酸浆苦素是茄科酸浆属植物(如锦灯笼、苦蘵等)的主要成分,为13,14-裂环-16,24-环麦角甾烷类化合物,酸浆苦素B (PB)是该类化合物中具有较强活性的成分之一.本文从主要来源、提取与分离、药理作用、药代动力学、临床应用等方面阐述PB的药用价值,为其进一步研发提供参考.

[目的]探索信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)新型抑制剂苦蘵内酯J诱导肺腺癌细胞凋亡的分子机制.[方法]以5、10、20、25、30、40μmol·L-1苦蘵内酯J处理表皮细胞生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR) T790M继发突变的肺腺癌细胞株H1975细胞24h或48h后,CCK-8法检测细胞存活率;5、10、15、20μmol·L-1苦蘵内酯J处理H1975细胞24h后,Annexin V-PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡率,Westem blot检测凋亡相关蛋白的表达;5、10、15、20μmol·L-1苦藏内酯J处理H1975细胞4h或20μmol·L-1苦蘵内酯J处理H1975细胞0.5、1、2、4h后,Western blot检测STAT3蛋白表达及其磷酸化水平;以20μmol· L-1蛋白酶体抑制剂MG132及10μ mol·L-1苦蘵内酯J联合处理或单独处理H1975细胞,阐明苦蘵内酯J对STAT3蛋白的降解作用;20μmol·L-1苦蘵内酯J处理H1975细胞4h后,实时荧光定量PCR检测STAT3 mRNA表达情况.[结果]H1975细胞存活率随苦蘵内酯J作用时间延长和作用浓度增加而不断降低,20μmol·L-1苦蘵内酯J处理24h和48h,H1975细胞存活率分别为65.9％和44.2％;20μmol·L-1苦蘵内酯J处理24h后,H1975细胞凋亡率为51.1％;Westem blot检测显示20μmol·L-1苦蘵内酯J处理24h后,H1975细胞内cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3和cleaved-PARP蛋白表达水平显著高于未处理组(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001);20μmol·L-1苦蘵内酯J处理4h后,H1975细胞内STAT3总蛋白和STAT3-Tyr表达水平显著低于与未处理组(P＜0.001);蛋白酶体抑制剂MG132可恢复STAT3的总蛋白水平;实时荧光定量PCR结果显示,苦蘵内酯J对STAT3 mRNA表达无影响(P＞0.05).[结论]苦蘵内酯J能够抑制H1975细胞增殖并诱导细胞凋亡,其可能的机制是引起STAT3泛素化降解并抑制STAT3磷酸化.

目的:研究苦蘵育种F1群体真伪.方法:以浙江临海和浦江两个种源的苦蘵为亲本,对获得的85个杂交F1代,利用200对全基因组SSR标记进行杂交后代真伪鉴定.结果:筛选出2对可进行苦蘵F1代个体杂种鉴定的特异性SSR标记SSR0959和SSR0116.其中利用这两对SSR标记证实本研究构建的苦蘵杂交F1代群体的85个单株均为双亲互补型(真杂交种).结论:通过SSR分子标记技术可以快速、准确的鉴定出苦蘵杂交群体中的真杂交种,为后续苦蘵高密度遗传连锁图谱的构建以及有效成分的QTL定位研究奠定基础.

目的:研究茄科酸浆属植物苦蘵(Physalis angulata)的内生真菌哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的次级代谢产物.方法:菌株采用震荡培养箱扩大培养,得到的菌液用乙酸乙酯等体积萃取3次,菌丝体则以丙酮浸泡超声,回收溶剂后将所得提取物合并,再经液相-质谱联用技术,开放ODS反相柱色谱,LH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱色谱(sephadex LH-20),高效液相色谱等方法进行成分的分析与分离纯化活性次级代谢产物.利用其理化性质和光谱数据(1H-NMR,13C-NMR)等鉴定化合物结构.采用噻唑蓝(MTT)法测定化合物的细胞毒性.结果:从苦蘵内生真菌哈茨木霉中分离得到10个次级代谢产物,分别鉴定为destruxin A2(1),destruxin B2 (2),环(亮-脯)二肽(3),环(苯丙-脯)二肽(4),cyclonerodiol(5),brevianamide F(6),N-乙酰色胺(7),9-羟基-邻苯二甲酸二异丁基酯(8),5-羟基-3-羟甲基-2-甲基-7-甲氧基色酮(9)和苯丙酸(10).细胞毒性试验结果显示,化合物1～ 10对肺癌细胞株A549均未表现出显著的细胞毒性(半抑制浓度≥20 mg·L-1).结论:化合物1～10均首次从哈茨木霉中分离得到.

肝纤维化是慢性肝损伤的常见瘢痕反应,细胞外基质的过度积累是其主要特征,其中肝星状细胞的过度激活是肝纤维化发生的关键步骤.苦蘵睡茄内酯提取物(the withanolide extract of Physalis angulata,WEP)是从中药苦蘵(Physalis angulata L.)中提取富集的部位,主要含有酸浆苦素型的睡茄内酯类化合物.本实验通过建立四氯化碳及胆总管结扎诱导的小鼠肝纤维化模型,以及转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)处理诱导的人肝星状细胞LX-2活化模型,结合不同浓度的WEP处理,研究WEP对肝纤维化的治疗作用,并探讨潜在的作用机制.本文中所有动物实验都获得中国药科大学伦理学委员会批准.动物实验结果显示,与模型组相比,WEP可降低血清中谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)和谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)水平,减轻肝损伤,显著降低胶原沉积,改善肝纤维化水平.WEP对LX-2细胞无明显细胞毒性,但可显著降低肝纤维化标志物Ⅰ型胶原α1 (collagen type Ⅰ α 1 chain,COL1A1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,αSMA)的mRNA和蛋白表达,抑制肝星状细胞活化.在体内外模型中,WEP可抑制yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP)的表达及Smad家族蛋白2(Smad family member 2,Smad2)的磷酸化水平.综上,WEP可通过下调YAP和TGF-β/Smad通路抑制肝星状细胞活化,在体内外表现出良好的抗肝纤维化活性.