目的 研究火把花根片(CRT)对高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)上皮-间充质转化(EMT)的影响并探讨其可能的作用机制.方法 体外培养HK-2,将HK-2分为以下5组:对照组(CON组)、高渗组(MA组)、高糖组(HG组)、高糖+火把花根片组(HG+CRT组)、高糖+PI3K抑制剂组(HG+LY29400组)、高糖+火把花根片+PI3K抑制剂组(HG+CRT+LY29400组).采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、磷酸酶和张力蛋白同系物(PTEN)mRNA表达水平;采用Western blot检测各组PTEN、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、E-cadherin、α-SMA的蛋白表达水平.结果 与CON组比较,HG组细胞α-SMA的蛋白及mRNA表达水平、p-Akt的蛋白表达水平、p-Akt/Akt比值升高,E-cadherin、PTEN的蛋白及mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与HG组比较,HG+CRT组细胞中α-SMA的蛋白及mRNA表达水平降低,E-cadherin的蛋白及mRNA表达水平相对增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与HG组比较,HG+LY29400组PI3K、p-Akt、α-SMA蛋白表达水平和p-Akt/Akt比值降低,PTEN的蛋白及mRNA表达水平、E-cadherin的蛋白表达水平升高,差异有统计 学意义(P＜0.05).与HG+CRT组比较,HG+CRT+LY29400组E-cadherin、α-SMA、PTEN、PI3K、Akt的蛋白表达水平及p-Akt/Akt比值差异均无统计学意义(P＞0.05),而p-Akt蛋白表达升高(P＜0.05).结论 在体外,CRT可以通过PTEN/PI3K/Akt信号通路逆转高糖诱导的肾小管上皮细胞 EMT.

目的 探讨十字花科蔬菜的天然植物化合物 3,3′-二吲哚甲烷(3,3′-diindolelmethane,DIM)在胃癌防治中的作用及其分子机制,为膳食植物营养应用于肿瘤预防提供实验依据.方法 采用不同浓度的DIM(0、20、40、60、80、100、120 μmol/L)处理人胃癌细胞系BGC-823 24 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞存活率,Western blot检测各组细胞钙蛋白酶(Calpain)、激活转录因子 4(ATF4)和CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)蛋白的表达水平;钙离子荧光探针检测细胞内钙离子浓度变化;使用激活转录因子 4(ATF4)的小干扰RNA(siRNA)特异性敲减胃癌细胞系中的ATF4,并用Western blot检测ATF4 和CHOP蛋白的表达水平,MTT法检测细胞存活率;应用钙离子螯合剂BAPTA-AM预处理胃癌细胞系BGC-823 后,Western blot检测Calpain、ATF4 和CHOP蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖活力改变情况.结果 MTT法、Western blot及钙离子荧光探针法检测结果表明,随着 DIM 浓度升高,BGC-823 细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),Calpain、ATF4 和CHOP蛋白的表达上调(P<0.05),细胞内钙离子荧光强度增强;转染ATF4 siRNA后,BGC-823 细胞ATF4 蛋白的表达降低(F=16.17,P<0.05),且与DIM+si-NC组相比,DIM+si-ATF4 组细胞存活率增加(F=74.46,P<0.05);进一步通过BAPTA-AM螯合细胞内钙离子后,与 DIM 组相比,DIM+BAPTA-AM 组 Calpain、ATF4 和 CHOP 蛋白的表达降低(F 分别为 24.58、34.93、24.45,P<0.05),细胞存活率增加(F=31.13,P<0.05).结论 DIM可增加细胞质钙离子浓度,上调Calpain、ATF4 和CHOP蛋白的表达水平,从而诱导胃癌细胞系发生内质网应激,抑制胃癌细胞的增殖.

目的:研究花椒提取物羟基-α-山椒素对异丙肾上腺素所致心肌缺血大鼠和过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)氧化损伤的保护作用及可能机制.方法:36只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、盐酸地尔硫卓20 mg/kg、羟基-α-山椒素5、10和20 mg/kg组.各组大鼠连续给药14 d,在13、14 d腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)40 mg/kg造成心肌缺血模型,超声心动图检查评估各组大鼠心功能;试剂盒检测血清丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和IL-6含量;实时荧光定量qRT-PCR法检测心肌组织Tnfa、Il1和Il6 mRNA表达;苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察心肌组织病理改变.体外培养H9c2细胞,用H2O2600 μmol/L处理H9c2细胞6 h构建氧化损伤体外细胞模型,随机分为正常对照组、模型对照组、羟基-α-山椒素2.5、5、10 μg/mL组.采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法筛选羟基-α-山椒素最佳给药浓度;采用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观测细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)浓度;ELISA法检测MDA、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和SOD含量或活力;蛋白质印迹法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(BAX)、血红素氧合酶1(HO-1)、切割胱天蛋白酶3(Cleaved-caspase3)和B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)蛋白表达水平.结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠左心室短轴缩短率(LVFS)和射血分数(LVEF)显著降低(P＜0.01),血清MDA、cTnl、LDH、CK-MB含量或活力显著升高(P＜0.01),GSH、SOD活力显著降低(P＜0.01),心肌组织中Il1b、Il6及Tnfa mRNA表达明显上调(P＜0.05);与模型对照组相比,羟基-α-山椒素各剂量组LVFS和LVEF明显升高(P＜0.05),羟基-α-山椒素20 mg/kg组MDA、cTnl、LDH、CK-MB含量或活力明显降低(P＜0.05),GSH、SOD活力明显升高(P＜0.05或P＜0.01),心肌组织中Il1b、Il6及Tnfa mRNA表达明显下调(P＜0.05),羟基-α-山椒素各剂量组心肌组织损伤减轻,心肌细胞胶原沉积减少.与正常对照组比较,H2O2模型对照组H9c2细胞活力、线粒体膜电位降低,细胞凋亡率、ROS水平、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6含量升高,GSH-Px、SOD活力降低(P＜0.01),经羟基-α-山椒素预处理后,H9c2细胞活力显著升高、线粒体膜电位升高,羟基-α-山椒素5、10 μg/mL组细胞凋亡率、ROS浓度、MDA、IL-1β、IL-6含量降低,GSH-Px、SOD活力显著升高(P＜0.01),羟基-α-山椒素10 μg/mL组细胞TNF-α含量显著降低(P＜0.01),羟基-α-山椒素处理H9c2细胞后Nrf2(核内)、HO-1、BCL-2蛋白表达上调,Nrf2(核外)、BAX、Cleaved-caspase3蛋白表达下调(P＜0.01).结论:羟基-α-山椒素可改善ISO所致心肌缺血大鼠的心功能、心肌损伤及纤维化程度,保护H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤,改善H9c2细胞凋亡,其作用机制可能与抑制氧化应激反应和炎症因子释放,激活Nrf2/HO-1信号通路有关.

目的:基于液相色谱-质谱联用法(LC-MS)的血清代谢组学探究大鼠乳腺增生的发生机制以及潜在差异代谢物.方法:将12只SPF级8周龄Wistar雌性大鼠随机分为正常组(n=6)和模型组(n=6),模型组给予肌肉注射苯甲酸雌二醇(0.5 mg·kg-1·d-1),连续注射21 d,随后肌肉注射黄体酮(4 mg·kg-1·d-1),连续注射7 d,制备乳腺增生模型.测定大鼠体重和乳头直径,并观察乳腺组织病理形态变化.造模成功后,利用大鼠血清进行LC-MS代谢组学分析,采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)筛选正常组与模型组血清中的差异代谢物,并通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)开放数据库对差异的标志物进行代谢通路分析.结果:与正常组大鼠相比,模型组大鼠体重无显著变化(P>0.05);乳头直径显著扩大(P<0.01);乳腺HE切片表现出典型的乳腺增生形态,表明造模成功.正常组与模型组血清样本的代谢模式存在显著差异,基于变量投影重要性(VIP)≥2.0和P<0.05的原则鉴定出30个差异代谢物,并且进一步进行ROC分析显示13种差异代谢物的AUC均大于0.9,表明这13种代谢物可能对乳腺增生的诊断具有较高的敏感度.经过KEGG通路富集分析显示,大部分差异代谢物主要富集在醛固酮的合成与分泌、鞘磷脂代谢、花生四烯酸代谢、细胞凋亡和胆固醇代谢等.结论:雌激素和孕激素诱导的乳腺增生大鼠的发病机制可能与改变胆汁酸及其衍生物代谢和脂质代谢途径有关.血清代谢组学鉴定出的13种敏感度较高的差异代谢物,可为乳腺增生疾病的诊断提供参考.

目的 基于代谢组学方法探讨芹菜素对高脂血症小鼠的肝脏保护作用及机制.方法 将C57BL/6 小鼠随机分为 4 组,分别为正常组、模型组、非诺贝特组(26.0 mg·kg-1)和芹菜素组(12.5 mg·kg-1),每组 6 只,灌胃给药,每日 1 次,连续给药 5 d.给药第 3 天,采用单次肌肉注射 0.12 g·mL-1 浓度的Triton WR-1339(5 mL·kg-1)诱导急性高脂血症小鼠模型.采用全自动酶标仪检测大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量;HE染色法观察肝脏组织病理变化.采用 UPLC-Q-TOF-MS/MS 分析小鼠肝脏组织样品,通过主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)等多元统计分析筛选差异代谢物.将差异代谢物的质谱信息通过HMDB、METLIN以及KEGG等在线数据库结合相关文献鉴定出潜在差异代谢物.将已鉴定的潜在差异化合物导入MetaboAnalyst平台进行代谢通路分析.结果 与正常组比较,模型组小鼠的血清TC、TG水平显著升高(P＜0.01),肝组织的细胞排列不规律,脂肪空泡和炎性细胞浸润明显.与模型组相比,芹菜素组的血清TC、TG水平有降低,但差异无统计学意义(P＞0.05);肝脏组织脂肪病变得到明显改善,脂肪空泡和炎性细胞浸润均明显减少.共筛选出 35 个潜在差异性标志物,芹菜素给药后有 26 个具有回调趋势.差异代谢物共影响了 8 条代谢通路,其中 2 条主要代谢通路(P＜0.05)分别为泛酸盐和辅酶A(CoA)生物合成、花生四烯酸代谢.结论 芹菜素对高脂血症小鼠具有一定肝脏保护作用,其作用机制可能与调控肝脏炎症反应及脂质代谢相关通路有关.

目的:探讨花旗松素（taxifolin，TAX）改善顺铂（cisplatin）致急性肾损伤的作用及机制。方法:（1）40只C57BL/6小鼠随机分为4组：对照组、TAX组、顺铂组、顺铂+TAX组。测量各组小鼠体重情况。检测各组小鼠血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平；通过HE染色观察小鼠肾组织病理学改变；通过酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定血清炎性因子白细胞介素（IL）-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α水平；通过试剂盒测定各组小鼠肾组织氧化应激指标[活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、还原型谷胱甘肽（GSH）]；实时荧光定量PCR法测定炎性因子 IL- 6、 TNF- α和 IL- 1β，抗氧化基因解耦联蛋白2（ UCP2）、 SOD2、 CAT以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（ PGC- 1α）mRNA表达情况；通过测定肾组织ATP水平和线粒体DNA（mtDNA）含量评价线粒体功能；通过Western印迹法测定腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）和磷酸化（p）-AMPK蛋白表达情况。（2）通过建立Lewis肺癌移植瘤C57BL/6小鼠模型评价TAX对顺铂化疗效果的影响。 结果:与对照组比较，TAX组小鼠体重未明显降低，且未出现明显肾损伤（均 P>0.05），提示口服TAX具有良好的安全性。与顺铂组比较，TAX能够显著延缓顺铂引起的小鼠体重下降，降低小鼠血清Scr和BUN水平，并缓解肾组织病理学改变（均 P<0.05）。TAX能够显著下调顺铂诱导的小鼠血清炎性因子IL-6和TNF-α水平，以及肾脏炎性因子 IL- 6、 TNF- α、 IL- 1β mRNA表达（均 P<0.05）。TAX能够显著降低顺铂致急性肾损伤小鼠肾组织ROS和MDA水平，并提高SOD、CAT和GSH活性（均 P<0.01）。同时，TAX能够显著上调顺铂致急性肾损伤小鼠肾脏抗氧化基因 UCP2、 SOD2、 CAT mRNA以及 PGC- 1α mRNA表达，并提高肾组织ATP和mtDNA水平（均 P<0.01）。Western印迹结果显示，TAX显著促进顺铂致急性肾损伤小鼠肾脏AMPK磷酸化蛋白表达（ P<0.01）。此外，通过Lewis肺癌移植瘤C57BL/6小鼠模型证实，TAX对顺铂抗肿瘤疗效无显著影响。 结论:TAX能够改善顺铂引起的肾脏氧化损伤，其机制可能与激活AMPK/PGC-1α通路有关。

本期《头颈部鳞状细胞癌免疫检查点抑制剂治疗专家共识》系统阐述了免疫检查点抑制剂的机制与治疗数据、免疫治疗技术参数、免疫相关不良事件及处理，以及临床诊疗实践，旨在指导国内同行安全、科学和规范地开展头颈部鳞状细胞癌的免疫治疗及相关的临床试验。论著《携带线粒体DNA致病突变家庭的聋病遗传咨询特征分析》发现携带线粒体DNA致病突变个体及其母系家庭成员发生耳聋的风险较高，但携带者的发病年龄、听力损失程度及外显率等存在显著差异，在遗传咨询中需要明确排除核基因可疑致病变异并分析携带者的线粒体DNA突变比例，同时完善首诊个体及其母系家庭人员的听力检测，以咨询家庭为单位进行线粒体突变表型-基因型特征分析，有利于线粒体耳聋遗传咨询个性化的临床决策。论著《坏死性外耳道炎23例临床分析》提出坏死性外耳道炎临床表现缺乏特异性，诊断需根据病史、体格检查及辅助检查综合判断；可根据不同临床分期制定相应的治疗措施；治疗以多学科综合治疗为基础，以手术治疗为主；尽早干预预后较好，但合并多组颅神经损伤及颅内感染的患者预后不佳。论著《顺铂诱导氧化应激引起耳蜗血管纹周细胞线粒体途径的细胞凋亡》发现顺铂可升高耳蜗内氧化应激水平导致C57BL/6J小鼠耳蜗血管纹周细胞凋亡，从而提血迷路屏障的通透性，造成听力损失。论著《siRNA沉默STAT6抑制嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎产生的实验性研究》发现经鼻滴入信号传导和转录激活因子6（STAT6）小干扰RNA（siRNA）可下调鼻黏膜STAT6表达，降低磷酸化STAT6（p-STAT6）水平，抑制小鼠嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎的产生。新技术新材料《汉语普通话CMnBio测听句表的编制及在成年人工耳蜗植入者中的验证》建立了面向成年人工耳蜗植入者、具有良好等价性的26张普通话CMnBio句表，并提供了使用单张表和二张表时识别率得分95%置信度下的临界差值，为普通话成人人工耳蜗临床实践及开展跨语种成效对比研究，提供了一个可避免天花板效应的实用工具。

目的:探讨间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征（IC/BPS）模型小鼠的膀胱外周感觉神经元的兴奋性和P2X受体介导的嘌呤能信号传导的变化。方法:雄性C57小鼠50只，2月龄，体质量16~20 g。通过在膀胱壁上注射逆行示踪荧光染料3′-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐（DiI），标记腰骶（LS：L 6~S 2）和胸腰（TL：T 13~L 2）背根神经节中的膀胱感觉神经元。两周后，在第1、3和5天腹腔注射环磷酰胺（CYP，80 mg/kg，1次/48 h）建立间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征（IC/BPS）小鼠模型（CYP组， n=25），对照组（ n=25）小鼠腹腔注射等量生理盐水。第6天取小鼠膀胱组织，使用苏木精-伊红（HE）染色法评估膀胱组织病理学改变，髓过氧化物酶（MPO）测试评估组织炎症水平，并使用全细胞膜片钳记录LS和TL背根神经节中的DiI阳性膀胱感觉神经元的兴奋性和三磷酸腺苷（ATP）诱导的P2X受体电流。 结果:与对照组相比，80 mg/kg CYP未诱发显著组织学改变或影响MPO水平，但提高了LS和TL膀胱感觉神经元的兴奋性：CYP组和对照组LS神经元基强度分别为（119±9）、（144±8）pA，TL神经元基强度分别为（123±10）、（162±17）pA；相比于对照组，CYP组LS和TL神经元基强度均显著降低，差异均有统计学意义（ t=2.025、2.047，均 P<0.05）。给予P2X受体激动剂ATP灌流后，CYP组的LS膀胱感觉神经元的P2X受体电流类型发生了显著变化：CYP组LS神经元的P2X2受体介导持续性电流比例为39.3%，显著高于对照组的9.5%；P2X2/3受体介导的慢脱敏电流比例为60.7%，显著低于对照组的90.5%，差异有统计学意义（ P=0.025），提示CYP组小鼠LS神经元中的P2X2受体功能上调；TL膀胱感觉神经元的P2X受体电流类型（主要为P2X2/3受体介导的慢脱敏电流和P2X3受体介导的快脱敏电流）占比无明显变化。 结论:IC/BPS模型小鼠的膀胱神经元兴奋性升高，并且LS神经元的P2X受体电流成分出现变化，提示膀胱神经元的兴奋性升高和P2X受体的功能上调早于器质性病理改变，感觉神经元嘌呤能信号传导变化可能是IC/BPS的重要病理机制。

目的:分析过敏性鼻炎(allergic rhinitis，AR)患者外周血CD4 ＋Th17细胞中IL-18、IL-18结合蛋白a(IL-18-binding protein a, IL-18BPa)和IL-18受体α(IL-18 receptor α，IL-18Rα)的表达水平及过敏原对其表达的影响。 方法:选择2019年10月—2020年9月锦州医科大学附属第一医院过敏反应科门诊AR患者45例和该医院体检中心体检者23例(健康对照组)为研究对象。根据皮肤点刺试验结果，将患者分为阳性组(AR组，24例)和阴性组(nAR组，21例)。收集受试者血液样本，流式细胞术检测过敏原对CD4 ＋Th17细胞中IL-18、IL-18BPa和IL-18Rα蛋白质表达水平的影响。Bioplex检测血浆中IL-17A水平，并分析其与IL-18 ＋Th17细胞比例的相关性。 结果:与健康对照组比较，AR组患者CD4 ＋Th17细胞和IL-18 ＋Th17细胞比例均增加( P<0.01)，IL-18BPa ＋Th17细胞比例降低( P<0.01)，IL-18BPa的平均荧光强度(mean fluorescence intensity，MFI)增加( P<0.01)，IL-18Rα的MFI降低( P<0.01)；nAR组患者CD4 ＋Th17细胞IL-18BPa的MFI增加( P<0.000 1)，IL-18Rα的MFI降低( P<0.000 1)。与nAR组患者比较，AR组患者IL-18 ＋Th17细胞比例( P<0.05)和IL-18Rα的MFI均增加( P<0.01)。户尘螨和梧桐花粉过敏原粗提液能分别诱导AR组患者IL-18 ＋Th17和IL-18BPa ＋Th17细胞比例增加( P<0.05)。户尘螨过敏原粗提液可直接诱导分选后的健康对照者CD4 ＋Th17细胞表达IL-18和IL-18Rα( P<0.05)。AR组患者血浆IL－17A水平升高( P<0.001)，并与IL-18 ＋Th17细胞比例中度相关( P<0.05)。 结论:过敏原可能通过诱导外周血CD4 ＋Th17细胞表达IL-18和IL-18Rα参与AR发病。

莱菔硫烷(SFN)是十字花科蔬菜中富含的一种异硫氰酸盐，是具有较强抗癌活性的植物活性物质之一。SFN能保护细胞免受环境致癌物的伤害，诱导多种癌细胞生长阻滞和凋亡。本文就SFN在肿瘤预防、治疗及在肿瘤干细胞中的作用等方面的研究进展进行综述，探讨在临床中应用SFN进行癌症预防的可行性，并为减少恶性肿瘤的发展和复发从而提高患者的生存率提供新策略。