目的 总结自噬在急性淋巴细胞白血病(ALL)发病、药物治疗及相关机制中的研究进展.方法 以"自噬、急性淋巴细胞白血病、融合基因、治疗、进展"为中文关键词,以"autophagy,acute lymphoblastic leukemia,fusion gene,therapy,progress"为英文关键词,系统检索中国知网和PubMed数据库2010-01-01-2023-12-31发表的相关文献.纳入标准:(1)自噬及自噬发生的分子机制;(2)自噬与ALL融合基因突变发病中的关系;(3)自噬与ALL的关系及相关机制.排除标准:(1)会议、评论性及学位论文等;(2)内容关联性不强、结论尚存在争议及内容陈旧的文献.最终纳入66篇文献进行分析(中文4篇,英文62篇).结果 自噬相关蛋白在ALL患者中表达异常,且在不同的融合基因突变ALL中参与了 ALL 的发病及药物治疗过程,该过程可能与 JAK/STAT、SIRT1/AMPK、NF-κB、cAMPK、c-Myc、Akt/mTOR/p70S6K/4E-BP1、PI3K/AKT/mTOR等分子和(或)信号通路相关.在ALL的不同治疗阶段,抑制或激活自噬与促进或抑制ALL的发生发展密切相关.结论 自噬在维持细胞内环境的稳定发挥重要作用,参与了 ALL的发病及治疗过程并在疾病不同阶段扮演了促进或抑制的双重作用,故探索有效靶向自噬的ALL个性化和(或)联合治疗方案至关重要.

目的:探讨左旋门冬酰胺酶对伯基特淋巴瘤细胞株增殖、细胞周期和凋亡的影响及其作用机制。方法:应用CCK-8法检测左旋门冬酰胺酶对伯基特淋巴瘤细胞株细胞增殖的影响，流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期，实时定量PCR和Western blot检测分析细胞周期、凋亡、自噬和PI3K/Akt/mTOR信号通路中各种分子的表达变化。结果:左旋门冬酰胺酶明显抑制多种伯基特淋巴瘤细胞株的增殖，并引起细胞周期G 0/G 1期阻滞，诱导细胞凋亡和自噬。进一步结果表明左旋门冬酰胺酶抑制c-Myc的表达，同时抑制p-PI3K、p-Akt-S473、p-mTOR、p-70S6K和p-4E-BP1的表达。PI3K抑制剂LY294002联合左旋门冬酰胺酶进一步诱导了细胞凋亡。此外，左旋门冬酰胺酶抑制STAT和ERK信号通路。 结论:左旋门冬酰胺酶抑制伯基特淋巴瘤细胞株细胞增殖和G 0/G 1期细胞阻滞，诱导自噬和凋亡并通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路调控细胞凋亡。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-454对食管癌细胞顺铂敏感性的影响及机制。方法:将转染anti-miR-454、anti-miR-NC的ECA109细胞(中国科学院上海细胞库)设为anti-miR-454组、anti-miR-NC组。噻唑蓝(MTT)法检测顺铂对ECA109细胞增殖抑制率，并计算半数抑制浓度(IC 50)；蛋白质印迹法(Western blot)实验检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(p70S6K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平。多样本计量资料比较采用单因素方差分析，两两样本比较采用SNK- q检验。 结果:anti-miR-454组IC 50值低于anti-miR-NC组[(0.41±0.05) μg/ml比(0.82±0.08) μg/ml， P<0.01]；MTT实验显示，细胞中miR-454下调后，不同顺铂浓度对ECA109细胞增殖抑制率显著升高；Western blot实验显示，细胞中miR-454下调后，PI3K、mTOR、p70S6K蛋白相对表达量，p-Akt/Akt显著降低。 结论:下调miR-454表达可增强食管癌ECA109细胞顺铂敏感性，推测与其靶向上调过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达、抑制Akt信号通路有关。

目的 观察归脾汤对心脾两虚型孤独症谱系障碍大鼠磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达情况的影响,探讨归脾汤可能的作用机制.方法 取20只受孕SD大鼠,随机选择16只给予心脾两虚型孤独症谱系障碍患儿粪便配制的液体灌胃,其余4只给予等体积生理盐水灌胃作为正常对照组,灌胃持续至分娩后21 d,通过三箱社交实验并结合大鼠体重、摄食量、大便情况、活动量、神态等筛选出心脾两虚型孤独症谱系障碍造模成功的子代大鼠.随机选取造模成功的子代21日龄大鼠40只,然后随机分为模型组、双歧杆菌组和归脾汤低、中、高剂量组,每组8只,另选择正常对照组子代大鼠8只作为正常组.双歧杆菌组给予双歧杆菌0.45 g/kg灌胃,归脾汤低、中、高剂量组分别给予2.2 g/kg、4.4 g/kg、8.8 g/kg的归脾汤灌胃,正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,均1次/d,连续灌胃14 d.记录大鼠灌胃第7天、第14天时体重,三箱社交实验评估大鼠社交能力、社交新颖性,比色法检测大鼠海马组织中谷氨酸含量,Western blot法检测大鼠海马组织中N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)、磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN)、PI3K、Akt、mTOR、p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)蛋白表达情况,RT-qPCR法检测大鼠海马组织中NR2B、PTEN、PI3K、Akt、mTOR、p70S6K mRNA表达情况.结果 与正常组比较,模型组大鼠体重明显降低,大鼠与空笼接触时间明显延长(P＜0.05),与陌生鼠2接触时间明显缩短(P＜0.05);海马组织中谷氨酸含量和海马组织中NR2B、PI3K、Akt、mTOR、p70S6K蛋白及mRNA相对表达量均明显升 高(P均＜0.05),海马 组织中PTEN蛋白及mRNA相对表达量均明显降低(P均＜0.05).与模型组比较,归脾汤各组及双歧杆菌组大鼠体重均明显增加(P均＜0.05),大鼠与空笼接触时间明显缩短(P均＜0.05),与陌生鼠2接触时间均明显延长(P均＜0.05),海马组织中谷氨酸含量和海马组织中NR2B、PI3K、Akt、mTOR、p70S6K蛋白及mRNA相对表达量均明显降低(P均＜0.05),海马组织中PTEN蛋白及mRNA相对表达量均明显升高(P均＜0.05).归脾汤中、高剂量组大鼠体重及海马组织中PTEN蛋白及mRNA相对表达量均明显高于双歧杆菌组(P均＜0.05),海马组织中谷氨酸含量和海马组织中NR2B、PI3K、mTOR、p70S6K蛋白及mRNA相对表达量均明显低于双歧杆菌组(P均＜0.05).结论 归脾汤能有效改善心脾两虚型孤独症谱系障碍大鼠社交能力和社交新颖性,作用机制可能与下调谷氨酸含量、抑制谷氨酸与NR2B受体结合,从而抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路活化有关.

目的:探究象皮生肌膏对肛瘘切除术后大鼠创面的治疗作用及其与PI3K/Akt/mTOR信号通路的相关性.方法:将SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组,共4组,每组10只.4组均采用0号钢丝制造肛瘘模型,造模成功后,除假手术组外,均在麻醉下行肛瘘切除术,创面保持开放,使之形成"开放、渗血、渗液、有脓性分泌物"的感染性肛瘘术后创面,假手术组保留瘘管,不予换药,模型组予以生理盐水冲洗、络合碘消毒后不予换药,治疗组分别予以相应药物进行创面换药,共10天.10天后采用常规面积检测法比较模型组、象皮生肌膏组、湿润烧伤膏组大鼠肛瘘术后创面的创面愈合率及创面肉芽组织覆盖率;HE染色观察各组大鼠肛周组织病理情况;ELISA检测各组大鼠血清中bFGF、EGF、VEGF的表达水平,WB检测比较各组大鼠肛周肉芽组织中 PI3K、Akt、mTOR、p70 S6K、p-PI3K(S473)、p-AKT(S473)、p-mTOR(Ser2448)、p-p70 S6K 的蛋白表达水平.结果:与模型组比较,治疗第3、7、10天象皮生肌膏组和湿润烧伤膏组的创面愈合率及创面肉芽组织填充率显著升高(P＜0.01).病理切片显示,假手术组炎性细胞浸润较少,其余各组均可见不同程度的炎性细胞浸润,且创面区可见不同程度炎性修复型肉芽组织增生、胶原纤维新生及血管扩张;其中模型组病理切片显示大量炎性细胞浸润,血管扩张明显,并有明显的血管出血;象皮生肌膏组病理切片显示炎性细胞较少,成纤维细胞成熟且分布整齐,真皮层内胶原纤维丰富且排列整齐,可见血管新生,无明显血管扩张及出血;湿润烧伤膏组病理切片显示少量炎性细胞浸润及血管扩张,真皮层内可见成纤维细胞生成.ELISA检测结果显示,与假手术组比较,模型组血清中bFGF、EGF、VEGF的含量显著降低(P＜0.01);与模型组比较,象皮生肌膏组血清中bFGF、EGF、VEGF的含量显著升高(P＜0.01),湿润烧伤膏组大鼠血清中EGF、VEGF的含量显著升高(P＜0.01).WB检测结果显示,与假手术组比较,模型组肛周组织中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70 S6K蛋白表达显著降低(P＜0.01);与模型组比较,象皮生肌膏组肛周组织中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70 S6K蛋白表达显著升高(P＜0.05).结论:象皮生肌膏能有效促进肛瘘术后创面修复,减轻肛瘘术后创面炎症反应,促进创面肉芽生长,其促愈机制可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达有关,其通过上调PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,进而加快创面修复进程.

目的:探索MAP4K3-mTOR信号级联在甘草查而酮A诱导的人口腔鳞癌细胞自噬与凋亡中的作用.方法:分别采用0、25、50 μmol/L甘草查尔酮A刺激人口腔鳞癌SCC-25系细胞,并于刺激后0、6及24 h收集细胞,采用Western blot检测MAP4K3、AKT、mTOR通路分子,细胞自噬标识分子LC3-Ⅱ、beclinl,以及细胞凋亡标记分子caspase-3、caspase-9及bcl-2等的蛋白表达水平,采用Annexin V-PI染色检测细胞凋亡状况.结果:甘草查尔酮A可剂量及时间依赖性地降低SCC-25细胞MAP4K3、p-mTOR及p-p70S6蛋白的表达水平,促进其LC3-Ⅱ、beclin1、caspase-3及caspase-9蛋白表达水平,并抑制其bel-2蛋白表达水平(P＜0.05).采用慢病毒过表达MAP4K3后,p-mTOR、caspase-3及caspase-9蛋白表达水平显著增高,LC3-Ⅱ、beclin1及bcl-2蛋白表达水平则显著降低(P＜0.05).经甘草查尔酮A刺激后,SCC-25细胞早期凋亡数与晚期凋亡数均较对照组显著增多,该效应可被MAP4K3过表达处理显著增强(P＜0.05).结论:甘草查尔酮A可时间剂量依赖地抑制MAP4K3-mTOR信号级联,并促进人口腔鳞癌细胞的自噬与凋亡,当过表达MAP4K3活化mTOR信号级联后,鳞癌细胞自噬活动受到抑制,但其凋亡活动则显著增强.

目的 探讨芍药苷对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移侵袭和血管生成的影响,以及与c-Met受体和下游分子的关系.方法 用含10％胎牛血清的内皮细胞培养基(ECM)体外培养HUVEC细胞,并且加入20 ng/ml肝细胞生长因子(HGF).用0、5、10、15、20 mmol/L芍药苷分别处理细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测芍药苷对细胞的毒性作用.Lipofectamine(R)3000转染c-Met质粒,Transwell法观察细胞的迁移侵袭能力,血管生成实验检测细胞血管生成的作用,Western blot检测相关蛋白表达量的变化.结果 当芍药苷浓度为15mmol/L时抑制HUVEC细胞的增殖(76.667±7.506,P=0.000).5、10mmol/L芍药苷可以抑制HUVEC细胞的迁移侵袭(249.333±42.360,P5 =0.001;97.667±21.032,P10=0.000)和血管生成(12.667±1.528,P5 =0.001;6.333±1.528,P10=0.000),抑制c-Met(0.833±0.702,P=0.000)及其下游分子磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)(0.420±0.030,P=0.000;0.370±0.050,P=0.000;0.730±0.121,P=0.001)和P70S6K的磷酸化(0.420±0.061,P=0.000),并降低VEGF的表达(0.317±0.031,P=0.000).转染c-Met质粒后,HUVEC细胞c-Met表达量明显升高(0.793±0.045,P=0.001),并且芍药苷抑制HUVEC细胞的侵袭迁移(269.000±18.520,P=0.000)、血管生成(20.667±1.528,P=0.000),抑制c-Met(0.387±0.067,P=0.003)及下游通路的作用被逆转(PI3K:0.677±0.046,P=0.000;Akt:0.577±0.055,P=0.000;mTOR:0.543±0.078,P=0.001;P70S6K:0.433±0.090,P=0.000),降低VEGF的表达(0.763±0.042,P=0.001).结论 芍药苷通过c-Met/PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制HUVEC细胞的迁移侵袭,并调节VEGF的表达,从而使HUVEC细胞的血管生成减少.

目的 探究Tizanidine对胶质瘤细胞U251的增殖、迁移及凋亡的影响,并尝试探讨其作用机制.方法 将U251细胞分为两组,一组用Tizanidine(20 μmol/L)处理24h;另一组用DMSO处理为对照组.采用CCK8实验检测细胞增殖情况;采用Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭情况;采用细胞流式检测细胞凋亡情况,采用Western blot检测PI3K-AKT信号通路相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达量的变化.结果 CCK8增殖实验表明Tizanidine可以抑制脑胶质瘤细胞U251的增殖(P＜0.05);Transwell结果说明Tizanidine可以抑制脑胶质瘤细胞U251的迁移和侵袭(P＜0.05);流式凋亡结果分析显示经无血清凋亡诱导后,经Tizanidine处理的细胞凋亡明显增多(P＜0.05),Western blot结果显示经过Tizanidine处理的U251细胞,细胞的抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)的表达量显著下调(P＜0.05),促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(BAX)和Active Caspase3表达量则显著上调(P＜0.05),AKT和mTOR的磷酸化水平均受到了显著抑制(P＜0.05),PI3K/AKT信号通路的下游蛋白P70、CyclinD1的表达也相应下调(P＜0.05).结论 Tizanidine抑制胶质瘤细胞U251的增殖、迁移和侵袭,诱导其凋亡,这有可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活实现的.

目的 JTC-801是孤啡肽受体NOP[Nociceptin/orphanin FQ(N/OFQ)peptide]受体拮抗剂,适用于与神经损伤相关的神经性疼痛和异常性疼痛,在肿瘤中的研究鲜见.本研究探讨JTC-801对结肠癌HCT116及HT-29细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并探讨相关机制.方法 采用JTC-801加药处理HCT116及HT-29细胞,用CCK8法、Transwell实验和细胞流式凋亡检测实验分别检测HCT116细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡;采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白以及PI3K信号通路相关蛋白表达.结果 CCK8实验表明,JTC-801显著抑制了HCT116及HT-29细胞增殖能力,并呈一定的剂量依赖性和时间依赖性.Transwell实验结果表明,10μmol/L JTC-801明显抑制了HCT116细胞迁移能力,与对照组迁移细胞数分别为44±2和96±5,t=16.72,P=0.0001;也抑制了HT-29细胞迁移能力,与对照组迁移细胞数分别为45±4和93±7,t=10.32,P=0.005.同样10μmol/L JTC-801显著抑制了HCT116细胞,与对照组穿膜细胞数分别为21±5和43±3,t=6.54,P=0.0028;也抑制了HT-29细胞,与对照组穿膜细胞数分别为23±3和40±2,t=8.17,P=0.0012.细胞流式凋亡检测实验结果表明,10μmol/L JTC-801促进HCT116细胞凋亡,凋亡率为(13.74±0.42)％和(4.73±0.33)％,t=29.23,P<0.001;也促进HT-29细胞凋亡,凋亡率为(18.59±0.39)％ 和(8.51±0.57)％,t=25.28,P<0.001.且抗凋亡相关蛋白Bcl-2明显下降,同时促凋亡蛋白Bax及Active Caspase3蛋白水平则显著上升,P<0.05;10μmol/L JTC-801还显著抑制了p-Akt、p-mTOR及下游分子p70s6k蛋白的表达水平,均P<0.01.结论 JTC-801可以抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,对结肠癌的发生发展进程产生重要作用.其作用可能通过影响PI3K信号通路活化实现.

目的:探索齐多夫定(AZT)对造血干细胞(HSCs)自我更新相关信号通路PI3K/Akt/mTOR和相关分子Bmi-1表达的影响.方法:采用AZT干预Balb/c孕小鼠,AZT剂量分别为5.0 mg/d/只和10.0mg/d/只,暴露时间为孕期第10天至分娩;取新生鼠骨髓细胞,Ficoll分离后,采用qPCR与western bloting方法检测PI3K/Akt/mTOR和相关分子Bmi-1、PTEN的表达变化.对照组分别为正常新生鼠组、成年小鼠组和老年小鼠组.结果:AZT 10.0 mg组和AZT 5.0 mg组的PI3K/Akt/mTOR信号通路中,mTOR水平表达有升高趋势,与成年小鼠组比较无明显区别,但明显低于老年小鼠组(P＜0.05),而PTEN基因的表达无明显变化;Bmi-1基因表达水平较正常组和成年小鼠组高(P＜0.05),但明显低于老年小鼠组(P＜0.05).AZT 10.0 mg组和AZT 5.0 mg组P70S6、4EBP1D较正常组升高但低于老年小鼠组(P＜0.05),老年小鼠组上述蛋白表达低于正常组和成年小鼠组(P＜0.05).结论:AZT对新生鼠HSCs自我更新相关信号通路关键分子mTOR与Bmi-1存在有限影响,仍可维持在较为正常的调控水平.