探讨老鼠簕生物碱A[4-hydroxy-2(3H)-benzoxazolone,HBOA]对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制.0～1.0 mmol·L-1 HBOA处理体外培养的胰腺癌L3.6 细胞,采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法测定细胞活力并计算半数抑制浓度IC50,筛选药物作用浓度和时间.利用倒置显微镜、吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察细胞形态,活细胞计数、细胞集落形成实验检测细胞增殖、自我更新能力,流式细胞术检测细胞周期进程和细胞凋亡比率,扫描电镜观察细胞凋亡形态,qPCR检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞周期蛋白A(cyclinA1、cyclinA2)、细胞周期蛋白依赖性激酶 2(cyclin dependent kinase 2,CDK2)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子 1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,P21)mRNA表达,流式细胞术检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)、脂质过氧化物、线粒体膜电位水平,Western blot检测蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路活性.与对照组相比,HBOA处理组细胞活力显著下降,筛选出 0.4、0.6 mmol·L-1 HBOA干预 48 h为后续实验剂量与时间;与对照组相比,0.4、0.6 mmol·L-1 HBOA处理组细胞增殖和集落形成能力被抑制,PCNA、cyclinA1、cyclinA2、CDK2 mRNA表达水平显著降低,P21 mRNA表达水平显著升高,细胞周期阻滞于S期,细胞凋亡率显著增加、出现凋亡小体,ROS水平显著升高,脂质过氧化物水平显著升高,线粒体膜电位降低,其中 0.6 mmol·L-1 处理组显著降低,p-Akt、p-mTOR蛋白水平显著降低.该研究表明HBOA抑制胰腺癌L3.6 细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与ROS增加、Akt/mTOR通路活性抑制有关.

目的 观察老鼠簕生物碱A(HBOA)对四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) /p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路的影响,探讨HBOA抗肝纤维化的作用机制.方法 大鼠随机分成对照组、模型组及HBOA高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)组和秋水仙碱(0.4 mg/kg)组.除对照组外,其余各组ig给予50％ CC14橄榄油溶液,每周2次,连续12周,诱导肝纤维化大鼠模型.于造模第9周起,给药组分别ig相应的受试药物,每天1次,给药4周.实验结束后,计算各组大鼠体质量变化、肝脏指数;检测各组大鼠肝匀浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性;蛋白免疫印迹法(Western blotting)法检测肝组织P-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K蛋白的表达.结果 与模型组比较,各给药组大鼠体质量增加量显著升高,均能降低肝脏指数及肝组织中ALT、AST活性;此外,HBOA高、中剂量组均能显著抑制p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K蛋白的表达.结论 HBOA对肝纤维化大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路有关.

目的:探讨老鼠簕生物碱A对D-GalN/LPS所致的小鼠急性肝损伤的影响.方法:使用D-GalN(700mg/kg)和LPS(10μg/kg)建立小鼠急性肝损伤模型,设置正常对照组、模型组、联苯双酯滴丸(150 mg/kg)阳性对照组及老鼠筋生物碱A高(200 mg/kg)、中(100 mg/kg)、低(50 mg/kg)剂量组,计算小鼠生存率,采用试剂盒测定血浆ALT、AST及肝组织中LDH水平,利用免疫组化法检测肝组织TNF-α表达,Western blot测定肝组织中PI3K-p85蛋白表达及p-Akt/Akt水平.结果:与正常对照组比较,模型组小鼠生存率低;血浆ALT、AST及肝组织中LDH水平及TNF-α蛋白表达显著升高;肝组织PI3K-p85蛋白表达及p-Akt/Akt水平显著降低.与模型组比较,各给药组血浆ALT、AST及肝组织LDH水平和TNF-α蛋白表达显著降低;小鼠生存率有所提高;联苯双酯组和老鼠簕生物碱A高剂量组肝组织PI3K-p85蛋白表达及p-Akt/Akt水平显著升高.结论:老鼠筋生物碱A可在一定程度上改善D-GalN/LPS所致的小鼠急性肝损伤,对小鼠有肝保护作用,可能通过PI3K/Akt途径降低肝损伤.

目的:研究老鼠簕生物碱A(HBOA)对大鼠非酒精性脂肪肝的改善作用及其机制.方法:将SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、水飞蓟宾胶囊组(阳性对照,26.25 mg/kg)和HBOA高、中、低剂量组(100、50、25 mg/kg),每组10只.除空白对照组喂养普通饲料外,其余各组大鼠连续喂养高脂饲料8周以复制非酒精性脂肪肝模型.于第9周起,空白对照组和模型组大鼠灌胃等体积0.6％羟甲基纤维素钠溶液,各给药组大鼠灌胃相应药物,每日1次,连续4周.观察各组大鼠一般情况并计算其体质量增量、脏器(肝、肾、脾)指数;检测肝组织中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、游离脂肪酸(NEFA)含量,以及血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;采用免疫组织化学法检测肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)蛋白的表达情况.结果:与空白对照组比较,模型组大鼠体质量增量和肝指数均显著升高(P<0.01);肝内可见脂肪沉积现象,血清中SOD、GSH-Px活性均显著降低,MDA含量以及肝组织中AST、ALT、TC、TG、NEFA含量均显著升高,PPARα蛋白表达水平显著降低(P<0.01).与模型组比较,各给药组大鼠体质量增加量和肝指数均显著降低(P<0.05或P<0.01),肝内脂肪沉积现象改善,血清中SOD、GSH-Px活性(除HBOA低剂量组外)均显著升高,MDA含量以及肝组织中AST、ALT、TC(除HBOA低剂量组外)、TG(除HBOA低剂量组外)、NEFA含量均显著降低,PPARα蛋白表达水平(除HBOA低剂量组外)均显著升高(P<0.05或P<0.01),且高剂量组上述部分指标显著优于中、低剂量组(P<0.05).结论:老鼠簕生物碱A对高脂饮食致大鼠非酒精性脂肪肝有一定的改善作用,其机制可能与改善脂质代谢紊乱、抗氧化应激及上调PPARα表达有关.

目的:探讨老鼠簕生物碱A(HBOA)对脂多糖(LPS)所致小鼠急性肝损伤的作用及机制.方法:采用AutoDock Tools软件将HBOA与GRP78、IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白进行分子对接.腹腔注射LPS(10 mg/kg)建立小鼠急性肝损伤模型,分为正常组、模型组、联苯双酯阳性药组及HBOA高、中、低剂量组.连续灌胃给药10 d,除正常组外,其余5组小鼠均腹腔注射LPS,诱导急性肝损伤模型.检测各组肝组织中乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽(GSH)水平,免疫组化法检测白细胞介素(IL)-1β的表达,Western blotting法测定内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源体蛋白(CHOP)、Caspase-12及炎症相关蛋白肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6的表达.结果:HBOA与GRP78、IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白之间的最优对接构象结合能分别为-5.77 kcal/mol、-5.48 kcal/mol、-5.83 kcal/mol、-5.36 kcal/mol.与正常组相比,模型组小鼠肝组织中LDH含量及GRP78、CHOP、Caspase-12、IL-1β、TNF-α和IL-6表达显著增高,GSH水平显著降低(均P<0.05).与模型组相比,HBOA高、中剂量组和阳性药组LDH含量及GRP78、CHOP、Caspase-12、IL-1β、TNF-α和IL-6表达明显降低,GSH水平显著升高(均P<0.05).结论:HBOA能在一定程度上减轻LPS所致的小鼠急性肝损伤,其保肝机制可能与减轻炎症、减少内质网应激、抑制肝细胞凋亡相关.