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基于不同黏膜佐剂的艰难梭菌类毒素B疫苗微针经皮免疫效应研究
编辑人员丨3天前
目的:探索基于不同黏膜佐剂的艰难梭菌类毒素B( Clostridium difficile toxoid B，CdtB)疫苗的微针经皮免疫效果，为艰难梭菌感染的防治提供思路。 方法:纯化的艰难梭菌B毒素(TcdB)经甲醛脱毒制备成CdtB疫苗，采用不同剂量的疫苗单独或加入黏膜佐剂的方法，于0 d、7 d、14 d、28 d、42 d微针经皮免疫雌性BALB/c小鼠，定期检测小鼠特异性血清IgG和粪便中IgA的效价水平变化，通过细胞中和试验和艰难梭菌人工感染免疫小鼠的方法来评价疫苗的免疫保护效果。结果:(1)CdtB疫苗单独微针免疫小鼠后，随着剂量与免疫次数的增加，产生了较好的血清特异性抗体IgG，粪便中也出现较高水平的IgA；(2)用含有热不稳定肠毒素(LT)佐剂、霍乱毒素B亚单位(CTB)佐剂的CdtB微针免疫小鼠，各组的血清特异性IgG效价趋势随着免疫剂量增加而提高，含有LT佐剂的免疫组效价变化趋势明显较好；与不加佐剂组比较，各组粪便中特异性IgA效价抗体水平变化趋势差异有统计学意义，但佐剂效应不明显；(3)分别用10 μg CdtB单独微针免疫小鼠和腹腔注射小鼠，虽然微针免疫与腹腔注射后小鼠血清IgG效价差别不大，但微针免疫可明显提高粪便中特异性IgA水平；(4)细胞中和试验和小鼠攻毒保护试验结果说明CdtB疫苗微针免疫可产生一定的保护效力。结论:CdtB疫苗微针经皮免疫小鼠的黏膜免疫效果较好，黏膜佐剂LT和CTB对CdtB疫苗的微针经皮免疫的佐剂效应不显著。
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编辑人员丨3天前
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表达LTB乳酸杆菌提高艰难梭菌类毒素疫苗黏膜免疫效应的研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 通过构建大肠埃希菌热敏性肠毒素B亚单位(heat labile enterotoxin B subunit,LTB)乳酸杆菌表达载体,研究其对艰难梭菌类毒素疫苗的黏膜免疫保护效应.方法 克隆LTB基因,制备pSIP411-LTB重组质粒,电转化到乳酸杆菌中,制备乳酸杆菌表达LTB载体;通过透析和层析等技术纯化艰难梭菌A毒素和B毒素,经甲醛处理获得的艰难梭菌A毒素和B毒素的类毒素作为疫苗候选抗原;在第0d、第14 d和第28 d皮下接种小鼠艰难梭菌类毒素和口服乳酸杆菌表达LTB载体;在初次接种后第0d、10d、24 d和38 d检测抗A毒素和B毒素的血清IgG和粪便IgA;第34 d,小鼠经口感染艰难梭菌,观察疫苗保护效果.结果 成功构建了LTB乳酸杆菌佐剂表达载体和制备了艰难梭菌A毒素和B毒素的内毒素;各疫苗组和疫苗+ LTB佐剂组小鼠在感染艰难梭菌后,均无腹泻、体重减轻和死亡现象,而对照组老鼠腹泻发病率为100％,死亡率42.86％,5d体重下降0.83 g;在初次接种后的10d、24 d和38 d,与空白组比较,各疫苗组抗A毒素或B毒素的血清IgG及粪便IgA显著升高(F=284.93,1 037.05,696.82,74,184.07,166.95,P＜0.01);与疫苗组比较,接种疫苗+LTB佐剂组的血清IgG及粪便IgA显著升高(F=21.88,27.22,8.31,56.49,63.76,101.78,P＜0.05).结论 艰难梭菌A毒素和B毒素的类毒素作为疫苗的候选抗原对艰难梭菌的感染具有很好的保护效应,LTB乳酸杆菌载体表达佐剂能够提高免疫动物的抗体效价,增强黏膜免疫效应.
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编辑人员丨2023/8/6
