目的 探讨幽门螺杆菌感染与青光眼的相关性.方法 选择2014年1月-2015年12月医院眼科原发性开角型青光眼患者60例为开角型青光眼组、原发性闭角型青光眼患者60例为闭角型青光眼组、性别及年龄相匹配的健康体检者60名为对照组;采用14C-尿素呼气试验测量幽门螺杆菌浓度,采用胶体金标记免疫斑点渗滤法测定血清幽门螺杆菌免疫球蛋白G(IgG),采用光学相关断层成像测定视网膜神经纤维层厚度.结果 开角型青光眼组幽门螺杆菌阳性率88.33％高于闭角型青光眼组35.00％和对照组31.67％(P＜0.05);开角型青光眼组血清幽门螺杆菌IgG阳性率85.00％高于闭角型青光眼组33.33％和对照组28.33％ (P＜0.05);开角型青光眼组和闭角型青光眼组大视盘、中视盘、小视盘视网膜神经纤维层厚度均低于对照组(P＜0.05),开角型青光眼组大视盘、中视盘、小视盘视网膜神经纤维层厚度低于闭角型青光眼组(P＜0.05);开角型青光眼患者幽门螺杆菌浓度与青光眼患者视盘视网膜神经纤维层厚度呈负相关(P＜0.05).结论 原发性开角型青光眼患者幽门螺杆菌感染率高,幽门螺杆菌可能和原发性开角型青光眼的发病有关.

抗双链DNA(ds-DNA)抗体的检测对于系统性红斑狼疮(SLE)的诊断和病情监测具有重要的意义.我们以纯化的细菌质粒ds-DNA为抗原,采用胶体金标记和快速膜斑点渗滤技术,建立了一种新的检测抗dsDNA抗体的斑点免疫金渗滤法(dot immunogold filtratlon assay,DIGFA),现将其临床应用结果报道如下.

背景 与核酸检测相比,传统快速流行性感冒(流感)病毒抗原检测方法灵敏度偏低,因此需要探索新的流感快速检测方法.目的 探讨免疫荧光法流感病毒抗原检测在流感筛查中的临床应用价值.方法 分别于2017年7—12月、2019年1—2月选取北京大学第三医院感染疾病科发热门诊收治的患者472例,采集其鼻咽拭子.采用免疫荧光法流感病毒抗原检测试剂盒读取仪器(简称Sofia)和传统快速流感抗原检测方法(免疫渗滤法和胶体金法)、流感病毒核酸检测实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)进行病原学检测.结果 472例患者采用RT-PCR方法共检出甲型/乙型流感292例(61.9％),其中甲型流感195例(41.3％),乙型流感94例(19.9％),另有3例同时检出甲型流感和乙型流感.472例患者采用免疫荧光法共检出甲型/乙型流感262例(55.5％),其中甲型流感169例(35.8％),乙型流感93例(19.7％).以RT-PCR方法为金标准,免疫荧光法、免疫渗滤法、胶体金法检测甲型/乙型流感的灵敏度依次为89.0％、82.9％、84.6％,特异度依次为98.9％、97.2％、93.3％;免疫荧光法、免疫渗滤法、胶体金法检测甲型流感的灵敏度依次为85.4％、79.3％、79.3％,特异度依次为100.0％、99.3％、97.1％;免疫荧光法、免疫渗滤法、胶体金法检测乙型流感的灵敏度依次为93.8％、87.6％、89.7％,特异度依次为99.5％、99.2％、97.3％.以RT-PCR方法为金标准,免疫荧光法对甲型H1流感、甲型H3流感、乙型流感的检出阳性符合率分别为91.8％(56/61)、84.7％(111/131)、94.8％(91/96).16～20岁、21～40岁、41～60岁、>60岁患者中,免疫荧光法对甲型/乙型流感检测的灵敏度依次为95.6％、90.2％、87.2％、78.4％,特异度依次为100.0％、98.2％、100.0％、100.0％.结论 与传统快速流感病毒抗原检测方法比较,免疫荧光法在甲型/乙型流感的检测中表现出更高的灵敏度,在流感筛查中有一定应用前景.

目的 建立α-唾液淀粉酶(salivary alpha-amylase,sAA)胶体金免疫渗滤法,制备胶体金免疫渗滤试纸,并将该试纸用于中药白术及葛根的酶学作用研究.方法 采用胶体金标记技术,筛选最佳标记pH值和抗体标记量,制备金标抗体复合物,再利用纸基免疫渗滤技术,设计单因素试验,优化包被液种类、包被条件、封闭液种类、封闭条件、洗涤液种类、抗原抗体最佳工作浓度、包被抗原与金标抗体反应条件、待测样品与金标抗体反应条件共8个影响因素,建立胶体金免疫渗滤检测法,同时对免疫试纸的灵敏度和初步稳定性进行验证,并利用该试纸检测不同浓度中药白术和葛根提取液对sAA与其抗体特异性结合活性的促进或抑制作用.结果 胶体金标记抗体的最佳pH值为8.5,最佳抗体稀释比例为1 ∶ 125,在此条件下制备的金标抗体复合物稳定性良好,活性效价为1 ∶ 384.sAA胶体金免疫渗滤法的最适反应条件为:以含8％甲醇的PBS缓冲液(0.01 mol/L,pH 7.4)为包被液稀释sAA至10 μg/mL,37℃包被 15 min;以含2％BSA 的 PBS 缓冲液(0.01 mol/L,pH 7.4)为封闭液,37℃封闭 15 min;以含0.4％Tween-20的PBS缓冲液(0.01 mol/L,pH 7.4)为洗涤液对NC膜进行洗涤;待测样品与稀释比例为1 ∶ 1的金标抗体于37℃下提前反应15 min,加入NC膜后25℃条件下再反应20 min,洗涤后根据斑点显色情况判断实验结果.制备的胶体金免疫渗滤试纸灵敏度为5 μg/mL,稳定性良好.中药酶学作用研究结果显示,白术可促进sAA与其抗体的特异性结合,而葛根具有抑制作用,且两者作用程度与中药提取液的浓度呈正相关.结论 建立的sAA胶体金免疫渗滤法操作简便、快速,成本低,灵敏度和稳定性良好,可为sAA的快速检测提供新方法.

为评价3种包虫病特异性IgG抗体诊断试剂盒的临床诊断效能,并针对其特异度差的问题进行优化,为包虫病免疫学诊断提供检测结果优化判定的策略,本研究共收集87例包虫病确诊病人血清,78例经排查为非包虫病就诊病人血清.每份血清同时采用3种试剂盒进行检测,对结果进行统计分析,评价各方法的诊断效能.通过受试者工作特征(ROC)曲线寻找各方法最佳诊断界值.采用胶体金免疫渗滤斑点法(DIGFA)对酶联免疫吸附法(ELISA)或胶体金免疫层析法(GICA)所得检测结果低于最佳诊断界值的阳性样本进行重新测定,以DIGFA法最佳诊断界值为结果判定标准.比较结果优化前后的诊断效能.结果 显示,3种诊断方法的灵敏度在90.8％ ～94.3％之间,特异度在75.7％～83.3％之间.ROC曲线所得最佳诊断界值均高于试剂盒的cutoff值.检测结果经优化后,灵敏度保持在90.3％以上,特异度提升至88.5％以上.结果 表明,3种诊断方法的特异度均不理想,本次研究通过对检测结果的优化判定,在不影响灵敏度的前提下可减少该部分血清假阳性结果的误判,提高方法的特异度,为包虫病临床诊断提供更为可靠的信息.