(12.32±1.12)、(25.71±0.98)、(14.25±1.94)、(23.06±1.71)、(13.49±1.38)和(14.34±2.18)pg·mL-1,巨噬细胞比例分别为(0.94±0.64)％、(3.19±1.12)％、(3.13±1.15)％、(5.45±3.49)％、(2.03±0.59)％和(3.76±0.44)％,B细胞比例分别为(35.53±9.84)％、(61.30±2.57)％、(59.63±3.36)％、(47.20±12.61)％、(53.60±5.68)％和(54.88±4.48)％.模型组的上述指标与其余各组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 美洲大蠊多肽PAP-2能够提高肝癌原位移植瘤小鼠的免疫功能,一定程度上改善其免疫微环境.

目的 探讨美洲大蠊多肽PAP-2 对肝癌缺氧微环境的影响,及其作用机制.方法 BALb/c裸鼠用腋下接种HepG2 肝癌细胞的方法构建肝癌原位移植瘤模型.将造模成功的裸小鼠随机分为模型组、阳性对照组(20 mg·kg-1 5-氟尿嘧啶)、CⅡ-3 组(200 mg·kg-1 美洲大蠊提取物CⅡ-3)、脱脂膏组(200 mg·kg-1 美洲大蠊脱脂膏)和低、中、高剂量 PAP-2 组(50、100 和 200 mg·kg-1 美洲大蠊多肽PAP-2)及低、中、高剂量联合组(20 mg·kg-1 5-氟尿嘧啶+50、100 和200 mg·kg-1 美洲大蠊多肽PAP-2),每组 10 只.各组小鼠均按0.1 mL·10 g-1 的剂量腹腔注射给药,除模型组和阳性对照组隔天 1 次外,其余各组每天 1 次,共计 10 d.检测裸鼠移植瘤的抑瘤率和脏器指数,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测肿瘤组织中缺氧诱导因子(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达水平.结果 高剂量PAP-2 组、高剂量联合组、CⅡ-3 组、脱脂膏组和阳性对照组的抑瘤率分别为 62.19%、78.07%、52.14%、51.11%和53.73%.高剂量PAP-2 组、高剂量联合组、CⅡ-3 组、脱脂膏组、阳性对照组和模型组的脾指数分别为(129.98±3.97)、(139.98±14.18)、(66.48±6.93)、(64.90±5.31)、(108.61±11.32)和(45.47±6.42)mg·g-1,肝指数分别为(843.10±59.41)、(1 112.62±37.28)、(720.68±77.70)、(709.77±51.80)、(927.66±69.19)和(497.21±59.81)mg·g-1,HIF-1α mRNA表达量分别 0.96±0.09、0.55±0.22、0.97±0.29、0.86±0.22、0.88±0.32和 1.28±0.22,VEGF mRNA表达量分别为0.75±0.29、0.23±0.07、0.84±0.18、0.90±0.21、0.69±0.21 和 1.12±0.12.高剂量联合组、高剂量PAP-2 组、CⅡ-3 组、脱脂膏组和阳性对照组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 美洲大蠊多肽PAP-2 通过抑制相关血管生成因子的表达水平,抑制肿瘤血管生成和肿瘤细胞迁移,改善肝癌缺氧微环境.