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Pin1介导血管内皮细胞氧化应激反应参与重症中暑急性肺损伤的机制研究
编辑人员丨1周前
目的:观察热打击后小鼠肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs)和肺组织中肽基-脯氨酰顺/反异构酶1(Pin1)通过调控氧化应激和凋亡形成,参与重症中暑急性肺损伤(acute lung injury,ALI)形成的分子机制。方法:体外实验,建立PMVECs热打击模型,对照组将PMVECs置于标准37 ℃、5% CO 2细胞培养箱,热打击组将细胞置于43 ℃细胞培养箱中进行热打击2 h,热打击后继续在细胞培养箱进行复温(1、3、6、12 h),并使用Pin1抑制剂Juglone(1 μmol/L)预处理细胞1 h。体内实验,通过热打击构建重症中暑小鼠模型,热打击组动物置于仿真气候舱内,舱内温度(35.5±0.5) ℃,湿度(60±5)%,肛温表监测小鼠直肠温度,小鼠体温达到42 ℃即停止热打击,热打击后1、3、6以及12 h处死动物,对照组小鼠始终置于室温(25±0.5) ℃下,并使用Pin1抑制剂Juglone (1 mg/kg)于热打击前连续3 d腹腔注射对小鼠进行预处理。Western blot观察Pin1、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达情况;DHE染色,荧光显微镜下观察细胞中O 2-˙水平;ELISA检测肺组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平;HE染色检测各组小鼠的病理改变情况;免疫组化染色检测各组小鼠肺组织中Pin1表达情况;TUNEL染色检测各组小鼠肺组织凋亡情况。 结果:热打击后复温1 h即可诱导PMVECs和肺组织中Pin1的表达,并呈现复温时间依赖性增加( F=771.6, P<0.05; F=1 035, P<0.05);热打击后复温3 h开始PMVECs和肺组织中cleaved caspase-9的表达,并呈现复温时间依赖性增加( F=729.8, P<0.05; F=1 773, P<0.05);PMVECs和肺组织中cleaved caspase-3在热打击后复温3 h开始表达,随着复温时间的延长其表达不断增多,趋势与cleaved caspase-9一致( F=1 084, P<0.05; F=1 252, P<0.05);同时,热打击后导致PMVECs中O 2-˙释放。热打击后小鼠肺组织中氧化-抗氧化系统失衡,表现为热打击后小鼠肺组织中MDA的持续释放( F=114.2, P<0.05),而SOD水平持续抑制( F=99.15, P<0.05)。使用Pin1抑制剂Juglone对PMVECs和小鼠进行预处理,发现与热打击组相比,热打击+Juglone组PMVECs和肺组织中Pin1、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3均被抑制(均 P<0.05);使用Pin1抑制剂后明显减轻热打击后PMVECs中O 2-˙的释放,促进重症中暑小鼠肺组织中氧化-抗氧化系统平衡恢复,与热打击组相比,热打击+Juglone组肺组织中MDA被抑制[(11.53±0.84)nmol/mL vs (9.65±0.69) nmol/mL, t=12.52, P<0.05],而SOD明显恢复[(41.18±3.45) U/mL vs (57.52±4.83) U/mL, t=5.57, P<0.05]。同时,抑制Pin1表达后可以明显减轻热打击后肺组织的病理损伤,以及抑制凋亡的发生。 结论:初步确认Pin1主要通过介导肺组织和PMVECs的氧化应激反应和凋亡发生,进而参与热打击后肺损伤的形成。
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编辑人员丨1周前
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早发性白内障与年龄相关性白内障患者房水代谢组学的差异研究
编辑人员丨1周前
目的:探讨早发性白内障与年龄相关性白内障患者房水中代谢物及代谢通路的差异。方法:代谢组学研究。收集2020年8月至2022年9月就诊于天津医科大学眼科医院的16例(17只眼)白内障患者。其中早发性白内障8例(8只眼),年龄相关性白内障8例(9只眼)。收集患者年龄、性别、术前裸眼视力、眼压、晶状体功能失调指数和眼轴长度等一般临床资料,并于白内障摘除术中留取房水和前囊膜组织标本,采用液相色谱-串联质谱法非靶向检测房水中的代谢物,进一步使用主成分分析、差异分析、聚类分析、相关性分析筛选差异代谢物,并根据代谢物的变化倍数(FC)对差异代谢物进行排名。使用受试者工作特征(ROC)曲线分析和代谢富集分析来筛选两组间的差异通路,并鉴定早发性白内障的生物标志物。前囊膜组织行免疫组织化学染色。采用比色法检测丙酮酸含量验证代谢组学分析结果。结果:8例早发性白内障患者中男性7例,女性1例,年龄(37.50±4.90)岁;8例年龄相关性白内障患者中男性7例,女性1例,年龄(73.44±5.22)岁;基线资料除年龄外差异均无统计学意义( P>0.05)。差异分析共鉴别出347种差异代谢物,其中10种经ROC曲线分析确定为潜在的早发性白内障生物标志物(均 P<0.05),其中阳离子(POS)模式5种,分别是丙氧卡因(log 2FC=7.26)、2-甲基-2,3,4,5-四氢-1,5-苯并氧氮杂卓-4-酮(log 2FC=6.35)、 l-焦谷氨酸(log 2FC=-1.72)、亮氨酰脯氨酸(log 2FC=-0.77)和胆碱(log 2FC=-0.56),阴离子(NEG)模式5种,分别是N-苯乙酰谷氨酰胺(log 2FC=-1.84)、丙酮酸(log 2FC=1.07)、抗坏血酸(log 2FC=0.92)、假尿嘧啶核苷(log 2FC=-0.68)和棕榈酸(log 2FC=-0.51)。代谢富集分析共富集到72条差异通路(POS模式32条,NEG模式40条),其中谷胱甘肽代谢及半胱氨酸和蛋氨酸代谢、糖酵解或糖异生、丙酮酸代谢、三羧酸循环两组间的差异有统计学意义( P<0.05)。验证结果显示早发性白内障患者房水中乳酸脱氢酶减少,丙酮酸升高( P<0.05)。 结论:丙酮酸等10种代谢物可能是潜在的早发性白内障生物标志物;谷胱甘肽代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、糖酵解或糖异生、丙酮酸代谢和三羧酸循环代谢通路在早发性白内障患者中明显失调。
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编辑人员丨1周前
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Ac-SDKP生物学效应与机制的研究进展
编辑人员丨1周前
N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)是由胸腺素β4通过内肽酶-α和脯氨酰寡肽酶连续水解后产生的内源性短肽,具有免疫调节、促进血管生成、肿瘤发生和拮抗器官纤维化的作用。本文根据我们部分研究结果和近年来相关的文献,就Ac-SDKP研究进展进行综述。
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编辑人员丨1周前
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CYPA蛋白在恶性肿瘤中的研究进展
编辑人员丨1周前
亲环蛋白A(CYPA)是亲环蛋白家族的重要成员之一,由肽基脯氨酰异构酶A基因编码,具有多种重要的生物学功能,主要参与炎症、免疫等病理生理过程。CYPA在多种恶性肿瘤如鼻咽癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、结直肠癌、肝细胞癌、胆管癌、胰腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌等中表达升高,且通过多种不同分子机制在肿瘤细胞增殖、侵袭、凋亡、转移、血管新生及上皮细胞-间充质转化中发挥调控作用,其中尤以CYPA与CD147的特异性结合作用得到广泛关注。主要对CYPA在多种恶性肿瘤中的作用机制进行综述,分析其在恶性肿瘤中的调控机制及潜在的干预方式,以期在未来的肿瘤早期诊断及精准治疗中发挥重要作用。
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编辑人员丨1周前
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4~6岁阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患儿肠道代谢产物特征及临床价值分析
编辑人员丨2024/7/20
目的 探究4~6岁阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome,OSAHS)患儿肠道代谢产物特征及其临床价值.方法 前瞻性纳入31例4~6岁OSAHS患儿作为试验组,24例4~6岁健康儿童作为对照组,记录相关临床指标.收集粪便标本,通过液-质联用非靶向代谢组学检测所有代谢产物.结果 共检测出206种代谢产物,主要为氨基酸及其衍生物.试验组儿童肠道代谢产物整体构成与对照组差异有统计学意义(P<0.05).共筛选出18种差异代谢产物,6种代谢产物(N-乙酰蛋氨酸、L-蛋氨酸、L-赖氨酸、DL-苯丙氨酸、L-酪氨酸和L-异亮氨酸)用于诊断OSAHS的受试者操作特征曲线下面积大于0.7.其中N-乙酰蛋氨酸曲线下面积最大,为0.807,灵敏度为70.83%,特异度为80.65%.差异代谢产物与临床指标相关性分析显示,扁桃体肿大程度与肠内酯,尿酸与苯乙醛,血糖与N-乙酰蛋氨酸,胆固醇与9-六溴二苯醚和普鲁卡因呈正相关(P<0.05);扁桃体肿大程度与N-甲基酪胺,AST与吲哚丙烯酸和L-异亮氨酸,ALT与DL-苯丙氨酸、吲哚丙烯酸和L-异亮氨酸,尿酸与羟喹啉,尿素氮与N,N-二环己脲呈负相关(P<0.05).差异代谢产物影响的代谢功能通路主要有核黄素代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、泛酸和辅酶A生物合成、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、赖氨酸降解和谷胱甘肽代谢等.结论 4~6岁OSAHS患儿肠道代谢产物与代谢功能发生改变,主要为氨基酸代谢紊乱,筛选出的肠道差异代谢产物作为OSAHS生物标志物具有潜在的筛查诊断价值.
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编辑人员丨2024/7/20
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三氧化二砷通过降低Pin1表达及调节Wnt/β-连环素通路抑制肝癌细胞增殖
编辑人员丨2024/6/22
目的探讨三氧化二砷(ATO)在肝癌中对肽基脯氨酰基顺反异构酶NIMA相互作用蛋白1(Pin1)表达的抑制作用及其分子机制.方法 使用DepMap数据库和GEPIA数据库中的数据分析Pin1 在人肝癌细胞系和肝癌组织中的表达情况.以人肝癌细胞系Huh7和小鼠肝癌细胞系H22为细胞模型,通过ATP法检测ATO对肿瘤细胞活力的影响;通过蛋白质印迹法、免疫荧光染色和qPCR检测ATO对Pin1在蛋白质水平和转录水平表达的作用.用氯喹预处理Huh7细胞抑制溶酶体途径后,通过蛋白质印迹法和免疫荧光染色检测ATO对Pin1表达的调控作用.通过皮下荷瘤小鼠模型和免疫组织化学染色验证ATO在体内对肝癌细胞生长和Pin1表达的影响.采用RNA测序分析ATO可能影响的信号通路,并通过蛋白质印迹法和qPCR验证.结果 在DepMap数据库23 种人肝癌细胞系和GEPIA数据库人肝癌组织中,Pin1的表达均呈现较高水平.在体外实验中,ATO处理后Huh7和H22细胞的细胞活力均降低,细胞中Pin1在蛋白质和转录水平的表达均降低,但用氯喹抑制溶酶体途径逆转了ATO对Pin1表达的影响.在皮下荷瘤小鼠模型中,ATO表现出一定的抗肿瘤效果,免疫组织化学染色显示ATO处理后Pin1表达和肿瘤细胞增殖受到抑制.在ATO处理的H22细胞中Wnt/β-连环素通路相关基因富集,抑制H22细胞中Pin1的表达后β-连环素表达减少.结论 ATO通过溶酶体途径抑制Pin1表达,以及影响Wnt/β-连环素信号通路来抑制肝癌细胞增殖.
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编辑人员丨2024/6/22
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茯苓酸调节PI3K/Akt信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响
编辑人员丨2024/4/27
目的 观察茯苓酸(PA)调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝苏氨酸蛋白激酶B(Akt)信号通路对心力衰竭(HF)大鼠心肌纤维化(MF)的影响.方法 将108只大鼠随机分为6组,分别为假手术组、模型组、茯苓酸低剂量组(1mg/kg)、茯苓酸中剂量组(5mg/kg)、茯苓酸高剂量组(10mg/kg)、激活剂组(10mg/kg PA+0.02 mg/kg PI3K激活剂740Y-P),每组18只.采用左冠状动脉前降支结扎法诱导心肌梗死(MI)后HF大鼠造模成功后用超声影像系统检测大鼠心功能;HE染色观察大鼠心肌组织形态;Masson染色观察大鼠心肌胶原蛋白的分布并计算胶原容积分数(CVF);羟脯氨酸(HYP)试剂盒测定大鼠心肌组织HYP含量;TUNEL染色检测大鼠心肌细胞的凋亡情况;检测大鼠心肌组织活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;ELISA法检测各组大鼠心肌组织白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western Blot检测心肌组织Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、心肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3、PI3K/Akt信号通路蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织结构受损严重,左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短分数(LVFS)、GSH、SOD水平显著下降,左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、CVF、HYP含量、心肌细胞凋亡率、ROS、MDA、IL-6、TNF-α水平、Bax、Caspase-3、TGF-β1、Smad2、Smad3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,PA低、中、高剂量组大鼠心肌组织结构受损减轻,LVEF、LVFS、GSH、SOD水平显著升高,LVEDD、LVESD、CVF、HYP含量、心肌细胞凋亡率、ROS、MDA、IL-6、TNF-α水平、Bax、Caspase-3、TGF-β1、Smad2、Smad3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt水平显著降低(P<0.05);与高剂量组比较,激活剂组大鼠LVEF、LVFS、GSH、SOD水平显著下降,LVEDD、LVESD、CVF、HYP含量、心肌细胞凋亡率、ROS、MDA、IL-6、TNF-α水平、Bax、Caspase-3、TGF-β1、Smad2、Smad3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt显著升高(P<0.05).结论 PA通过抑制PI3K/Akt信号通路,抑制HF大鼠心肌纤维化.
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编辑人员丨2024/4/27
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分子靶向治疗对直肠癌大鼠巨噬细胞极化及PPIA/GRP78的作用机制
编辑人员丨2023/10/21
目的 研究分子靶向治疗对直肠癌大鼠巨噬细胞极化及肽基脯氨酰顺反异构酶(PPI)A/理葡萄糖调节蛋白(GRP)78 的作用机制.方法 健康SD大鼠48 只随机分为健康组(健康大鼠)、肠癌组(建立直肠癌模型)、治疗组(模型+阿帕替尼治疗)、对照组(模型+植酸治疗)各12 只.检测各组瘤重、抑瘤率.苏木素-伊红(HE)染色观察病理形态.免疫组化检测CD86、CD206、血管内皮生长因子(VEGF)表达.流式细胞术检测巨噬细胞的表型.反转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)与Western印迹检测PPIA、GRP78、VEGF mRNA及蛋白水平.结果 健康组直肠组织正常;肠癌组直肠黏膜上皮大量坏死并有炎性细胞浸润,伴有血管增生.与肠癌组相比,对照组与治疗组病理形态显著改善.与健康组相比,肠癌组CD206 水平及其阳性率、PPIA、GRP78 mRNA及蛋白水平显著增加,CD86 水平及其阳性率显著降低(P<0.05).与肠癌组相比,治疗组与对照组瘤重、CD206 水平及其阳性率、PPIA、GRP78 mRNA及蛋白水平显著降低,CD86 水平及其阳性率水平显著升高(P<0.05).结论 血管生成因子靶向药物阿帕替尼通过靶向抑制VEGF水平,促进巨噬细胞向M1 型极化,抑制肿瘤生长,其作用机制可能与降低GRP78、PPIA表达水平有关.
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编辑人员丨2023/10/21
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基于网络药理学和分子对接技术探讨解痉散瘀汤治疗肩袖损伤的作用机制
编辑人员丨2023/10/21
目的 运用网络药理学和分子对接技术探讨解痉散瘀汤治疗肩袖损伤的作用机制.方法 (1)通过中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、SwissADME平台筛选解痉散瘀汤10 种中药的主要活性成分,再通过TCMSP和SwissTargetPrediction平台筛选主要活性成分的作用靶点.通过GeneCards?数据库和OMIM?数据库获取肩袖损伤的相关靶点,再将其与主要活性成分的作用靶点取交集,得到解痉散瘀汤治疗肩袖损伤的潜在作用靶点.(2)使用Cytoscape 3.9.1 软件构建成分-靶点网络,筛选解痉散瘀汤治疗肩袖损伤的关键活性成分.通过STRING 11.5 平台和Cytoscape 3.9.1 软件构建潜在作用靶点的蛋白-蛋白相互作用网络,筛选解痉散瘀汤治疗肩袖损伤的核心靶点.(3)使用DAVID数据库对潜在作用靶点进行基因本体论(GO)功能富集分析及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.(4)通过AutoDock 1.5.6 软件进行关键活性成分与核心靶点蛋白的分子对接.结果 (1)共获得解痉散瘀汤主要活性成分作用靶点 835 个,肩袖损伤相关靶点357 个,取交集后获得95 个潜在作用靶点.(2)共获得 5 个关键活性成分和 5 个核心靶点,前者包括槲皮素、环(L-脯氨酸-L-苯丙氨酸)二肽、木犀草素、L-脯氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨酰甘氨酸、山柰酚,后者包括白细胞介素(IL)-1B、丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、纤维连接蛋白1(FN1).(3)GO功能富集分析结果显示,潜在作用靶点涉及的生物过程主要有脂多糖反应、低氧反应、过氧化氢反应、胶原分解代谢过程、蛋白水解等;KEGG通路富集分析结果显示,潜在作用靶点主要涉及晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体信号通路、缺氧诱导因子 1 信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、IL-17信号通路等.(4)分子对接结果显示所有关键活性成分与核心靶点蛋白均有良好的结合活性.结论 解痉散瘀汤的多个活性成分可能通过作用于IL-1B、AKT1、VEGFA、MMP9、FN1 等靶点,来影响与炎症反应、细胞凋亡及血管生成相关的信号通路,从而抑制炎症反应、调控损伤组织局部细胞凋亡、抑制组织过度重塑,进而发挥治疗肩袖损伤的作用.
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编辑人员丨2023/10/21
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亲免素在植物体内的功能研究进展
编辑人员丨2023/8/6
亲免素(immunophilin)是一种免疫抑制剂受体,广泛存在于细菌、病毒、真菌、植物和动物等生物体中.植物体内亲免素由FK506结合蛋白(FKBPs)、亲环素(CYPs)和parvulin蛋白构成.大多数亲免素具有肽基脯氨酰顺反异构酶活性,可以作为分子伴侣指导蛋白质的正确折叠.该文总结了亲免素在激素信号传递、光合作用、胁迫响应及基因表达等方面的最新研究进展,并对今后该领域的研究进行了展望.
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编辑人员丨2023/8/6
