目的:了解云南松鼠是否携带鼠疫噬菌体，并探讨其流行病学意义。方法:2015 - 2018年，在云南鼠疫疫源地和非疫源地的5个调查点进行鼠疫宿主动物调查。对调查中捕获的松鼠，取其脾、肝、肠道标本，低温保存备用。取肠道标本磷酸盐缓冲液（PBS）增菌液，经0.22 μm滤膜滤过后加入到含有100 μl鼠疫疫苗株（EV76）菌悬液的LB液体培养基中，28 ℃、220 r/min恒温气浴振荡培养18~24 h，采用双层平板法观察噬菌斑的生长情况，电镜下观察鼠疫噬菌体的形态结构；同时取脾、肝、肠道标本进行鼠疫菌特异标志基因caf1检测。结果:共捕获到10只松鼠，其中赤腹松鼠8只，珀氏长吻松鼠2只。共分离出4株鼠疫噬菌体，其中在赤腹松鼠分离出2株，在珀氏长吻松鼠分离出2株；家鼠鼠疫疫源地弥勒县和新平县各分离出1株，野鼠鼠疫疫源地剑川县和洱源县未分离出，非鼠疫疫源地永善县分离出2株。肉眼下观察，家鼠鼠疫疫源地分离出的2株噬菌体产生的噬斑为透明状，生长状态良好；非鼠疫疫源地分离出的2株噬菌体产生的噬斑为半透明状，生长状态欠佳。电镜下观察，噬菌体为较典型的肌尾噬菌体，噬菌体头部直径约40 nm，肌尾约120 nm，肌尾末梢可见尾丝簇。10份松鼠脾、肝、肠道标本caf1检测均为阴性。结论:云南松鼠中携带鼠疫噬菌体的比例较高，虽然鼠疫菌特异标志基因caf1检测均为阴性，但由于鼠疫噬菌体的存在，松鼠有可能成为鼠疫菌传播的一种载体。

目的:了解云南省大臭鼩携带鼠疫噬菌体情况，探讨其流行病学意义。方法:2015 - 2018年，在云南省家鼠鼠疫历史疫源地、新增疫源地（1982年后）和顽固疫源地的10个调查点进行鼠疫宿主动物调查。利用大臭鼩的肠道标本分离培养鼠疫噬菌体，采用双层平板法观察噬菌斑的生长情况，电镜下观察鼠疫噬菌体的形态结构，同时检测肠道标本鼠疫耶尔森菌特异标识基因F1抗原结构基因caf1。结果:共捕获大臭鼩157只，分离出16株鼠疫噬菌体，总分离率为10.19%；历史疫源地（10.00%，1/10）与顽固疫源地（16.22%，12/74）、新增疫源地（4.11%，3/73）的鼠疫噬菌体分离率比较差异均无统计学意义（χ 2 = 0.00， P = 0.965；Fisher检验， P = 1.000），而顽固疫源地与新增疫源地鼠疫噬菌体分离率比较差异有统计学意义（χ 2 = 5.88， P = 0.015）；不同性别、生长发育期和生境鼠疫噬菌体的分离率比较差异均无统计学意义（均 P > 0.05）；分离噬菌体的噬菌斑形态表现多样；电镜下显示4株噬菌体均为肌尾病毒科噬菌体；所有标本F1抗原结构基因caf1检测均为阴性。 结论:大臭鼩在云南省家鼠鼠疫疫源地分布广泛，且该动物携带一定数量的鼠疫噬菌体。定期对大臭鼩及其携带噬菌体进行监测，对云南省鼠疫监测预警有一定的指导意义。

[目的]筛选并分离出能裂解肠侵袭性大肠埃希菌噬菌体,分析其生物学特性,并探究其对污染猪肉的杀菌作用.[方法]采用双层平板法分离鉴定噬菌体,并测定其最佳感染复数,一步生长曲线等,对其基因组进行测序分析以及裂解功效的测定.[结果]从医院污水中分离鉴定能特异裂解肠侵袭性大肠埃希菌(Enteroinvasive Escherichia coli,EIEC)的噬菌体并命名为DK-13,其呈典型的蝌蚪状外形,包含一个正二十面体的头部和一个可收缩的螺旋对称的尾部,属于肌尾噬菌体科(Myoviridae)噬菌体;生物学特性表明:最佳感染复数为 0.01,潜伏期约为 10 min,裂解期约为 70 min,噬菌体DK-13 能在 50℃,pH 5.0-10.0 条件下存活.全基因组测序表明,噬菌体基因组长约 172 275 bp,GC含量为 40.18%,预测其共有 293 个开放阅读框(open reading frames,ORF),未发现已知耐药基因和毒力基因.应用试验表明:被污染的猪肉中表现的杀菌效果良好,宿主菌的数量明显减少.[结论]分离并鉴定一株新的烈性噬菌体DK-13,DK-13 具有潜伏期短、裂解效率高等优势,在食品安全方面具有很大应用潜力.

[背景]抗生素耐药问题是影响人类及养殖业健康的重要因素,噬菌体能特异性裂解细菌,成为抗生素替代品研究热点,是解决抗生素耐药难题、促进养殖业健康发展的新途径.[目的]通过研究绒山羊源大肠杆菌烈性噬菌体φPTK(phage target of K1)的分子生物学特性,同时利用小鼠感染模型研究φPTK对小鼠大肠杆菌感染的防治效果,为绒山羊大肠杆菌病的防控提供新策略.[方法]用聚乙二醇-氯化钠(PEG 8000-NaCl)浓缩φPTK后,采用透射电子显微镜观察其超微形态结构;运用苯酚-氯仿法提取 φPTK 核酸后通过 Illumina HiSeq 高通量测序分析其全基因组结构,使用Mauve比较基因组学分析,通过MEGA绘制噬菌体进化树;通过构建小鼠感染模型分析φPTK对小鼠感染大肠杆菌的防治效果.[结果]透射电镜显示φPTK头部为正多面体形,直径 90 nm,有长约 112 nm、直径约 18 nm的可收缩长尾;φPTK基因组全长 169688 bp,GC含量 37.72%,有264 个开放阅读框,含穿孔素-裂解酶(holin-lysin)裂解系统,有抗穿孔素蛋白和裂解抑制辅助蛋白,未发现抗生素耐药基因和毒力基因;比较基因组分析表明,φPTK为一株新的绒山羊源大肠杆菌烈性噬菌体;小鼠大肠杆菌感染前和感染后分别使用φPTK进行预防和治疗的试验表明,未使用φPTK的阳性对照组小鼠全部死亡,预防组和治疗组小鼠存活率分别为 80%和 60%.[结论]噬菌体φPTK是一株能够在小鼠大肠杆菌感染中具有较好预防效果的有尾噬菌体目(Caudovirales)肌尾噬菌体科(Myoviridae)绒山羊源大肠杆菌烈性噬菌体,本研究为绒山羊噬菌体生物制剂的创制奠定了基础.

目的 从医院废水中筛选并鉴定铜绿假单胞菌烈性噬菌体,表达和优化其裂解酶.方法 以收集的临床铜绿假单胞菌为宿主菌,分离纯化烈性噬菌体,并深入鉴定其中一株裂解能力强的广谱噬菌体的生物学特性,分析其基因组特征和进化特征,表达和改造噬菌体裂解酶,测定噬菌体与抗生素的协同杀菌作用以及不同穿膜辅助剂对于裂解酶杀菌活性的影响.结果 噬菌体vB_PaeM-YQ78是一株新的铜绿假单胞菌肌尾噬菌体,潜伏期为10 min,裂解量为43;最佳感染复数为0.00001;在40℃以下和pH 5～10范围内保持稳定.噬菌体与环丙沙星具有较强的协同作用,在24 h内无突变菌株生长.不使用穿膜辅助剂时,裂解酶LysYQ78在1 h内能将多重耐药铜绿假单胞菌降低1个log单位,在添加5 mmol/LEDTA时,LysYQ78可以将细菌浓度降低6个log单位.将ApoE蛋白N端穿膜肽融合到LysYQ78的N端后,Lys1410-YQ78的杀菌活性得到显著提高,可以在1 h内将宿主菌浓度降低2个log单位.结论 本实验分离鉴定了一株新的铜绿假单胞菌烈性噬菌体,其具有较宽的宿主谱,与环丙沙星具有较强的协同作用.并且,其裂解酶本身就可以穿透细胞外膜,展现杀菌活性,而与穿膜肽融合后,杀菌活性得到显著增强.本实验的裂解酶改造为进一步优化提供了思路,为将来铜绿假单胞菌的噬菌体治疗提供新的选项.

目的 以污水中分离的大肠杆菌噬菌体(Escherichia coli phage,ECP)和金黄色葡萄球菌噬菌体(Staphylococcus aureus phage,SAP)作为研究对象,初步分析其生物学特性,为研究噬菌体应用提供新的实验材料.方法 采用双层琼脂法纯化 ECP和 SAP,利用扫描电镜观察形态特征,通过最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)实验、一步生长曲线实验、温度、pH、氯仿及紫外线敏感性实验进行生物学特性分析.结果 根据形态将两种噬菌体归为肌尾噬菌体科,最佳MOI均为 10-1,均对紫外线具有较强的抵抗力.ECP和SAP的潜伏期分别为 20 min和 10 min,子代噬菌体裂解量分别为 76.3 PFU/cell和 8.3 PFU/cell.ECP对温度耐受范围较宽,能在 30～50℃稳定存活,而 SAP 对温度较敏感,在 50℃的条件下,作用 1h,即可完全失活;ECP在pH 为 5～11 的范围内,SAP在pH 为 6～9 的范围内维持较好的裂解活性;ECP 对氯仿具有较强的耐受性,为无囊膜型噬菌体,而 SAP 对氯仿较敏感,为囊膜型噬菌体.结论 ECP和 SAP均为烈性噬菌体,对紫外线有较强的抵抗力;ECP 的裂解性、对温度、pH 及氯仿的耐受性均强于SAP.

[背景]产肠毒素大肠杆菌K99是引起仔猪腹泻的主要致病菌之一,目前对该病的治疗主要依赖于抗生素,但大量抗生素的长期使用造成了病原菌耐药性的增强,亟待寻求一种新的产品来解决这一问题.[目的]以一株产肠毒素大肠杆菌K99为宿主菌,从畜禽粪水中分离噬菌体并对其基本生物学特性进行研究,同时在小鼠上检验噬菌体对小鼠大肠杆菌感染的防治效果.[方法]双层平板法分离筛选烈性噬菌体并观察噬菌斑形态;纯化后进行电镜观察、核酸类型鉴定;测定噬菌体热稳定性、pH稳定性、最佳感染复数及一步生长曲线;通过小鼠体内实验检测噬菌体对小鼠大肠杆菌感染的防治效果.[结果]从畜禽粪水中分离出1株产肠毒素大肠杆菌K99强裂解性噬菌体,命名为ΦK99-1,经电镜观察及核酸类型鉴定,应属于肌尾噬菌体科(Myoviridae).噬菌体能耐受50℃左右的高温,在pH 3.0-10.0范围内效价稳定.最佳感染复数为0.000 01,暴发量为108 333 PFU/cell;运用噬菌体ΦK99-1预防和治疗小鼠产肠毒素大肠杆菌K99感染,结果显示小鼠发病症状较阳性对照组明显减轻,小鼠血液内大肠杆菌K99含量也显著低于阳性对照组,通过病理切片观察显示脏器发病情况也较阳性对照组减轻.[结论]ΦK99-1是一株在不同温度、不同酸碱性环境中有较强适应能力,且在小鼠大肠杆菌感染上表现出良好防治效果的裂解性肌尾科大肠杆菌噬菌体.

目的 从鸡粪便中分离裂解性空肠弯曲菌噬菌体,研究其生物学特性,为治疗和防控空肠弯曲菌感染奠定基础.方法 以空肠弯曲菌NCTC 11168为宿主菌,采用双层平板法从鸡粪便中分离空肠弯曲菌噬菌体,并测定其噬菌斑、遗传物质、裂解谱、最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱和热稳定性等生物学特性.结果 分离得到空肠弯曲菌噬菌体CP7,其噬菌斑直径约为1～2mm,清晰透明,边缘光滑,无晕环.CP7裂解能力较强,能裂解13株空肠弯曲菌分离株.电镜观察噬菌体属于肌尾噬菌体属,具有典型的弯曲菌噬菌体的终端泡和空头,有一直径80nm的正多面体对称头部,一长约100nm、宽15nm的尾部,有肌鞘并可发生收缩.CP7的遗传物质为ds DNA,能被限制性内切酶HindⅢ、HhaⅠ、DraⅠ、EcoRV和Taq Ⅰ切开,属于Ⅲ组空肠弯曲菌噬菌体,基因组大小约为140kb.结论 CP7为裂解性噬菌体,裂解能力较强,对不同温度、pH也有较强的适应能力,具有开发为空肠弯曲菌抑菌制剂的潜力.

以金黄色葡萄球菌为宿主菌,从奶牛场废水样品中分离到两株烈性噬菌体,分别命名为p h iSA_BS1和phiSA_BS2.电子显微镜观察显示其头部呈多面体对称,有伸缩性尾部.对这两株噬菌体的一步生长曲线、温度耐受性和pH耐受性进行研究,发现两者均裂解3株金黄色葡萄球菌,但不能裂解1株表皮葡萄球菌.进一步分析它们的全基因组序列,发现phiSA_BS1基因组大小为142978 bp,GC含量为29.80％,预测到201个开放读码框(open reading frame,ORF),未预测到tRNA基因;phiSA_BS2基因组大小为149230 bp,GC含量为29.61％,预测到210个ORF和1个tRNA基因.系统发育分析表明,这两株噬菌体同属肌尾噬菌体科,属于新的金黄色葡萄球菌噬菌体,可能为治疗金黄色葡萄球菌相关的奶牛乳腺炎提供新的方法.

目的 通过分离鉴定鲍曼不动杆菌噬菌体并进行遗传信息分析,为今后噬菌体用于治疗鲍曼不动杆菌引起的感染提供依据.方法 以鲍曼不动杆菌临床分离株为宿主菌,从医院污水中分离鲍曼不动杆菌噬菌体并进行纯化、电镜观察形态特征、提取噬菌体DNA,进行全基因组测序,分析全基因组的结构特征,比较基因组分析其进化关系.结果 分离到鲍曼不动杆菌裂解性噬菌体LZ35,电镜观察显示,该噬菌体属于有尾噬菌体目肌尾病毒科.基因组全长44 885 bp,G+C含量为37.95％,含有83个开放阅读框,其中22个编码序列可预测其功能,61个编码序列为未知基因.噬菌体LZ35的基因组与鲍曼不动杆菌噬菌体IME-AB2和YMC-13-01-C62具有很高的同源性(分别为97％和99％),与鲍曼不动杆菌噬菌体YMC11/12/R1215的进化关系最近.结论 以鲍曼不动杆菌临床分离株为宿主菌,分离到鲍曼不动杆菌裂解性噬菌体LZ35,明确了其形态和基因组特征,为防治噬菌体疗法奠定基础.