“药源性证候”是中医临床面临的新生学术问题,其发生源于药物不良反应引起的机体微环境变化,进而对原证候所产生的影响,属于药物在治疗确定病证时导致的继发新病证.结合对临床常见“药源性证候”的分析,认为应广泛深入开展“药源性证候”的临床流行病学调查研究,研发“药源性证候”规范化与标准化动物模型,进而探究其发生的物质基础,以助于提高中西医结合治疗模式的整体疗效.

目的:研究大剂量氢化可的松短期给药诱发小鼠药源性证候的特征及对肾上腺皮质功能的影响.方法:32只雄性ICR小鼠随机分为对照组与氢化可的松不同剂量干预组(12.5 mg·kg-1·d-1组、25 mg·kg-1·d-1组、50 mg·kg-1·d-1组),每组8只.氢化可的松不同剂量组小鼠分别灌胃给予相应浓度的氢化可的松溶液,对照组小鼠灌胃给予相同体积灭菌水,连续5d.分别于给药第1、3、5天称量每只小鼠体质量.末次给药后,采用课题组前期建立的小鼠辨证论治实验方法学检测小鼠表征信息(躯体不同部位红外温度、腋温、抓力);取各只小鼠胸腺、脾脏称重,计算脏器指数;分离肾上腺组织,实时荧光定量PCR技术检测类固醇激素合成酶(Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1)基因表达,Western blot检测StAR、SRBI与LDLR蛋白表达.结果:①给药1、3、5d后,氢化可的松25mg·kg-1 ·d-1和50 mg·kg-1·d-1组小鼠的体质量均较对照组显著降低(P＜0.05,P＜0.01).②给药5d后,氢化可的松12.5 mg·kg-1·d-1和25 mg· kg-1 ·d-1组小鼠的头部最高温度均较对照组显著降低(P＜0.05),但氢化可的松各剂量组小鼠的躯干平均温度、尾部最低温度、腋温、抓力无明显变化.③与对照组相比,氢化可的松各剂量组小鼠的脾脏指数均明显下降(P＜0.01),且呈剂量依赖性;50 mg·kg-1·d-1组小鼠的胸腺指数较对照组显著降低(P＜0.01).④与对照组相比,氢化可的松25mg·kg-1 ·d-1和50mg· kg-1·d-1组肾上腺组织中Star、Cyp1 1a1、Cyp11b1和Cyp21a1的mRNA表达均显著减少(P＜0.05,P＜0.01),StAR、LDLR和SRBI蛋白表达均显著降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:大剂量氢化可的松(25 mg· kg-1·d-1和50mg· kg-1·d-1)短期给药5d可显著抑制小鼠肾上腺皮质功能,其证候表现以药源性阴虚证为主.

目的 评价氢化可的松诱发小鼠药源性脾肾虚证模型,并探索其物质基础.方法 80只ICR小鼠按随机分为对照组、极低、低、中、高剂量组,每组16只,分别采用灭菌水、0.33、0.66、3.3、12.5 mg/(kg·d)氢化可的松灌胃.每日动态观测小鼠体重,并分别在给药第7天和第14天,检测小鼠抓力、旷场活动度、躯体不同部位红外温度等表征信息.分别于给药第8天和第15天各处死小鼠8只,取脾脏、胸腺、心脏和肾脏称重并计算脏器指数;ELI SA检测血清皮质酮(CORT)和促肾上腺皮质激素(ACTH)含量;实时荧光定量PCR检测肾上腺StAR、Cyp 11 a1、Cyp21 a1、Cyp11 b1、Cyp11 b2 mRNA表达;Western Blot检测肾上腺LDLR、SRBI、StAR蛋白表达.结果 与对照组同期比较,低、中剂量组4～14天体重下降(P＜0.05),极低剂量组7天尾部最低温度、StAR、Cyp21 a1 mRNA表达,14天头部最高温度、躯干平均温度、尾部最低温度以及ACTH含量、LDLR、StAR蛋白表达下降(P ＜0.05,P＜0.01),14天抓力上升(P＜0.05);低、中、高剂量组7、14天头部最高温度、躯干平均温度、尾部最低温度、胸腺重量和指数下降(P ＜0.05,P＜0.01);低剂量组7、14天StARmRNA、LDLR、StAR表达下降(P ＜0.05,P＜0.01),14天CORT含量、ACTH、Cyp11a1、Cyp11b1 mRNA表达下降(P＜0.05,P＜0.01);中、高剂量组7、14天脾脏重量和指数、CORT含量、ACTH、StAR、Cyp21a1、Cyp11b1 mRNA、LDLR、SRBI、StAR表达下降(P ＜0.05,P＜0.01),14天Cyp1 1 a1、Cyp11b2 mRNA下降(P ＜0.05,P＜0.01);高剂量组14天体重、旷场活动度下降(P＜0.05).结论 采用0.66及3.3 mg/(kg·d)氢化可的松持续给药14天可建立稳定的药源性脾肾虚证小鼠模型,可能与其降低肾上腺皮质激素合成酶表达和垂体-肾上腺皮质轴功能有关.

目的 研究糖皮质激素药物作用于不同品系小鼠后肾上腺皮质功能抑制程度及其诱导药源性证候的差异性.方法 选用ICR、BALB/c、C57BL/6J、KM和裸小鼠5种小鼠为实验对象,采用泼尼松龙进行干预.每种小鼠16只,其中正常对照组8只,泼尼松龙组8只.以0.5 mg/(kg·d)泼尼松龙连续灌胃14 d,每日观测小鼠体重,在给药第14天,运用小鼠辨证论治实验方法学检测小鼠中医四诊信息,次日处死小鼠,取脾、胸腺称重并计算脏器指数;运用ELISA检测血清皮质酮和ACTH含量;采用实时荧光定量PCR技术检测肾上腺Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2基因表达;运用Western blot方法检测肾上腺LDLR、SRBI、StAR蛋白表达.结果 与各自对照组比较:1)0.5 mg/(kg·d)泼尼松龙给药后第7天起ICR小鼠体重显著下降(P<0.01);给药后第13天起BALB/c小鼠体重显著下降(P<0.01);给药后第5天起C57BL/6J小鼠体重显著下降(P<0.01);给药后第13天裸鼠体重显著下降(P<0.05).2)泼尼松龙导致ICR小鼠抓力显著下降以及躯干平均温度显著降低(P<0.05).3)泼尼松龙导致ICR小鼠和裸鼠脾重量显著下降(P<0.01)以及裸鼠脾指数下降(P<0.05),泼尼松龙导致ICR、C57BL/6J和KM小鼠胸腺重量和胸腺指数均显著下降(P<0.01).4)泼尼松龙显著导致BALB/c与KM小鼠血清皮质酮下降(P<0.05),也显著引起BALB/c小鼠血清促肾上腺皮质激素(ACTH)含量下降(P<0.01).5)泼尼松龙显著下调ICR小鼠肾上腺Cyp21a1基因表达(P<0.05),下调C57BL/6J小鼠Star基因表达(P<0.01),下调KM小鼠Cyp11a1、Cyp21a1基因表达(P<0.01),下调裸鼠Star与Cyp21a1基因表达(P<0.05);且泼尼松龙抑制ICR小鼠肾上腺LDLR蛋白表达以及KM小鼠肾上腺StAR蛋白表达.结论 泼尼松龙造成的小鼠药源性虚证主要表现为"气虚",涉及中医"肾藏象"与"脾藏象",其物质基础以肾上腺皮质类固醇激素合成酶分子表达被抑制以及垂体-肾上腺皮质轴功能被抑制为主;开展糖皮质激素药源性虚证研究建议首选ICR小鼠.

目的 探讨泼尼松龙诱发小鼠药源性证候的特征及可能物质基础.方法 80只ICR小鼠随机分为正常对照组、极低剂量组、低剂量组、中剂量组、高剂量组各16只.极低剂量组、低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予醋酸泼尼松龙片0.25、0.5、2.5、12.5mg/(kg·d)灌胃,正常对照组给予等量灭菌水.每组16只中8只干预7天,另外8只干预14天.隔日动态观测小鼠体质量,分别比较干预不同时间各组小鼠体质量、抓力、腋温、旷场活动度、躯体不同部位红外温度等表征信息;取小鼠脾脏、胸腺和睾丸称重并计算脏器指数;检测血清皮质酮和促肾上腺皮质激素(ACTH)含量;检测肾上腺功能相关基因表达和肾上腺低密度脂蛋白受体(LDLR)、B族Ⅰ型清道夫受体(SRBI)、类固醇合成急性调节蛋白(StAR)蛋白表达.结果 中剂量组和高剂量组干预7天和干预14天,小鼠体质量、脾脏质量、胸腺质量、脾脏指数、胸腺指数较正常对照组同时间下降,血清皮质酮和ACTH含量、肾上腺功能相关基因表达和肾上腺LDLR、SRBI、StAR蛋白均较正常对照组不同程度降低(P＜0.05),而各组小鼠抓力、腋温、旷场活动度、躯体不同部位红外温度差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 泼尼松龙造成的小鼠药源性虚证为阴虚证,该药源性虚证的物质基础可能以肾上腺皮质类固醇激素合成酶分子表达被抑制以及垂体-肾上腺皮质轴功能被抑制为主.

目的 研究不同治法中药配伍调节肾上腺皮质功能的作用.方法 小鼠ig给予1.65 mg/(kg·d)氢化可的松14 d诱发药源性证候,同步给予助阳散寒(附子-肉桂)、滋阴泻火(知母-黄柏)、补气生津(人参-黄芪)、补血益精(熟地-山茱萸)4种中药药对干预,检测小鼠体质量、抓力、腋温、旷场活动度、躯体不同部位红外温度等表征信息;取脾脏、胸腺称定质量并计算脏器指数;运用ELISA法检测血清皮质酮、促肾上腺皮质激素(ACTH)、肾上腺素和去甲肾上腺素含量;采用实时荧光定量PCR技术检测肾上腺类固醇合成急性调节蛋白(STAR)、胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1)、21-羟化酶(Cyp21a1)、11β-羟化酶1(Cyp11b1)和11β-羟化酶2(Cyp1 1b2)、酪氨酸羟化酶(Th)、多巴胺脱羧酶(Ddc)、多巴胺β-羟化酶(Dbh)、苯乙胺-N-甲基转移酶(Pnmt)基因表达;运用Western blotting方法检测肾上腺低密度脂蛋白受体(LDLR)、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BI)、StAR蛋白表达.结果 4种治法对氢化可的松造成的小鼠体质量下降和体温下降效果不显著,附子-肉桂组小鼠抓力显著高于模型组(P＜0.05).与模型组比较,知母-黄柏组小鼠血清皮质酮含量显著升高(P＜0.01),StAR、Cyp11b1、Cyp11b2基因表达水平显著升高(P＜0.05、0.01),SR-BI、StAR蛋白表达水平均显著升高(P＜0.01).结论 滋阴泻火治法寒性药对(知母-黄柏)对小剂量氢化可的松诱发的药源性证候小鼠肾上腺皮质功能的纠正作用最佳.

目的 运用红外热像技术评估糖皮质激素药源性证候小鼠"阳"盛衰程度.方法 将120只ICR小鼠分3次实验依次开展,每次实验分成正常对照组以及4个不同剂量糖皮质激素(氢化可的松、泼尼松龙、地塞米松)用药组,在给药第14天拍摄各组小鼠的红外热像图,并尝试分析小鼠头部、侧腹部、尾根部共三个区域的温度情况.结果 氢化可的松和地塞米松给药后小鼠头部最高温度、躯干平均温度和尾部最低温度均出现不同程度的下降.泼尼松龙给药后仅仅极低剂量组小鼠头部最高温度出现显著下降.结论 红外热像技术可以评估实验小鼠"阳"盛衰程度;氢化可的松和地塞米松可诱发药源性虚证小鼠类似阳虚的外寒征象.

目的 研究补肾健脾法对氢化可的松诱发的脾肾虚证小鼠肾上腺功能的影响.方法 将60只ICR小鼠随机分为正常对照组、氢化可的松组、四君子汤组[12.75 g(生药)/kg]、六味地黄汤组[12.5 g(生药)/kg]、桂附地黄汤组[13.5 g(生药)/kg],连续灌胃给药氢化可的松(1.65 mg/kg) 14 d建立药源性证候模型;各中药复方组在灌胃氢化可的松的同时及停止氢化可的松灌胃后7d,每日分别灌胃给药3个中药复方.每日称定小鼠体质量;在第14、21天,运用小鼠辨证论治实验方法学观测小鼠四诊指标;在第15、22天,计算脾脏、胸腺指数,EHSA检测血清皮质酮、促肾上腺皮质激素、肾上腺素和去甲肾上腺素水平,采用实时荧光定量PCR技术检测Star、Cyp11a1、Cyp21a1、CyP11b1、Cyp11b2、Dbh、Ddc、Pnmt、Th mRNA表达,Western blot检测LDLR、SRBI、Star蛋白表达.结果 氢化可的松干预后,小鼠体质量,抓力,尾部最低温度,脾脏、胸腺指数,血清皮质酮、促肾上腺皮质激素水平显著下降(P＜0.05,P＜0.01);显著抑制相关肾上腺类固醇激素合成酶(Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1)mRNA表达(P＜0.05,P＜0.01),并抑制胆固醇转化为肾上腺类固醇激素过程中相关蛋白(LDLR、SRBI、StAR)表达.与氢化可的松组比较,桂附地黄汤组显著增加小鼠抓力(P＜0.01),四君子汤组、六味地黄汤组和桂附地黄汤组显著升高血清皮质酮均水平(P＜0.01),四君子汤组、桂附地黄汤组明显抑制Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1 mRNA表达(P＜0.05,P＜0.01),3个复方组能改善LDLR、SRBI、StAR蛋白下降.结论 桂附地黄汤对小鼠阳虚证候有所改善,3个中药复方对小鼠阴虚证候疗效不显著.3个中药复方对氢化可的松诱发的肾上腺皮质功能抑制均有缓解作用.

目的:研究地塞米松诱发小鼠药源性证候的特征及其量效物质基础.方法:采用0.0125、0.05、0.25、1.25mg·kg-1·d-1共4个浓度地塞米松灌胃ICR小鼠,每组16只,并设置正常对照组16只.每日动态观测小鼠体质量,并分别在给药第7天和第14天,运用小鼠辨证论治实验方法学检测小鼠体质量、抓力、腋温、旷场活动度、躯体不同部位红外温度等表征信息;次日处死小鼠,取脾脏、胸腺称重并计算脏器指数;运用ELISA检测血清皮质酮和促肾上腺皮质激素(ACTH)含量;采用实时荧光定量PCR技术检测肾上腺Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2基因表达;运用Western blot方法检测肾上腺LDLR、SRB1、StAR蛋白表达.结果:给药7d和14d后,与正常对照组比较,0.25mg·kg-1·d-1以上的地塞米松给药后体质量迅速下降,5d后下降减缓;与正常对照组比较,0.25mg·kg-1·d-1以上的地塞米松给药后小鼠脾脏和胸腺指数显著下降(P＜0.05);不同剂量地塞米松均造成小鼠躯体体表温度下降;0.0125mg·kg-1·d-1以上地塞米松抑制皮质酮分泌,地塞米松抑制Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2 mRNA和LDLR、SRBI、StAR蛋白表达.结论:地塞米松造成的小鼠药源性虚证兼有阴虚、阳虚和气虚,其脏腑定位主要在中医肾藏象、脾藏象.地塞米松药源性虚证模型建议采用ICR小鼠,给药剂量在0.25mg·kg-1·d-1左右,用药持续时间7d.

目的:研究补肾复方对小剂量氢化可的松减停给药诱发的小鼠证候及肾上腺皮质功能的影响.方法:48只雄性ICR小鼠随机分为正常组、氢化可的松组、六味地黄汤组、桂附地黄汤组,每组12只.每组给予1.32 mg· kg-1·d-1氢化可的松28 d减半剂量7d停止用药14 d造模,减量及停药阶段同步给予相应组六味地黄汤药液12.5 g·kg-1·d-1,桂附地黄汤药液13.5 g·kg-1·d-1,连续21d.实验第28,49天采用小鼠辨证论治实验方法学检测小鼠表征信息(抓力、体表红外温度);在实验第50天处死小鼠取材,摘取脾脏、胸腺,计算脾脏与胸腺脏器指数;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清皮质酮含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾上腺类固醇合成急性调节蛋白(Star),胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1),细胞色素P450家族21亚家族A多肽1(Cyp21a1),细胞色素P450家族11亚家族b多肽1(Cyp11b1),低密度脂蛋白受体(Ldlr),B类Ⅰ型清道夫受体(Scarb 1/SRBI),3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(Hmgcr),酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶-1 (Acat1),激素敏感性脂肪酶(HSL/LIPE),胰岛素诱导基因1(Insig1),固醇调节元件结合转录因子2(Srebf2)mRAN表达;蛋白免疫印迹法(Western b1ot)检测低密度脂蛋白受体(LDLR),B类I型清道夫受体(Scarb 1/SRBI),胆固醇侧链裂解酶(CYP11A1),胆固醇21-羟化酶(CYP21A2)蛋白表达.结果:与正常组比较,连续给药28 d后,模型组小鼠体质量与躯体平均红外温度均显著下降(P＜0.01);减停造模后,模型组小鼠抓力明显下降(P＜0.05),胸腺指数显著升高(P＜0.01),血清皮质酮含量明显降低(P＜0.05),肾上腺Cyp21a1,Hmgcr mRNA表达明显下降(P＜0.05,P＜0.01),Lipe,Acat1 mRNA表达显著上升(P＜0.01),肾上腺CYP11A1,SRBI蛋白表达显著下降,LDLR蛋白表达上升.与模型组比较,中药治疗21d后,桂附地黄汤组小鼠体质量显著下降(P＜0.01);六味地黄汤组小鼠脾脏指数显著下降(P＜0.01);桂附地黄汤组Cyp11a1,Cyp21a1,Acat1,Lipe mRNA表达明显上升(P＜0.05,P＜0.01),Ldlr,Scarb1 mRNA表达明显下降(P＜0.05),六味地黄汤组Ld1r,Acat1,Lipe mRNA表达明显下降(P＜0.05,P＜0.01);六味地黄汤及桂附地黄汤组CYP11A1,SRBI蛋白表达上升.结论:桂附地黄汤可通过纠正肾上腺皮质激素合成酶的表达,以促进药源性虚证小鼠肾上腺皮质功能恢复.