为探讨氮磷钾3种养分对有柄石韦生理及有效成分绿原酸合成积累的影响,该研究以有柄石韦组培苗为材料,分别用低养分(不施肥:N0,P0,K0)、正常施肥(N:0.20 g·kg-1,P:0.15 g·kg-1,K:0.15 g·kg-1)和高养分(N1:0.40 g·kg-1,P1:0.30 g·kg-1,K1:0.30 g·kg-1)3个浓度梯度,设置7个处理分别为NPK、N0PK、N1PK、NP0K、NP1K、NPK0、NPK1,测定不同处理下有柄石韦的抗性生理指标、绿原酸(CGA)含量及其合成关键酶活性.结果表明:(1)氮磷钾肥对有柄石韦的抗性生理有显著的影响,超氧化物歧化酶(SOD)在高氮和低钾处理中活性显著增加,而3种养分的低浓度和高浓度处理均会导致过氧化氢酶(CAT)活性显著上升.(2)不同养分水平氮、磷和钾对有柄石韦CGA含量存在显著影响,正常施肥的CGA含量最高,达到12.92 mg·g-1;高钾施肥的CGA含量最低,为7.79 mg·g-1;钾肥对CGA含量影响最显著.(3)CGA合成关键酶活性在不同施肥处理中差异显著,CGA含量与奎宁酸羟基肉桂酰转移酶(HQT)和4-香豆酰辅酶A连接酶(4CL)活性呈显著正相关,与莽草酸羟基肉酰转移酶(HCT)活性显著负相关,HQT、4CL和HCT是导致CGA含量差异的关键因素.该研究结果为有柄石韦药材的人工栽培提供了理论依据.

为了解光果金樱子(Rosa laevigata var.leiocapus)的三萜类化学成分及其抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2活性(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2),运用多种色谱分离技术从其95%乙醇提取物中分离得到15个三萜化合物.根据理化性质及波谱数据,分别鉴定为:laevigaterpene A(1)、2α,23-二羟基齐墩果酸(2)、1β-羟基蔷薇酸(3)、3β-(p-hydroxytrans-cinnamoyloxy)olean-12-en-28-oic acid(4)、3β-反式对羟基肉桂酰氧基-2α-羟基齐墩果酸(5)、2α,3α-二羟基-12-烯-28-齐墩果酸(6)、坡模酸(7)、桦木酸甲酯(8)、2α,3α,19α,23-四羟基-12-烯-乌苏酸(9)、乙酰基-11α-甲氧基-β-乳香酸(10)、阿江榄仁尼酸(11)、2α,3α,19α-trihydroxy-28-norurs-12-ene(12)、蔷薇酸(13)、2α,19α-dihydroxy-3-oxo-12-ursen-28-oic acid(14)和齐墩果酸(15).所有化合物均为首次从光果金樱子中分离获得,其中化合物4、10、12 为首次从蔷薇属植物中分离得到.化合物 8 和 15 对SARS-CoV-2 主蛋白酶(main protease,简称Mpro)具有较强的抑制作用,IC50值分别为(6.74±0.33)和(5.19±0.25)μmol/L,具有潜在的抗SARS-CoV-2活性.

目的 对黄花白及Bletilla ochracea块茎的化学成分进行研究.方法 利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、ODS反相柱色谱及HPLC等色谱方法进行分离和纯化,并通过理化性质和波谱数据分析鉴定其结构.采用体外凝血活性评价高含量化合物2和7对活化部分凝血酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)和凝血酶原时间(prothrombin time,PT)的影响.结果 从黄花白及干燥块茎的85％乙醇提取物正丁醇萃取部位中共分离得到了 8个苄酯苷类化合物,分别鉴定为1-[4'-β-D-(葡萄糖氧)苄基]-4-{4"-[β-D-葡萄糖氧-(1-2)-β-D-葡萄糖氧)]苄基}-2-异丁基苹果酸酯(1)、1,4-二-[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(2)、2-O-葡萄糖基白及苷(3)、手参苷Ⅲ(4)、4-葡萄糖氧基-肉桂酸葡萄糖氧基苄酯(5)、bleformin J(6)、天麻素(7)、4-羟基苄基β-D-吡喃葡萄糖苷(8).化合物2能显著缩短APTT和PT值.结论 其中化合物1为新化合物,命名为黄花白及苷A;化合物3～6和8为首次从该植物分离得到.化合物2具有促凝血活性.

根据已报道的刺甘草C4H基因序列(GenBank ID:D87520.1),采用RT-PCR技术克隆得到乌拉尔甘草悬浮细胞的C4H基因编码区序列,并对其进行生物信息学分析.另外,采用q-PCR方法对C4H基因受茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MeJA)诱导后的表达模式进行分析.所克隆的C4H基因编码区开放阅读框(Opening reading frame,ORF)长为1 515 bp,编码504个氨基酸.q-PCR实验证明C4H基因受MeJA的诱导,在悬浮体系添加MeJA后12h达到最高表达水平.

从毛头鬼伞子实体中萃取得到乙醇、乙酸乙酯、石油醚3种有机提取物,采用a-葡萄糖苷酶活性抑制实验对3种有机提取物的抗糖尿病活性进行评价,结果显示,乙酸乙酯提取物对α-葡萄糖苷酶有较强的抑制活性.采用柱层析技术从乙酸乙酯提取物中分离纯化出10种化合物,经核磁等方法鉴定为:(1)顺,顺-9,12-十八(碳)二烯酸;(2)顺式-9-十八烯酸;(3)(22E,24R)-麦角甾烷-5,7,22-三烯-3β醇;(4) 33-5α-6α-22E-麦角甾-7,22-双烯-3,5,6-三醇-6-亚油酸酯;(5)3β-5α-6α-22E-麦角甾-7,22-双烯-3,5,6-三醇-6-油酸酯;(6)邻苯二甲酸二异丁酯;(7)对羟基苯乙醇;(8)4-羟基苯乙基乙酸酯;(9) 3-(4-羟基-3-甲氧苯基)败脂酸;(10)N-反式-3,4亚甲二氧基肉桂酰基-3-甲氧基酪胺.对分离化合物的α-葡萄糖苷酶活性抑制实验结果显示,N-反式-3,4亚甲二氧基肉桂酰基-3-甲氧基酪胺对α-葡萄糖苷酶具有较强的抑制活性,其ICs0值为4.17mg/mL.

目的:基于网络药理学筛选中药葛根抗高脂蛋白血症的活性成分,预测葛根抗高脂蛋白血症的潜在作用靶点及信号通路,探讨其作用机制.方法:采用TCM数据库收集葛根的化学成分;采用Drugbank数据库基于结构相似性原理,筛选与葛根药效分子结构相似的药物,并预测其作用靶点;采用OMIM数据库筛选高脂蛋白血症的相关蛋白.借助STRING数据库和Cytoscape 3.6.0软件构建疾病蛋白-靶点网络、药物活性成分-靶点-疾病蛋白网络.通过网络拓扑分析和聚类分析法预测葛根治疗高脂蛋白血症的关键蛋白.通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)对靶点进行通路富集分析,预测葛根抗高脂蛋白血症的关键信号通路.结果:葛根抗高脂蛋白血症的主要活性成分有7种,即4-甲氧基葛根素、黄豆苷、大豆黄素4'-7二葡萄糖苷、蝙蝠葛碱、γ-谷甾醇和甲基对羟基肉桂.葛根治疗高血蛋白脂症有20个潜在作用靶点,即酪氨酸蛋白激酶(Src)、核因子κB(NF-κB)、过氧化物体增殖物激活受体(PPARs)、雌激素受体α(Esr1)、芳香烃受体(AHR)、载脂蛋白A(APOAⅠ、APOAⅡ、APOAⅤ)、载脂蛋白B(APOB)、载脂蛋白C(APOCⅠ、APOCⅡ)、载脂蛋白E(APOE)、低密度脂蛋白受体(LDLR)、脂蛋白脂肪酶(LPL)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、溶血磷脂酸(LPA)、糖基磷脂酰肌醇高密度脂蛋白结合蛋白1(GPIHBP1)、纤维蛋白原A(FGA)、细胞色素P450(Cyp158A2)和雄激素受体(AR).KEGG通路有8条,主要是PPAR信号转导通路.结论:采用网络药理学筛选出葛根治疗高脂蛋白血症的7种可能的药效分子,通过活性成分-靶点-疾病网络特征分析,得到20个潜在治疗靶点和8条相关通路,借此预测葛根可能通过PPARs、AR、LDLR等受体和相关蛋白调节胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白(LDL)的代谢,以发挥抗高脂蛋白血症的作用.

目的 分析光、暗培养的杜仲愈伤组织转录组测序结果,验证杜仲愈伤组织转录组测序结果中与类黄酮合成相关基因的表达水平.方法 利用Illumina HiSeqTM 2500测序平台对光暗培养的2种杜仲愈伤组织进行转录组高通量测序,利用Trinity软件对测序结果进行De novo组装,使用BLAST软件将Unigenes序列与NR、Swiss-Prot、GO、COG、KOG、KEGG、Pfam等数据库比对,利用FPKM值估算基因表达丰度,利用qRT-PCR验证与类黄酮合成相关基因的表达水平.结果 杜仲愈伤组织转录组测序共获得13.00 Gbp的clean data.De novo组装后共获得62 030条Unigenes,平均长度为736.40 bp.使用BLAST软件将Unigenes序列与相关数据库比对,共获得25 417条Unigenes的注释结果.其中,25 167条Unigenes注释到Nr.4 794条Unigenes和它们相关的酶(enzyme commission numbers)注释到82条KEGG通路.共获得差异表达基因1 986条.在白光(光强为12 000 lx,16h光照,8h黑暗)培养的愈伤组织中,有1 139条基因表达上调,847条基因表达下调.在KEGG富集分析中发现,有7个Unigenes与类黄酮合成相关,其中有6个Unigenes在白光培养的杜仲愈伤组织中上调表达,它们编码的酶分别为查耳酮异构酶(EC 5.5.1.6,chalcone isomerase,CHI),查耳酮合成酶(EC 2.3.1.74,chalcome synthase,CHS),类黄酮3'-羟化酶(EC l.14.13.21,flavonoid 3'-monooxygenase,F3'H),反肉桂酸4-单加氧酶(EC l.14.13.11,trans-cinnamate 4-monooxygenase,CYP),黄酮醇合成酶(EC l.14.11.23,flavonol synthase,FLS),莽草酸邻羟基肉桂转移酶(EC 2.3.1.133,shikimate-O-hydroxycinnamoyl transferase,HQT).1个Unigene下调表达,它编码的酶为无色花青素加氧酶(EC 1.14.11.19,leucocyanidin oxygenase,LDOX).qRT-PCR分析表明,与类黄酮合成相关的7个Unigenes的表达情况与转录组测序分析结果是一致的.结论 白光条件(光强为12 000 lx,16h光照,8h黑暗)可以促进类黄酮代谢途径中相关化合物的积累.

采用多种柱色谱技术和半制备高效液相色谱等方法对南方灵芝子实体乙醇提取物乙酸乙酯萃取部分中化合物进行分离纯化, 通过波谱数据鉴定其结构, 并检测化合物α-糖苷酶抑制活性和DPPH自由基清除活性.结果分离得到8个化合物, 分别鉴定为6-methoxyl-cyclo- (Phe-Ile) (1) 、applanoxidic acid A methyl ester (2) 、麦角甾-7, 22E-二烯-3β-醇 (3) 、肉桂酸 (4) 、5α, 8α-过氧桥麦角甾-6, 22E-二烯-3β-醇 (5) 、3, 4-二羟基苯乙酮 (6) 、水杨酸 (7) 、苯甲酸 (8) .其中化合物1为1个新的环二肽化合物, 化合物2为1个羊毛甾新天然产物, 化合物4, 6, 7和8首次从南方灵芝中分离得到.活性测定结果表明化合物4和8对α-糖苷酶具有抑制活性, 其抑制率分别为36.8％, 34.7％, 化合物4, 7和8具有一定的DPPH自由基清除活性, 其IC50分别为0.168, 0.458, 0.170 g·L-1, 化合物1的DPPH自由基清除率为41.1％.

目的 探究淹水胁迫对杭菊绿原酸合成途径中的关键酶香豆酰基喹酸酯3'-单加氧酶(C3'H)和莽草酸羟基肉桂酰基转移酶(HCT)基因的表达和活性成分的影响.方法 使用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)方法基于杭菊转录组数据库克隆HCT和C3'H基因各2个,其中C3'H酶的2个基因CmC3'H1、CmC3'H2,HCT酶的2个基因CmHCT1、CmHCT2,并进行生物信息学分析;同时在杭菊花芽分化期进行淹水胁迫,以β-actin为内参基因,使用qRT-PCR检测以上4个基因的相对表达量;然后使用HPLC法测定杭菊这4个基因的下游产物及其他指标成分含量.结果 通过研究获得了4条基因的完整开放阅读框,并且预测其氨基酸序列的相对分子质量和理论等电点(pI),同时构建蛋白质三级结构模型.qRT-PCR结果显示在花芽分化期对杭菊进行持续3d的淹水处理会导致以上4个基因在不同生长时期内的表达显著变化.HPLC结果显示淹水处理后的杭菊C3'H和HCT所催化形成的下游产物绿原酸含量显著高于对照组,同时发现其他2种指标成分木犀草苷和3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量也显著高于对照组.结论 杭菊在淹水胁迫下可以通过调节4种基因的表达来调控下游产物的合成,从而对淹水胁迫做出应答,而且花芽分化期进行淹水胁迫可以显著增强杭菊活性成分的积累.

目的 对海洋真菌Aspergillus sp.SCS-KFD66发酵液中次级代谢产物进行分离鉴定,并测定其生物活性.方法 采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱等技术对化合物进行分离纯化;运用多种波谱方法对分离所得化合物进行结构鉴定;分别采用DPPH法、Ellman比色法和PNPG法对化合物的自由基清除能力、乙酰胆碱酯酶抑制活性及α-葡萄糖苷酶抑制活性进行测试;采用96孔板微量法测定所得化合物对大肠杆菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、单增李斯特菌Listeria monocytogenes的抑制活性及最小抑菌浓度.结果 从海洋真菌Aspergillus sp.SCS-KFD66发酵液中分离得到13个化合物,分别鉴定为3-epi-trans-4-hydroxylinalool-3,6-oxide(1)、trans-4-hydroxylinalool-3,6-oxide (2)、芦荟大黄素(3)、大黄素(4)、6-羟基芦荟大黄素(5)、原儿茶醛(6)、2,5-二羟基苯甲醛(7)、对羟基苯乙酸甲酯(8)、对羟基苯甲酸(9)、对羟基苯乙酸(10)、2-(4-羟苯基)乙醇(11)、对羟基反式肉桂酸(12)、反式阿魏酸(13).活性测试结果表明化合物1、6、7、9～13都具有清除自由基活性,化合物4和6具有乙酰胆碱酯酶抑制活性,化合物6和7具有α-葡萄糖苷酶抑制活性;化合物4具有金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌抑制活性,MIC值分别为16、64 μg/mL;化合物6具有抑制大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和单增李斯特菌活性,MIC值分别为64、128和128 μg/mL.结论 分离得到12个己知化合物和1个新化合物,其中化合物1为新化合物,命名为曲霉呋喃醇.