Background::Non-coding RNAs have attracted considerable attention for their vital role in cancer. The purpose of this study was to determine the effects of non-coding RNAs on hepatocellular carcinoma (HCC) and reveal their regulatory mechanism in the pathophysiological process.Methods::We measured the expression of mucin 1 (MUC1) and miR-485-5p in tissues from 15 HCC patients and in liver cancer cell lines by quantitative real-time polymerase chain reaction and Western blot, screened for aberrantly expressed microRNAs (miRNAs) by miRNA microarrays. Bioinformatics tools were used to find the miRNA and circular RNA that regulated MUC1, which were validated by RNA immunoprecipitation assay and luciferase reporter assay. Cell counting kit-8, Transwell assays, and flow cytometry were used to conduct functional experiments. Proteins were examined by western blot and immunohistochemical staining assays. Significant differences between groups were estimated using the one-way analysis of variance. A P < 0.05 was considered statistically significant. Results::MUC1 was overexpressed in HCC tissues compared with that in paratumor tissues (normal vs. tumor, 1.007 ± 0.215 vs. 75.213 ± 18.403, t = 18.401, P < 0.001) while miR-485-5p was down-regulated (normal vs. tumor, 4.894 ± 0.684 vs. 1.586 ± 0.398, t= 16.191, P < 0.001). Inhibition of miR-485-5p promoted cell proliferation (73.33% ± 5.13% vs. 41.33% ± 3.51%, t= 8.913, P < 0.001), migration (102 ± 8 cells vs. 46 ± 8 cells, t= 8.681, P < 0.001), invasion (59 ± 7 cells vs. 28 ± 2 cells, t = 8.034, P < 0.01), and suppressed apoptosis (22.64% ± 6.97% vs. 36.33% ± 3.96%, t = 2.958, P < 0.05) of HepG2 cells with which MUC1 is knocked down. Mechanically, miR-485-5p binds to MUC1, while circHECTD1 binds to miR-485-5p, resulting in the indirect up-regulation of the MUC1 level. Conclusions::Our findings reveal that circHECTD1 facilitates HCC progression by sponging miR-485-5p to up-regulate MUC1.

Background::Cell competition is an important feature in pancreatic cancer (PC) progression, but the underlying mechanism remains elusive. This study aims to explore the role of exosomes derived from normal pancreatic ductal epithelial cells involved in PC progression.Methods::PC cells and pancreatic stellate cells (PSCs) were treated with exosomes isolated from pancreatic ductal epithelial cells. Cell proliferation was assessed by CCK8 assays. Cell migration and invasion were assessed by Transwell assays. PC and matched adjacent non-tumor tissue specimens were obtained from 46 patients pathologically diagnosed with PC at Peking University First Hospital from 2013 to 2017. Tissue miR-485-3p and p21-activated kinase-1 (PAK1) expression was examined by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), and the relationship of the two was analyzed using Pearman’s product-moment correlation. The clinical significance of miR-485-3p was analyzed using the Chi-square test, Wilcoxon rank-sum test, and Fisher exact probability, respectively. The binding of miR-485-3p to PAK1 5 ＇-untranslated region (5 ＇-UTR) was examined by luciferase assay. PC cells were xenografted into nude mice as a PC metastasis model. Results::Exosomes from pancreatic ductal epithelial cells suppressed PC cell migration and invasion as well as the secretion and migration of PSCs. MiR-485-3p was enriched in the exosomes of pancreatic ductal epithelial cells but deficient in those of PC cells and PSCs, in accordance with the lower level in PSCs and PC cells than that in pancreatic ductal cells. And the mature miR-485-3p could be delivered into these cells by the exosomes secreted by normal pancreatic duct cells, to inhibit PC cell migration and invasion. Clinical data analysis showed that miR-485-3p was significantly decreased in PC tissues ( P < 0.05) and was negatively associated with lymphovascular invasion ( P = 0.044). As a direct target of miR-485-3p, PAK1 was found to exert an inhibitory effect on PC cells, and there was a significantly negative correlation between the expression levels of miR-485-3p and PAK1 ( r = -0.6525, P < 0.0001) in PC tissues. Moreover, miR-485-3p could suppress PC metastasis in vivo by targeting p21-activated kinase-1. Conclusions::Exosomal miR-485-3p delivered by normal pancreatic ductal epithelial cells into PC cells inhibits PC metastasis by directly targeting PAK1. The restoration of miR-485-3p by exosomes or some other vehicle might be a novel approach for PC treatment.

目的:探讨miR-485-5p通过PI3K/Akt-PAK1信号通路对结肠癌细胞顺铂耐药的影响。方法:构建LoVo/DDP细胞株，将建LoVo/DDP细胞株分为NC组(未做转染处理)、miR-485-5p mimics组(转染miR-485-5p mimics)、miR-485-5p inhibitors组(转染miR-485-5p inhibitors)、IPA-3组(采用IPA-3干预)和miR-485-5p mimics+IPA-3组(采用miR-485-5p mimics和IPA-3转染和干预)，均给予0、3和5 μmol/L顺铂处理。结果:20例患者中，miR-485-5p阴性为85.0%(17/20)，阳性为15.0%(3/20)；PAK1阴性为20.0%(4/20)，阳性为80.0%(16/20)，miR-485-5p在结肠癌组织中的表达低于癌旁组织中的表达( P<0.05)；人结肠癌细胞系LoVo、SW620、HCT116、SW480中miR-485-5p表达均低于正常肠黏膜细胞( P<0.05)；LoVo/DDP中的miR-485-5p表达明显低于LoVo( P<0.001)；在3 μmol/L和5 μmol/L顺铂的作用下，LoVo/DDP细胞活力高于LoVo( P<0.001)，凋亡率低于LoVo( P<0.001)；miR-485-5p mimics组中细胞存活率低于miR-485-5p inhibitors组( P<0.001)；与Mimics NC组相比，过表达miR-485-5p显著下调野生型PAK1报告基因的荧光素酶活性( P<0.001)；miR-485-5p mimics组中的P-PI3k、P-Akt、PAK1水平均显著低于miR-485-5p inhibitors组( P<0.001)；miR-485-5p mimics组、IPA-3组、miR-485-5p mimics+IPA-3组中细胞存活率明显低于NC组( P<0.001)，miR-485-5p mimics+IPA-3组中细胞存活率较miR-485-5p mimics组相比显著降低( P<0.001)。 结论:上调miR-485-5p通过PI3K/Akt-PAK1信号通路逆转结肠癌顺铂耐药，提示过表达miR-485-5p或者抑制PI3K/Akt-PAK1信号通路可以改变结肠癌顺铂治疗中的顺铂疗效。

目的:探讨犀地凉血方对HaCaT细胞LncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3调控网络及细胞增殖、凋亡的影响。方法:以IL-17诱导的HaCaT细胞为研究对象，通过qPCR、Western印迹法检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3 mRNA和蛋白在HaCaT细胞和正常人表皮角质形成细胞（NHEK细胞）中的表达。采用荧光原位杂交技术（FISH）观察LncRNA NEAT1、miR-485-5p在HaCaT细胞中的表达；采用双萤光素酶报告基因实验验证LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3之间的靶向调控关系。犀地凉血方煎煮取汁给予大鼠灌胃后采集含药血清，以含药血清干预和/或LncRNA-NEAT1过表达载体转染HaCaT细胞，将HaCaT细胞分对照组、过表达LncRNA NEAT1组、犀地凉血方组、犀地凉血方+过表达LncRNA NEAT1组，采用qPCR、Western印迹法、流式细胞仪、CCK8等实验技术分别检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及细胞增殖、凋亡情况。采用独立样本 t检验、单因素方差分析、LSD- t检验进行统计学分析。 结果:IL-17诱导的HaCaT细胞组LncRNA NEAT1、STAT3 mRNA相对表达水平（1.84 ± 0.21、2.20 ± 0.24）高于NHEK细胞组（1.00 ± 0.11、1.00 ± 0.11，均 P < 0.05），miR-485-5p相对表达水平（0.32 ± 0.04）低于NHEK细胞组（1.00 ± 0.12， t = 2.94， P = 0.015）；STAT3、p-STAT3蛋白表达水平（1.27 ± 0.13、2.43 ± 0.16）均高于NHEK细胞组（1.00 ± 0.11、1.00 ± 0.10， t = 2.54、3.02，均 P < 0.05）。FISH检测显示，miR-485-5p与LncRNA NEAT1共定位于HaCaT细胞质。双萤光素酶报告基因实验显示，共转染野生型LncRNA NEAT1、STAT3重组质粒时，miR-485-5p组细胞相对萤光素酶活性明显低于阴性对照组（均 P < 0.05）；而共转染突变型LncRNA NEAT1、STAT3重组载体质粒时，miR-485-5p组细胞萤光素酶活性与阴性对照组差异无统计学意义（均 P > 0.05）。过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞中LncRNA NEAT1、STAT3（包括STAT3 mRNA和STAT3、p-STAT3蛋白）表达水平高于对照组，miR-485-5p表达水平低于对照组；犀地凉血方组LncRNA NEAT1、STAT3表达水平低于对照组，miR-485-5p表达水平高于对照组；犀地凉血方+过表达LncRNA NEAT1组LncRNA NEAT1、STAT3表达水平低于过表达LncRNA NEAT1组，而miR-485-5p表达水平高于过表达LncRNA NEAT1组（均 P < 0.05）。CCK8法检测显示，药物干预24、48、72 h时，过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞增殖活性明显高于对照组，犀地凉血方+过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞增殖活性高于犀地凉血方组，但二者均低于对照组（均 P < 0.05）。过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞凋亡率（5.84% ± 0.28%）低于对照组（14.75% ± 0.83%，LSD- t = 3.48， P = 0.002），而犀地凉血方组（35.72% ± 3.62%）高于对照组（LSD- t = 5.34， P = 0.001）；犀地凉血方+过表达LncRNA NEAT1组细胞凋亡率（27.64% ± 2.82%）高于过表达LncRNA NEAT1组（LSD -t = 9.06， P < 0.001）。 结论:犀地凉血方能抑制HaCaT细胞增殖并促进其凋亡，作用机制与其干预LncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3调控网络相关。

目的:探讨miR-485-5p对顺铂耐药卵巢癌细胞的影响及其机制。方法:RT-qPCR检测人正常卵巢上皮细胞株（IOSE-80）及卵巢癌细胞株（A2780、SKOV3、OVCAR3、OVCA433）中miR-485-5p的表达。构建顺铂（DDP）耐药卵巢癌细胞并检测miR-485-5p与EGFR的表达。CCK8法检测各组细胞增殖能力，流式细胞术测定细胞凋亡。结果:相对于IOSE-80细胞，各卵巢癌细胞株中miR-485-5p的表达显著下降，EGFR表达上升（均 P<0.05）。SKOV3/DDP细胞株（0.17±0.02）中miR-485-5p表达较SKOV3细胞（0.32±0.04）进一步下降（ t=5.81, P=0.004）。而SKOV3/DDP细胞中EGFR表达则较SKVO3进一步上升（ P<0.05）。SKOV3/DDP细胞转染miR-485-5p mimic能抑制细胞增殖活力、诱导细胞凋亡，转染miR-485-5p inhibitor则相反（均 P<0.05）。SKOV3/DDP细胞转染EGFR能促进细胞增殖并抑制细胞凋亡，该作用被miR-485-5p mimic部分抵消。 结论:miR-485-5p参与调控卵巢癌细胞的顺铂耐药，过表达miR-485-5p能提高卵巢癌化疗敏感性，该作用可能是通过负调控EGFR实现的。

目的:鉴定肾透明细胞癌(ccRCC)甲基化生物标志物，并构建ccRCC甲基化预后分子标签。方法:提取TCGA数据库中ccRCC患者的临床数据以及ccRCC甲基化数据，筛选出ccRCC癌组织和正常肾组织中甲基化差异基因，然后将差异基因经过LASSO-Cox回归分析筛选ccRCC预后相关的基因并构建ccRCC预后分子标签。结果:首先筛选出485例ccRCC癌组织和正常肾组织中甲基化差异基因798种，差异基因结合ccRCC生存数据经过单因素Cox分析得到492种与ccRCC预后相关的甲基化差异基因( P<0.05)；再将325例肿瘤组织样品数据按30%和70%随机分为两组，70%组为训练组用于筛选预后分子标签，30%组为测试组用于测试筛选出的分子标签预测预后效果。采用LASSO-Cox回归分析从中筛选出5种与ccRCC预后相关的甲基化差异基因，分别为CMTM3、HAND2、HIST1H3E、MIR4425、SHOX2。利用5种基因联合多因素COX回归系数构建分子标签：-5.36342273779505×DML CMTM3+3.260844271×DML HAND2+4.995985347×DML HIST1H3E-1.84339230384795×DML MIR4425+3.323857473×DML SHOX2代入相关数据后，计算分子标签分值。训练组、测试组、全部数据组的分子标签值与ccRCC患者生存期显著相关，分子标签值越高患者预后越差。 结论:通过对TCGA数据库的挖掘，发现影响ccRCC预后的有5种基因，且联合5种基因构建的分子标签与ccRCC患者的预后有显著性关联，构建的ccRCC预后模型有望应用于临床。

目的:探究子宫颈癌组织中环状RNA（circRNA）的表达谱，并对差异表达的circRNA进行功能分析。方法:收集2021年2月至8月在郑州大学第二附属医院经病理检查确诊的15例子宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织标本。（1）采用circRNA高通量测序技术分析其中5例子宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织中circRNA的表达谱差异；对显著差异表达circRNA的亲本基因作基因本体（GO）功能注释及京都基因和基因组百科全书（KEGG）信号通路富集分析。（2）将本研究中circRNA高通量测序并筛选出的差异表达circRNA与从美国国家生物技术信息中心（NCBI）基因表达综合（GEO）数据库下载的基因表达谱GSE102686数据集中筛选出的差异表达circRNA取交集，选择差异倍数最高的3个显著下调和3个显著上调共6个circRNA，即hsa_circ_0079480、hsa_circ_0005480、hsa_circ_0003162和hsa_circ_0084927、hsa_circ_0002151、hsa_circ_0001849，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术验证15例子宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织中6个差异表达circRNA的表达。（3）选择6个差异表达circRNA中经过qRT-PCR技术验证的在子宫颈癌组织及其癌旁组织中表达水平有显著差异（ P<0.05）的circRNA进行下一步的功能研究（共有3个差异表达circRNA，即hsa_circ_0005480、hsa_circ_0003162和hsa_circ_0084927），构建小分子干扰RNA（siRNA），转染子宫颈癌细胞系SiHa和HeLa细胞以敲低其表达，实验分为4组，即hsa_circ_0005480敲低组、hsa_circ_0003162敲低组、hsa_circ_0084927敲低组和阴性对照（NC）组，采用活细胞计数（CCK-8）法检测4组SiHa和HeLa细胞的增殖能力。（4）通过Starbase、CircInteractome等数据库预测能够与hsa_circ_0005480、hsa_circ_0003162和hsa_circ_0084927结合的微小RNA（miRNA），构建竞争性内源性RNA（ceRNA）网络，即circRNA-miRNA网络。 结果:（1）高通量测序结果显示，5例子宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织中共检测到26 280个circRNA，有1 421个差异表达的circRNA，其中表达上调774个，表达下调647个。GO功能注释及KEGG信号通路富集分析显示，差异表达circRNA主要富集于血管内皮生长因子（VEGF）、恶性肿瘤中的miRNA、铂类药物耐药性等信号通路。（2）qRT-PCR技术检测显示，hsa_circ_0005480（分别为0.54±0.31、1.03±0.27； t=4.647， P<0.001）和hsa_circ_0003162（分别为0.48±0.45、1.24±0.81； t=3.172， P=0.004）在子宫颈癌组织中的表达水平显著低于其癌旁组织，而hsa_circ_0084927在子宫颈癌组织中的表达水平显著高于其癌旁组织（分别为2.34±0.90、1.11±0.54； t=-4.507， P<0.001）。（3）与NC组细胞（包括SiHa和HeLa细胞）相比，hsa_circ_0005480敲低组细胞的增殖能力显著增强，而hsa_circ_0003162敲低组和hsa_circ_0084927敲低组细胞的增殖能力显著减弱（ P均<0.01）。（4）ceRNA网络的构建结果：hsa_circ_0005480可与hsa-miR-224-3p、hsa-miR-522-3p等8个miRNA相互作用；hsa_circ_0003162可与hsa-miR-485-3p、hsa-miR-1243和hsa-miR-1279相互作用；hsa_circ_0084927可与hsa-miR-874-3p、hsa-miR-367-5p等9个miRNA相互作用。 结论:本研究初步阐明了子宫颈癌组织中circRNA的表达谱，对差异表达的circRNA进行验证和功能研究，并构建ceRNA网络，为研究子宫颈癌的发生、发展及治疗靶点提供依据。

目的 分析子痫前期(preeclampsia,PE)孕妇血清微小核糖核酸-411-5p(miR-411-5p)和微小核糖核酸-485-5p(miR-485-5p)水平检测联合超声血流指标对围生儿结局的预测价值研究.方法 选择2020年1月～2021年12月在北京核工业医院产科建卡并行剖宫产术的88例PE孕妇为研究对象(PE组),另选取同期因其它各种原因剖宫产分娩的正常孕妇90例作为对照组,比较两组间超声血流指标搏动指数(pulsitility index,PI)、阻力指数(resistance index,RI)差异,实时荧光定量 PCR(real time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)法检测两组间血清 miR-411-5p 和 miR-485-5p水平并比较,根据PE患者围生儿结局的不同分为结局良好组与结局不良组,比较组间PI,RI,miR-411-5p和miR-485-5p 的差异,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线法分析 PI,RI,miR-411-5p,miR-485-5p以及联合检测对PE患者围生儿不良结局的预测作用.结果 PE组孕妇RI(0.79±0.08),PI值(1.82±0.08)高于对照组(0.66±0.06,1.38±0.15),血清 miR-411-5p(0.32±0.09),miR-485-5p(0.26±0.03)水平低于对照组(1.01±0.08,1.02±0.09),差异具有统计学意义(t=12.283,24.339,54.091,75.231,均 P＜0.001);结局不良组 PE 患者 RI(0.83±0.08),PI(1.86±0.09)值高于结局良好组(0.70±0.07,1.71±0.07),血清 miR-411-5p(0.27±0.02),miR-485-5p(0.24±0.02)水平低于结局良好组(0.45±0.04,0.31±0.04),差异具有统计学意义(t=11.545,12.428,37.840,14.716,均P＜0.001).超声血流指标RI,PI预测PE患者围生儿不良结局的曲线下面积为0.838(敏感度为90.8％,特异度为65.2％)、0.758(敏感度为50.8％,特异度为91.3％);血清miR-411-5p,miR-485-5p预测PE患者围生儿不良结局的曲线下面积为0.830(敏感度为90.8％,特异度为73.9％)、0.769(敏感度为95.4％,特异度为61.9％),四者联合检测预测PE患者围生儿不良结局的曲线下面积为0.976(敏感度为98.5％,特异度为91.3％).结论 PE孕妇血清miR-411-5p和miR-485-5p水平降低,血清miR-411-5p和miR-485-5p水平联合超声血流指标PI,RI对PE孕妇围生期胎儿结局具有预测作用.

目的:探讨mTOR调节相关蛋白(regulatory-associated protein of mTOR,RAPTOR)对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)迁移、侵袭和增殖能力的影响.方法:利用TCGA生物信息数据库查询在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)组织与癌旁组织中差异表达的mRNA.West-ern blot检测RAPTOR在人口腔上皮细胞HOEC和OSCC细胞系中的表达.利用伤口愈合实验、Transwell实验、EdU实验检测各组细胞迁移、侵袭及增殖能力.生物信息学网站预测与RAPTOR靶向结合的微小RNA(mi-croRNA,miR).功能学实验验证miR-485-5p是否可以靶向RAPTOR影响OSCC细胞的迁移、侵袭和增殖.结果:RAPTOR在HNSCC组织中较癌旁组织表达增高.伤口愈合、Transwell和EdU实验结果示,RAPTOR有促进OSCC细胞的迁移、侵袭和增殖能力.miR-485-5p能与RAPTOR靶向结合,且miR-485-5p上调能逆转RAPTOR促进CAL27细胞迁移、侵袭和增殖能力.结论:miR-485-5p通过靶向RAPTOR抑制OSCC细胞迁移、侵袭和增殖能力.

目的:探讨益气养阴通络方通过 lncRNA UCA1 靶向调控 miR-485-5p抑制糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管上皮细胞凋亡和炎症反应作用机制.方法:选取雄性 Wistar 大鼠 50 只,随机分为空白组、模型组和益气养阴通络方低、中、高剂量组,每组各 10 只;除空白组外,其余组大鼠采用高糖高脂胆固醇饮食造模.检测各组大鼠肾功能指标和炎症因子水平;采用流式细胞术检测各组大鼠细胞凋亡率;WB检测各组大鼠细胞凋亡蛋白表达;PCR 检测大鼠UCA1、miR-485-5p mRNA水平;采用双荧光素酶报告基因实验检测 UCA1 与 miR-485-5p 的结合位点.结果:与模型组比较,益气养阴通络方不同剂量组 24h尿蛋白(24 hUTP)、血清肌酐(SCr)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平较低,且呈剂量依赖性(均P＜0.05);与模型组比较,益气养阴通络方不同剂量组大鼠细胞凋亡率较低,且呈剂量依赖性(均P＜0.05);与模型组比较,益气养阴通络方不同剂量组 NLRP3、Caspase-1 蛋白表达量较低,且呈剂量依赖性(均 P＜0.05);与模型组比较,益气养阴通络方不同剂量组 UCA1 mRNA 水平较高,miR-485-5p mRNA水平较低,且呈剂量依赖性(均P＜0.05);UCA1 与 miR-485-5p 存在结合位点,具有靶向调控关系.结论:益气养阴通络方可能通过 lncRNA UCA1 靶向调控 miR-485-5p抑制 DN 大鼠肾小管上皮细胞凋亡和炎症反应.