目的 探究重楼皂苷Ⅰ凝结细胞膜胆固醇影响肿瘤细胞对化疗药物敏感性的作用.方法 采用不同摩尔比的重楼皂苷Ⅰ与胆固醇进行体外结合实验,并培养HepG2 细胞,给予不同浓度重楼皂苷Ⅰ,检测细胞内总胆固醇含量、Filipin Ⅲ标记细胞内胆固醇,透射电镜观察细胞膜形态学变化,免疫荧光染色标记细胞膜脂筏及ABCA1,Western bolt法检测ABCA1 蛋白表达,并通过激光共聚焦与细胞流式仪检测阿霉素的吸收作用.最后,通过CCK-8 实验明确重楼皂苷Ⅰ对阿霉素的增敏作用.结果 重楼皂苷Ⅰ在体外可与胆固醇结合形成凝胶固态物;可降低HepG2 细胞总胆固醇含量,改变细胞膜形态,降低细胞膜脂筏含量并抑制外排蛋白ABCA1 表达,从而增加化疗药物阿霉素吸收提高敏感性.结论 重楼皂苷Ⅰ可凝结细胞膜胆固醇,改变细胞膜通透性使化疗药物吸收和敏感性增加.

概要:本文旨在对flotillins在相关细胞进程中的作用、在多种肿瘤中的作用和机制及其在肿瘤分子诊断和靶向治疗等方面的潜在应用价值进行综述.图1以示意图的形式直观地展示flotillin-1和flotillin-2的蛋白结构;表1对flotillin-1和flotillin-2在各种肿瘤中的表达异常情况、发挥的生物学功能及其机制进行汇总;在图2中,以模式图的形式展示flotillin-1和flotillin-2在肿瘤细胞中参与的信号通路及导致肿瘤细胞出现的不同表型.许多研究表明,flotillins在多种肿瘤中过表达,并且与肿瘤的发生发展、分期和转移密切相关.转移标志着肿瘤由局部病变发展为不可治愈的系统病变,是肿瘤预后的一个重要影响因素,但是其机制尚未完全阐述.因此,对其机制进行进一步探索有助于促进恶性肿瘤分子诊断、预后和精准治疗的发展.

目的:检测脂筏标记蛋白-2(Flotillin-2,Flot-2)在胃癌组织中的表达水平,分析Flot-2的表达与胃癌临床病理特征及预后的关系.方法:选取南昌大学第二附属医院胃肠外科于2009年1月至2010年4月行手术切除的胃癌组织112例及与其配对的癌旁组织,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中Flot-2的表达水平,采用Spearman检验Flot-2表达与胃癌临床病理特征及预后的关系,采用Kaplan-Meier法及Log-Rank检验分析其生存数据.结果:Flot-2阳性表达呈黄色颗粒,主要在细胞质中表达,胃癌组织中的表达量明显高于癌旁组织(53.57％ vs 46.43％,P＜0.05).Flot-2表达与患者的性别、年龄、肿瘤位置、分化程度无显著关联(P＞0.05),与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及AJCC分期均显著关联(均P＜0.01).Flot-2低表达组患者的5年总体生存率明显高于高表达组(P＜0.01).Cox回归分析显示,远处转移、AJCC分期和Flot-2蛋白表达水平为胃癌患者预后的独立危险因素.结论:胃癌组织中高表达Flot-2,其与患者不良预后密切相关,是胃癌预后的独立危险因素,有望成为胃癌治疗的潜在新靶点.

目的 探讨微小RNA-485-5p(miR-485-5p)靶向脂筏标记蛋白(FLOT)2对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 采用qRT-PCR与Western印迹分别检测不同甲状腺癌细胞及正常甲状腺上皮细胞中miR-485-5p与FLOT2 mRNA及蛋白表达.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测甲状腺癌SW579细胞转染miR-485-5p mimic、miR-NC、si-FLOT2、si-NC后的细胞增殖活性,并采用流式细胞术检测细胞凋亡率.采用双荧光素酶活性检测鉴定miR-485-5p与FLOT2的靶向关系.Western印迹检测SW579细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p27、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved-caspase)-3蛋白表达.结果 与TEC细胞相比,甲状腺癌细胞SW579、FTC-133、KAT-18中miR-485-5p的相对表达量显著降低(P<0.05),而FLOT2 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05);miR-485-5p过表达或抑制FLOT2表达后SW579细胞OD值、CyclinD1及Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、p21、p27及Bax、cleaved-caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.05);双荧光素酶活性检测鉴定FLOT2是miR-485-5p的靶基因,miR-485-5p可负向调控FLOT2表达;FLOT2过表达可逆转miR-485-5p过表达对甲状腺癌SW579细胞增殖及凋亡的作用.结论 miR-485-5p通过负向调控靶基因FLOT2抑制甲状腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.

探讨胃癌组织中醌氧化还原酶-1(NQO-1)、脂筏标记蛋白-2(Flot-2)表达的临床意义.选取胃癌术后组织标本90例及其对应的癌旁组织,采用免疫组织化学染色检测两组标本中的Flot-2、RIG-I蛋白表达水平,不同肿瘤部位、TNM分期、肿瘤分化程度、病灶直径、浸润程度及是否发生淋巴结转移的胃癌组织中Flot-2蛋白、RIG-I蛋白阳性表达率差异.胃癌组织中的Flot-2蛋白、NQO-1蛋白阳性表达率分别为65.56％、57.78％,癌旁组织中的Flot-2蛋白、NQO-1蛋白阳性表达率分别为17.78％、23.33％,胃癌组织均高于癌旁组织(<0.05);不同TNM分期、肿瘤浸润深度及是否发生淋巴结转移的胃癌组织中Flot-2蛋白阳性表达率差异有统计学意义(<0.05);不同TNM分期、肿瘤浸润深度、病灶直径大小、肿瘤分化程度及是否发生淋巴结转移的胃癌组织中NQO-1蛋白阳性表达率差异有统计学意义(<0.05).在原发性胃癌组织中,Flot-2蛋白、RIG-I蛋白表达强度较癌旁组织更强,可能与肿瘤的发生及肿瘤进展有关.

目的 研究脂筏标记蛋白flotillin-2(FLOT2)在人乳腺癌细胞迁移、侵袭及阿霉素化疗敏感性调控中的生物学作用.方法 利用课题组前期构建的下调FLOT2表达的MCF-7和MDA-MB-231稳定细胞系,用软琼脂细胞集落培养法检测FLOT2对乳腺癌细胞克隆形成的影响;划痕试验和Transwell小室迁移试验、Transwell小室侵袭试验分析FLOT2对乳腺癌细胞运动爬行能力、侵袭能力的作用;用MTT比色法及Annexin V荧光染色分别检测FLOT2与乳腺癌细胞对阿霉素敏感性及抗凋亡能力的关联作用.结果 软琼脂集落培养显示沉默FLOT2的乳腺癌细胞在软琼脂中形成的细胞集落显著少于对照细胞,差异有统计学意义(P＜0.05);划痕试验中沉默FLOT2的乳腺癌细胞运动距离较对照细胞显著减少,差异有统计学意义(P＜0.05);沉默FLOT2的乳腺癌细胞穿过未铺基质胶(matrigel)和铺了matrigel小室底膜的细胞数量均显著少于对照细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).阿霉素对对照MCF-7和MDA-MB-231作用48 h的IC50分别为1.14和0.90 μmol/L;而对沉默FLOT2的MCF-7和MDA-MB-231的IC50分别降低为0.47和0.36μmol/L.阿霉素作用后沉默FLOT2的乳腺癌细胞凋亡比率显著高于对照细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 FLOT2在促进乳腺癌细胞迁移、侵袭中起重要作用,沉默FLOT2能增强乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性.