目的:构建具有良好组织相容性的CD31抗体耦联脾脏脱细胞支架，经内皮细胞再种植实现支架脉管系统预血管化。方法:经脾动脉灌注1%曲拉通X-100(Triton X-100)/0.1%氨水制备大鼠脾脏脱细胞支架，苏木精-伊红(HE)染色和糖胺多糖(GAG)含量检测评价脱细胞效率， t检验分析脱细胞后DNA去除的效果。利用(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)将CD31抗体耦联到脾脏脱细胞支架，再种植人脐静脉内皮细胞(HUVECs)。继续培养3 d后，免疫荧光检测评价细胞黏附。体内移植2周后，经HE染色、免疫组织化学染色，评价支架体内血管生长及组织相容性。 结果:脾脏脱细胞支架HE染色未见明显细胞残留，脱细胞支架DNA含量[(43.26±5.14) ng/mg]较正常脾脏组织DNA含量[(5 896.00±393.90) ng/mg]明显减少( t＝14.860， P<0.05)。脱细胞支架GAG含量[(30.92±1.70) ng/mg]较正常脾脏组织GAG含量[(42.37±1.77) ng/mg]保留了70%以上。免疫荧光结果显示CD31成功结合到脱细胞支架中，且HUVECs定植于支架血管腔内，血管性血友病因子(vWF)呈阳性表达。支架体内移植2周后，HE染色、免疫组织化学结果显示CD31修饰脾脏脱细胞支架组血管生成数目明显多于未修饰组，且具有良好的组织相容性。 结论:大鼠脾脏脱细胞支架保留了基本的脉管结构及细胞外基质成分，CD31耦联修饰的脾脏脱细胞支架支持HUVECs的定植生长，且体内具有促血管生成作用，具有良好的组织相容性。

目的 体外构建基于脾脏脱细胞支架的组织工程肝脏,并探索其理想的体内植入策略.方法 获取健康SD大鼠脾脏,采用低温冻融结合十二烷基硫酸钠灌注法制备脾脏脱细胞支架(DSM).Seglen改良两步胶原酶灌注法获取大鼠原代肝细胞,经脾动脉再植入DSM内体外构建组织工程肝脏.以SD大鼠为受体,比较异位血管吻合移植、肝断面缝合移植、肝内嵌入移植以及肠系膜包裹移植4种策略的优缺点.结果 肝细胞支架种植率为(74.5±7.7)％,HE染色与扫描电镜显示细胞状态良好,免疫荧光染色证实细胞正常表达ALB、G6Pc.异位血管吻合移植手术难度高,围手术期死亡率高达33.3％,术后6h支架内形成大量血栓;肝断面缝合无法迅速建立充分血供,术后3d未见成形移植物;肝内嵌入移植法细胞最长可存活14d;肠系膜包裹移植术后14d时支架内细胞存活率为(38.3±7.1)％.结论 利用DSM构建的组织工程肝脏能部分表达肝细胞特异性功能,肠系膜包裹移植策略简单安全有效,是目前可行的体内移植方式.

目的:研制一种模块化三维灌注培养系统,解决目前培养系统结构复杂、难消毒、易污染的问题.方法:该系统主要由生物反应器模块、氧合模块、动力模块以及换液模块构成,各模块壳体通过3D打印制作.其中生物反应器模块主体为80 ml蓝口瓶,装载培养基及细胞支架复合物.氧合模块装载膜肺、空气过滤器、气泡过滤器等,为培养系统的核心组件.动力模块由蠕动泵和空气泵组成,为培养基及气体提供动力.换液模块中装有深紫外LED灯,可进行消毒和更换培养基.结果:通过该系统进行大鼠脾脏脱细胞支架培养,细胞与支架黏附紧密、生长状态良好,且未发生污染.结论:该系统具有结构合理、易消毒、污染少、制作成本低、稳定性高、易于扩展且操作简单的优点,可很方便地进行基于脱细胞支架的三维灌注培养,值得推广应用.

患者,男性,58岁,因"胸闷、气促2个月"收住苏州大学附属第一医院心内科,血清肌钙蛋白、磷酸肌酸激酶同工酶和乳酸脱氢酶(LDH)正常,胸部CT肺野未见异常(图1a),而纵隔淋巴结肿大,心肺查体阴性,考虑为淋巴瘤.胸腹部增强CT示纵隔及腹膜后淋巴结肿大和上腔静脉狭窄(图1b-d),肝脏和脾脏低密度阴影.纤维支气管镜行黏膜活检,经超声支气管针吸穿刺肿大的纵隔淋巴结(图1e-f).因患者出现颜面部及上肢水肿,植入上腔静脉支架,予地塞米松和低分子量肝素抗凝.