目的:了解云南松鼠是否携带鼠疫噬菌体，并探讨其流行病学意义。方法:2015 - 2018年，在云南鼠疫疫源地和非疫源地的5个调查点进行鼠疫宿主动物调查。对调查中捕获的松鼠，取其脾、肝、肠道标本，低温保存备用。取肠道标本磷酸盐缓冲液（PBS）增菌液，经0.22 μm滤膜滤过后加入到含有100 μl鼠疫疫苗株（EV76）菌悬液的LB液体培养基中，28 ℃、220 r/min恒温气浴振荡培养18~24 h，采用双层平板法观察噬菌斑的生长情况，电镜下观察鼠疫噬菌体的形态结构；同时取脾、肝、肠道标本进行鼠疫菌特异标志基因caf1检测。结果:共捕获到10只松鼠，其中赤腹松鼠8只，珀氏长吻松鼠2只。共分离出4株鼠疫噬菌体，其中在赤腹松鼠分离出2株，在珀氏长吻松鼠分离出2株；家鼠鼠疫疫源地弥勒县和新平县各分离出1株，野鼠鼠疫疫源地剑川县和洱源县未分离出，非鼠疫疫源地永善县分离出2株。肉眼下观察，家鼠鼠疫疫源地分离出的2株噬菌体产生的噬斑为透明状，生长状态良好；非鼠疫疫源地分离出的2株噬菌体产生的噬斑为半透明状，生长状态欠佳。电镜下观察，噬菌体为较典型的肌尾噬菌体，噬菌体头部直径约40 nm，肌尾约120 nm，肌尾末梢可见尾丝簇。10份松鼠脾、肝、肠道标本caf1检测均为阴性。结论:云南松鼠中携带鼠疫噬菌体的比例较高，虽然鼠疫菌特异标志基因caf1检测均为阴性，但由于鼠疫噬菌体的存在，松鼠有可能成为鼠疫菌传播的一种载体。

目的:了解云南省大臭鼩携带鼠疫噬菌体情况，探讨其流行病学意义。方法:2015 - 2018年，在云南省家鼠鼠疫历史疫源地、新增疫源地（1982年后）和顽固疫源地的10个调查点进行鼠疫宿主动物调查。利用大臭鼩的肠道标本分离培养鼠疫噬菌体，采用双层平板法观察噬菌斑的生长情况，电镜下观察鼠疫噬菌体的形态结构，同时检测肠道标本鼠疫耶尔森菌特异标识基因F1抗原结构基因caf1。结果:共捕获大臭鼩157只，分离出16株鼠疫噬菌体，总分离率为10.19%；历史疫源地（10.00%，1/10）与顽固疫源地（16.22%，12/74）、新增疫源地（4.11%，3/73）的鼠疫噬菌体分离率比较差异均无统计学意义（χ 2 = 0.00， P = 0.965；Fisher检验， P = 1.000），而顽固疫源地与新增疫源地鼠疫噬菌体分离率比较差异有统计学意义（χ 2 = 5.88， P = 0.015）；不同性别、生长发育期和生境鼠疫噬菌体的分离率比较差异均无统计学意义（均 P > 0.05）；分离噬菌体的噬菌斑形态表现多样；电镜下显示4株噬菌体均为肌尾病毒科噬菌体；所有标本F1抗原结构基因caf1检测均为阴性。 结论:大臭鼩在云南省家鼠鼠疫疫源地分布广泛，且该动物携带一定数量的鼠疫噬菌体。定期对大臭鼩及其携带噬菌体进行监测，对云南省鼠疫监测预警有一定的指导意义。

鼠疫噬菌体（ Yersinia pestis phage）是一种寄生于鼠疫耶尔森菌（鼠疫菌）内，且能特异性裂解鼠疫菌的病毒。受体结合蛋白（receptor binding protein，RBP）是噬菌体侵染宿主菌的吸附位点，包括细胞外膜蛋白、脂多糖、磷壁酸、菌毛、鞭毛、荚膜多糖等。其中细胞外膜蛋白和脂多糖是鼠疫噬菌体的受体。RBP在鼠疫噬菌体侵染鼠疫菌的过程中起决定性作用。因此，总结和分析鼠疫噬菌体分类、鼠疫噬菌体受体鉴定及结构的研究进展，有助于从分子层面了解鼠疫噬菌体的裂解机制及与鼠疫菌的相互作用方式，为深入研究鼠疫噬菌体受体提供帮助。

目的:了解重症腺型鼠疫临床表现及预后情况，探讨重症腺型鼠疫病例救治经验。方法:对2019年11月11日化德县收治的1例重症腺型鼠疫患者的临床资料、救治经过进行回顾分析。结果:该患者为55岁男性，于鼠疫疫源地捕食野兔后发病；临床表现为发热，乏力，左侧腋下皮肤硬、肿、热、痛，后期淋巴结肿大明显，呃逆及胸腔积液；实验室检查显示弥散性血管内凝血（DIC）、脓毒症、多脏器功能障碍；入院第3天经鼠疫菌培养、鼠疫噬菌体裂解试验阳性确诊为腺型鼠疫。确诊后给予血小板、血浆、液体复苏、链霉素联合莫西沙星等治疗后，纠正DIC，多脏器功能恢复正常，硬肿消退；疗程共19 d，体温恢复正常并达到痊愈。结论:本例患者是以淋巴管炎、皮肤硬肿、凝血异常为主要表现的重症腺型鼠疫病例；及时识别、评估以及早期、联合治疗是救治成功的关键。

目的 对青海省同仁县喜马拉雅旱獭血清中鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)相关抗体进行检测,为鼠疫流行病学调查和鼠疫菌在自然界保存机制研究提供参考依据.方法 以 2021 年青海省同仁县采集的 200 份喜马拉雅旱獭血清为样本,利用鼠疫间接血凝试验检测旱獭血清中鼠疫菌F1 抗体;以青藏高原鼠疫疫源地分离的 1 株野生型鼠疫噬菌体 476 和实验室诊断用鼠疫噬菌体作为抗原,利用微量板法和双层琼脂平板法检测旱獭血清中的特异性鼠疫噬菌体免疫抗体.结果 喜马拉雅旱獭血清中鼠疫菌F1 抗体检测结果为阴性;2株鼠疫噬菌体分别与 200 份喜马拉雅旱獭血清进行中和试验,通过点滴法均未检测到与鼠疫噬菌体抗原反应的特异性噬菌体免疫抗体.结论 青海省同仁县喜马拉雅旱獭血清中既未发现鼠疫菌F1 抗体,也未发现特异性鼠疫噬菌体抗体,二者均间接说明同仁县采样地点的鼠疫疫源地正处于静息期状态.

目的 采用两种微量法检测青海高原野生型鼠疫噬菌体的宿主谱,为今后噬菌体生态学研究和基于宿主范围噬菌体分类研究提供科学依据.方法 基于OmniLogTM微生物鉴定系统微量法和微量点滴法,检测3株鼠疫噬菌体对2株鼠疫耶尔森菌(鼠疫疫苗株EV76、614F)和4株非鼠疫耶尔森菌(假结核耶尔森菌PTB3、PTB5、大肠杆菌V517、小肠结肠炎耶尔森菌52302-2)的裂解情况.结果 476号、087号和072204号鼠疫噬菌体均能成功感染鼠疫疫苗株EV76、614F并依赖其生长繁殖,且基于OmniLogTM系统33 ℃培养48 h也能够观察到试验孔中四唑类染料颜色随着噬菌体数量的增加和宿主菌数量的减少而变淡.利用微量点滴法检测3株鼠疫噬菌体对4株非鼠疫耶尔森菌敏感性结果显示,28 ℃和37 ℃时476号鼠疫噬菌体对假结核耶尔森菌PTB5敏感,而087号和072204号对其不敏感;476号、087号和072204号鼠疫噬菌体对假结核耶尔森菌PTB3、大肠杆菌V517、小肠结肠炎耶尔森菌52302-2这3株非鼠疫耶尔森菌均不敏感,且基于OmniLogTM系统观察到试验孔与对照孔中细菌生长曲线和四唑类染料颜色分别呈现相似对应的结果.然而,以鼠疫疫苗株EV76、614F为宿主菌,37℃时072204号鼠疫噬菌体微量点滴于固体培养基上不显示噬菌斑.结论 基于OmniLogTM检测系统的噬菌体宿主范围测定法可以作为一种替代传统检测宿主谱的测定方法,在噬菌体与宿主菌相互作用研究中具有较好的应用价值.

目的 筛选抗低钙应答V抗原(LcrV)的人源单克隆抗体,分析抗体基因特点,检测抗体与抗原结合的特异性、亲和力及功能.方法 使用PCR方法从鼠疫疫苗临床试验志愿者外周血细胞cDNA扩增抗体轻、重链可变区基因片段,构建ScFv噬菌体抗体文库.用LcrV对文库进行富集筛选,将获得的抗体基因表达成人IgG1后,测定抗体与LcrV抗原结合的特异性、亲和力、免疫调节功能以及保护能力.结果 成功构建了鼠疫耶尔森菌人源ScFv抗体文库,库容量为7.54× 108.抗体文库经LcrV筛选后获得了 3株抗LcrV抗体,命名为RV-B4、RV-D1和RV-E8.3株抗体重链为VH1-46和VH3-30,轻链分别为VL1-51、VK3-20和VK1-39.3株抗体经ELISA及Western blot验证均与LcrV特异性结合,其与V抗原结合的解离常数(KD)分别为2.1 nmol/L、1.24 nmol/L和42 nmol/L.RV-D1体外降低人THP-1分泌TNF-α,动物攻毒试验中未发现抗LcrV抗体的保护效果.结论 从鼠疫疫苗免疫人群获得了靶向低钙应答V抗原的人源抗体,以结合抗体为主,不能有效阻断病菌感染.所获得的单抗为鼠疫免疫基础研究、鼠疫诊断应用提供了候选材料.

目的 调查分析内蒙古自治区乌海市长爪沙鼠鼠疫疫源地2013-2022年长爪沙鼠密度、鼠类种类构成变化及鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)携带情况,为鼠疫监测和防控工作提供科学依据.方法 长爪沙鼠密度监测采用公顷夹日法,夜行鼠密度监测采用5 m夹线法,扩大检索采用逐日捕鼠法和主动踏查法,实验室采用显微镜涂片检查、细菌培养、噬菌体试验、间接血凝试验、反向血凝试验、PCR检测核酸方法检测鼠疫菌,采用描述性流行病学方法进行统计分析.结果 2013-2022年,公顷夹日法调查显示乌海市鼠疫疫源地长爪沙鼠平均鼠密度为0.65只/hm2;3种方法共捕鼠9种839只(含主动踏查收捡的2只自毙鼠),其中长爪沙鼠为优势鼠种,占57.21％;2020年检出鼠疫菌2株,PCR核酸检测鼠疫菌阳性2份,其他年份未检出阳性.结论 预计乌海市海南区长爪沙鼠鼠疫疫源地今后几年将处于弱流行期,但仍应持续加强鼠及鼠疫监测预警,加强疫源地内新建企业员工和农牧民的鼠疫健康教育和行为干预,及时发现动物间鼠疫疫情,防止人间鼠疫的发生.

鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌、假结核耶尔森菌均为致病性耶尔森菌,它们的感染均会引起严重的临床症状,曾对人类的生产生活造成过严重影响,且目前已在各种生物样本、环境样本中发现.因此,高效准确地检测这3种致病性耶尔森菌显得尤为重要.该文从免疫学、分子生物学、噬菌体检测等方面综述了近年来致病性耶尔森菌检测技术的研究进展.

目的 观察野生型鼠疫噬菌体在不同实验培养环境中的生长表型特征,为后续噬菌体的生物学特性鉴定及其与宿主菌相互作用研究提供科学依据.方法 利用液体培养法、固体培养法和基于OmniLogTM微生物鉴定系统的微量液体培养法检测3株野生型鼠疫噬菌体的生长情况.结果 基于LB液体培养基的生长结果显示,鼠疫噬菌体476号经28℃和37℃作用20～24 h后生长状况优于37℃培养的鼠疫噬菌体087号和072204号,37℃培养的鼠疫噬菌体087号优于072204号.以鼠疫疫苗株EV76为宿主菌,鼠疫噬菌体476号在双层琼脂培养基上经28℃和37℃培养20～24h后产生较为清晰的噬菌斑;鼠疫噬菌体087号和072204号经37℃培养20～24 h后在双层琼脂培养基上产生不透明的噬菌斑.基于OmniLog TM系统微量液体培养法的生长结果显示,3株鼠疫噬菌体经33℃裂解鼠疫疫苗株EV76时,通过96孔微量板曲线图显示第1列出现横线,且峰值不超过100,随着噬菌体数量的降低,稀释试验孔依次均出现与鼠疫疫苗株EV76相似的生长曲线,实验孔中四唑类染料颜色随着噬菌体数量的减少和宿主菌数量的增多而逐渐加深.由此说明鼠疫噬菌体476号在28℃和37℃均裂解鼠疫疫苗株EV76;鼠疫噬菌体087号和072204号在37℃均裂解鼠疫疫苗株EV76.结论 3株野生型鼠疫噬菌体的裂解能力具有温度依赖性,3种实验条件下的生长结果一致.