目的:了解衢州市肺结核患者对4种一线抗结核药物耐药的影响因素。方法:收集2017—2021年衢州市人民医院就诊的肺结核患者的临床资料，纳入结核分支杆菌培养阳性且菌种鉴定为结核分枝杆菌的病例，统计分析其耐药情况。采用多因素Logistic回归分析耐药肺结核患者耐药的影响因素。结果:共收集976例患者，其中初治肺结核患者854例，复治肺结核患者122例，总耐药率为23.87%（233/976），总耐多药率为11.17%（109/976）。多因素Logistic回归分析显示，来源于衢州市衢江区（ OR=3.157，95% CI：1.241～5.521）、常山县（ OR=3.568，95% CI：2.128～5.865）和复治肺结核患者是发生耐药的危险因素（ OR=4.035，95% CI：3.011～5.206）；40岁以上和复治患者是发生耐多药的危险因素（40～<60岁： OR=3.425，95% CI：1.566～7.325；≥60岁： OR=3.157，95% CI：2.241～8.521；复治： OR=7.321，95% CI：5.353～9.947）。 结论:衢州市衢江区和常山县来源的患者、40岁以上以及复治是导致衢州市肺结核患者对4种一线抗结核药物耐药的危险因素。

目的:分析上海市松江区耐药结核分枝杆菌的流行变化趋势。方法:回顾性分析上海市松江区2014年1月至2018年12月培养阳性的1 105株结核分枝杆菌复合群，进行菌种鉴定(PNB法、TCH法和28℃培养试验)和药敏试验(四种一线抗结核药)，分析其耐药情况。结果:1 105株结核分枝杆菌中，总耐药率为18.8%(208/1 105)，其中初治患者的耐药率为17.9%(189/1 058)，复治患者的耐药率为40.4%(19/47)；总耐多药率4.0%(44/1 105)，其中初治患者的耐多药率为3.4%(36/1 058)，复治患者的耐多药率为17.0%(8/47)。5年总耐药率、初治患者耐药率、复治患者耐药率、总耐多药率、初治患者耐多药率、复治患者耐多药率均无上升趋势(χ 2趋势值分别为4.229、3.871、6.862、2.764、4.930、1.955，均 P>0.05)。五年耐多药率分别为2.6%、3.5%、4.4%、4.5%、5.4%，逐年递增。logistic回归分析显示，男性、老年群体、复治患者是上海市松江区结核病高发的因素，且复治患者更易产生耐药( OR＝0.321，95% CI：0.175～0.586， P<0.01)和耐多药( OR＝0.172，95% CI：0.075～0.394， P<0.01)。 结论:上海市松江区2014-2018年耐药结核分枝杆菌流行趋势较平稳，耐多药率逐年递增。

结核分枝杆菌（MTB）感染导致的结核病仍然是全球公共卫生的巨大挑战。耐多药结核病（MDR-TB）和广泛耐药结核病（XDR-TB）菌株使得结核病治疗更加困难。不断研发新遗传工具，探索MTB生理，有望发现新的药物靶点。其中，最近用于MTB研究的成簇规律间隔短回文重复序列干扰（CRISPRi）与高通量测序相结合，为揭示MTB生理和遗传提供了基础。本文综述了CRISPRi在MTB生物学研究中的应用及技术发展。

目的:对临床分离的致关节感染的两株皮疽诺卡菌（ Nocardia farcinica）进行全基因组测序并分析其耐药性。 方法:2020年1月收集两株导致老年患者膝关节感染的皮疽诺卡菌菌株，采用全基因组测序对细菌进行鉴定，根据CLSI M24推荐的微量肉汤稀释法和E-test法进行药物敏感性分析，通过ABRicate工具比对获得性耐药和毒力基因，Snippy等生物信息学工具进行同源性等基因特征分析。结果:本研究的临床分离株均为皮疽诺卡菌，对头孢曲松、头孢吡肟、头孢噻肟、甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲噁唑（TMP/SMX）耐药，对亚胺培南、利奈唑胺和含有酶抑制剂类抗生素阿莫西林/克拉维酸敏感。携带A类β内酰胺酶基因 far-1、RNA聚合酶结合蛋白基因 RbpA、多耐药外排泵转录激活因子基因 MtrA和调节转录因子基因 vanR-O，分别介导对β内酰胺抗生素、利福平、大环内酯类药物和万古霉素的耐药性。不含有获得性TMP/SMX耐药基因，二氢叶酸还原酶家族基因存在多个错义突变，均携带与结核分枝杆菌同源的 icl、 mbtH、 phoP、 relA毒力基因，SNP同源分析表明两株皮疽诺卡菌具有很近的亲缘关系，两株菌仅存在10个SNP位点、6个复合基因和1段基因缺失变异。 结论:全基因测序技术有助于研究诺卡菌的分子特征和耐药机制；皮疽诺卡菌对TMP/SMX耐药现象需要重视，参与二氢叶酸代谢途径的酶基因突变有可能是TMP/SMX耐药的原因之一。

目的:观察巨噬细胞耐多药结核分枝杆菌(multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis, MDR- Mtb)感染模型的吞噬和杀菌功能特点，探讨其在吞噬杀菌过程中免疫应答和代谢功能的变化，为完善巨噬细胞在耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis, MDR-TB)发生和发展中的作用机制提供依据。 方法:分别建立巨噬细胞MDR- Mtb和H37Rv株感染模型，采用菌落形成单位(colony-forming unit，CFU)计数、液相芯片技术和Cholesterol Assay试剂盒分别观察MDR- Mtb对巨噬细胞吞噬和杀菌功能、分泌细胞因子[Th1因子(IL-12/23 p40、IL-27和TNF-α)、Th2因子(IL-6和IL-10)]和胆固醇代谢的影响。采用SPSS25.0软件进行统计学分析，应用均值±标准差(Mean± SD)表示，比较采用 t检验或 F检验。以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:(1)MDR- Mtb感染巨噬细胞后，胞内CFU计数逐渐增高，至感染后24 h达峰值；胞外CFU计数逐渐降低，至感染后24 h达低值。感染后48 h，胞内CFU计数较感染后24 h降低，胞外CFU计数则较感染后24 h增高( P<0.05)，均与感染后4 h相接近( P>0.05)。感染后8~48 h，MDR-TB组胞内CFU计数均低于H37Rv组，而胞外CFU计数则高于H37Rv组( P<0.05)。(2)MDR-TB组巨噬细胞上清液IL-12/23 p40、IL-27、TNF-α、IL-6和IL-10表达量均高于空白对照组( P<0.05)。与感染后4 h相比较，仅感染后24 h、48 h的TNF-α和IL-6表达量增高( P<0.05)。与H37Rv组相比较，MDR-TB组感染后48 h的IL-12/23 p40和TNF-α及感染后24 h的IL-6表达量降低，而其感染后48 h的IL-27表达量则增高( P<0.05)。(3)MDR-TB组感染后24 h、48 h胆固醇的表达量较感染后4 h降低，且低于空白对照组( P<0.05)，但与H37Rv组各时间点胆固醇表达量相接近( P>0.05)。(4)当感染后24 h MDR-TB组胞内CFU计数达峰值时，仅TNF-α表达量达峰值；当感染后48 h MDR-TB组胞内CFU计数降低时仅IL-6表达量达峰值。当感染后MDR-TB组胞内CFU计数呈现先增高后降低的趋势时，胆固醇表达量呈现降低趋势。 结论:MDR- Mtb感染巨噬细胞后可诱导其吞噬和杀菌功能，刺激相关Th1和Th2因子高表达，利用和消耗胆固醇。但此作用弱于H37Rv标准株。

报道广州医科大学附属第一医院确诊的1例 NEMO基因突变所致遗传易感性分枝杆菌病（MSMD）患儿的临床资料并进行文献复习。患儿男，16月龄，生后11个月出现反复发热，进行性呼吸窘迫、气促，确诊为原发性肺结核伴淋巴结结核，规律抗结核治疗不佳转入我院PICU。入院强化抗结核治疗并多次行支气管镜清理病灶，病情经久不愈，多次检测发现细胞因子组白细胞介素（IL）-12、γ-干扰素（IFN-γ）水平低，后经全基因二代测序： NEMO基因突变半合子突变，突变位点为C.189+4A>C（chrX；153770671），其外祖母、母亲均为杂合子突变，唯一舅舅未携带该基因。结合病例特点并检索文献分析，诊断为 MENO基因突变型MSMD。调整为HRZ+左氧氟沙星+利奈唑胺5联抗结核治疗并定期IFN-γ、丙球支持治疗后病情渐控制。MSMD是罕见疾病，其中 NEMO基因突变型发病率约为1∶250 000，常出现播散性结核感染，临床上对规范抗结核治疗仍无效者，除应考虑耐药结核杆菌外，仍应注意患者免疫水平，注意原发性免疫缺陷病可能，并尽早进行基因检测以明确诊断。

本研究旨在构建基于核酸滚环扩增（RCA）的简便快速、超灵敏的光学生物传感技术，并将其运用于结核杆菌耐药相关基因的多重检测。本研究在2020年2月至2021年5月期间，于陆军军医大学第一附属医院检验科，针对异烟肼、利福平和链霉素耐药的高频基因突变位点katG315（AGC?ACC）、rpoB531（CAC?TAC）和rpsL43（AAG?AGG），分别设计锁式探针（padlock probe，PLP）、引物和捕获探针，构建了基于磁珠的固相RCA恒温扩增反应体系，并进行了实验参数的优化。通过多色荧光探针（Cy3/Cy5/ROX）对RCA产物精准捕获与信号放大，实现了对3种突变基因的单管多重检测。进一步对该方法的灵敏度、特异性与线性范围等分析性能进行验证，结果显示同一反应体系中katG315的响应范围为1.0 pmol/L至0.1 nmol/L，rpoB531和rpsL43的响应范围为1.0 pmol/L至50.0 pmol/L和1.0 pmol/L至20.0 pmol/L，且该方法具有较好的特异度与灵敏度，在混合靶标中可精确识别单碱基突变，最低检出限低至1.0 pmol/L；在模拟血清样本的回收实验中，回收率可达95.0%~105.2%。综上，本研究构建的恒温扩增型多重检测方法可快速实现3种耐药突变位点的单管多重检测，该技术成本低廉、简便快速、不依赖大型设备，为病原体耐药基因检测提供了一种新的分析方法。

目的:探讨呼吸内镜下黏膜活检术中应用快速现场评价(ROSE)技术在儿童活动性肺结核的诊断价值。方法:回顾性分析2017年6月至2020年1月山东大学齐鲁儿童医院呼吸介入科收治的活动性肺结核40例患儿临床资料。结果:1．在40例患儿中，33例气管支气管结核，7例结核性胸膜炎，其中9例为诊断困难病例。2.气管支气管结核33例，包括24例(72.7%)干酪样坏死物破溃入管腔，9例(27.3%)黏膜肿胀、外压；支气管黏膜活检快速现场细胞学评价(C-ROSE)为肉芽肿、淋间类上皮细胞、淋巴细胞浸润改变；不同部位快速现场微生物学评价(M-ROSE)阳性不一：干酪坏死处阳性6例次(13.6%，6/44例次)，肉芽增生处阳性4例次(12.5%，4/32例次)，充血水肿处阳性2例次(22.2%，2/18例次)，黄白色坏死物处阳性0例次，病变与正常黏膜交界处阳性54例次(81.8%，54/66例次)；黏膜病理均为肉芽肿、渗出、坏死改变，其中22例结核性肉芽肿，5例特征性结核结节，11例抗酸染色阳性。3.结核性胸膜炎7例患儿，胸腔镜下为胸膜黏连严重，胸膜充血、水肿，4例临床诊断困难的病例清理黏连带后见胸膜散在分布干酪样粟粒结节；胸腔镜下活检C-ROSE以坏死、组织细胞为主要表现，见多核巨细胞，但肉芽肿少见；不同部位M-ROSE结果：粟粒样结节处阳性8例次(占80.0%)，黏连带处阳性0例次，充血水肿处阳性2例次(14.3%)；活检病理提示肉芽肿、坏死改变，其中3例特征性结核结节，2例抗酸染色阳性。4.应用下一代测序技术(NGS)和结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)检测19例患儿标本的病原微生物，其中NGS阳性7例(36.8%)，Xpert MTB/RIF阳性8例(42.1%)，NGS和Xpert MTB/RIF均阳性5例(26.3%)。结论:呼吸内镜联合ROSE技术在儿童活动性肺结核病早期诊断方面具有重要的临床指导意义。

非结核分枝杆菌（NTM）种类繁多，NTM病的发病率和患病率持续增长，而治愈率低、病死率高，且药物治疗的疗程长、不良反应多、疗效和预后欠佳，特别是耐药患者的治疗面临挑战，亟需能提高治疗成功率的新药问世。本文重点评价NTM病的治疗新药和老药新用药的抗菌活性、疗效和安全性。

目的:利用全基因组测序数据分析中国耐多药结核分枝杆菌的耐药相关基因突变谱及主要突变类型与菌株基因型的相关性。方法:查询并下载NCBI数据库中截至2019年8月公开发表的中国结核分枝杆菌全基因组测序数据，利用全基因组数据预测菌株分子药敏结果，统计不同药物耐药相关基因的突变类型，并分析耐药突变类型与菌株基因型的相关性。结果:根据分子药敏结果从2 019株菌株中鉴定出1 024株耐多药菌株，对常用抗结核药物的耐药相关基因主要突变类型分别为 katG S315T（73.2%，异烟肼）、 rpoB S450L（63.1%，利福平）、 rpsL K43R（70.0%，链霉素）、 embB M306V（37.4%，乙胺丁醇）、 pncA启动子区T（-11）C（7.9%，吡嗪酰胺）、 gyrA A90V （32.3%，氟喹诺酮类）、 rrs A1401G（67.7%，二线注射类）、 fabG1启动子区C（-15）T（87.0%，乙硫异烟胺）、 folC I43T（30.4%，对氨基水杨酸）。其中， katG S315T、 rpsL K43R、 embB M306V、 gyrA D94G在L2系菌株中的频率显著高于L4系菌株， folC I43T仅在L2系菌株中发现； katG S315T在古典北京型菌株中比例较高，而 rpsL K43R在现代北京基因型菌株中的比例更高，其差异均有统计学意义（均 P<0.05）。 结论:本研究提供了基于全基因组测序的我国耐多药结核分枝杆菌对多种常用抗结核药的耐药相关基因主要突变类型，为研发敏感、特异的快速分子检测方法提供了依据；同时也发现多种耐药相关基因主要突变类型与菌株基因型有关。