目的:探讨蛇菰多糖对人肺鳞癌NCI-H520细胞增殖和迁移的影响及作用机制。方法:本研究为实验研究。运用不同浓度蛇菰多糖(0、25、50、75、100、125 mg/L)处理肺鳞癌NCI-H520细胞26 h，CCK-8法分析不同浓度的蛇菰多糖对NCI-H520细胞活力的影响。取对数生长期的NCI-H520细胞分为对照组和蛇菰多糖组(125 mg/L)，克隆形成实验、划痕实验分别比较2组NCI-H520细胞增殖和迁移能力，通过蛋白质印迹法比较2组NCI-H520细胞增殖相关蛋白(CDK4、Cyclin D3、Cyclin D2)和迁移相关蛋白(Fibronectin、α-SMA)表达。定量反转录PCR(qRT-PCR)比较2组RP11-1212A22.4、miR-146a-5p的表达。运用TCGA数据库评估RP11-1212A22.4在肺鳞癌组织中的表达。LncRNASNP软件预测RP11-1212A22.4和miR-146a-5p之间的结合位点。采用Pearson法分析TCGA数据库肺鳞癌组织中miR-146a-5p与RP11-1212A22.4表达的相关性。将NCI-H520细胞分为4组：共转染miR-NC和WT-RP11-1212A22.4组、共转染miR-146a-5p和WT-RP11-1212A22.4组、共转染miR-NC和MUT-RP11-1212A22.4组、共转染miR-146a-5p和MUT-RP11-1212A22.4组。双荧光素酶报告基因实验验证4组RP11-1212A22.4和miR-146a-5p的靶向结合。结果:不同浓度的蛇菰多糖对NCI-H520细胞增殖抑制率差异有统计学意义( F＝63.41， P<0.001)。与0 mg/L剂量相比，蛇菰多糖25、50、75、100、125 mg/L剂量作用下的肺鳞癌NCI-H520细胞增殖抑制率均上升(均 P<0.01)。与对照组相比，蛇菰多糖组NCI-H520细胞克隆形成能力[(106.80±14.42)个比(39.66±8.69)个； t＝3.99， P＝0.007]和迁移能力[(43.16%±3.38%)比(12.26%±3.55%)； t＝6.31， P＝0.001]被抑制。与对照组相比，蛇菰多糖组NCI-H520细胞中增殖相关蛋白(CDK4、Cyclin D3、Cyclin D2)和迁移相关蛋白(Fibronectin、α-SMA)表达均下降(均 P<0.01)。与对照组相比，蛇菰多糖组NCI-H520细胞中RP11-1212A22.4的表达升高[(1.06±0.36)比(7.08±0.29)； t＝12.96， P<0.001]。TCGA数据库分析显示，肺鳞癌组织中RP11-1212A22.4表达低于癌旁组织[(5.61±0.81)比(7.21±0.74)； t＝23.12， P＝0.001]。LncRNASNP预测显示，RP11-1212A22.4基因序列与miR-146a-5p存在特异的结合区域，评分最高为0.99。与共转染miR-NC和WT-RP11-1212A22.4组相比，共转染miR-146a-5p和WT-RP11-1212A22.4组的NCI-H520细胞荧光活性降低[(0.99±0.12)比(0.26±0.06)； t＝5.56， P＝0.001]；共转染miR-NC和MUT-RP11-1212A22.4组与共转染miR-146a-5p和MUT-RP11-1212A22.4组荧光活性差异无统计学意义[(0.97±0.05)比(1.00±0.07)； t＝0.26， P＝0.804]。miR-146a-5p与RP11-1212A22.4的表达呈负相关( r＝－0.82， P<0.01)。与对照组相比，蛇菰多糖组miR-146a-5p的表达降低[(5.42±0.77)比(1.01±0.36)； t＝5.20， P＝0.002]。 结论:蛇菰多糖具有抑制肺鳞癌NCI-H520细胞增殖和迁移的作用，其分子机制可能与蛇菰多糖调控RP11-1212A22.4/miR-146a-5p通路有关。

目的 探讨蛇菰多糖(BPS)对实验性糖尿病大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、鸢尾素及糖脂代谢的影响及机制.方法 雄性SD大鼠饲喂高脂饲料(在普通饲料中添加猪油10％、鸡蛋5％和胆固醇2.5％)4周后,一次性ip给予链脲佐菌素(STZ) 40 mg· kg-1,1周后测定空腹血糖(FBG),FBG≥7.8 mmol·L-1确认模型成功.模型大鼠ig给予BPS 200 mg·kg-1,持续4周后,处死大鼠.取肝组织冰冻切片进行苏丹Ⅲ染色,观察脂肪变性程度;检测血糖、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和血清鸢尾素含量及肝超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化;Western蛋白印迹法测定肝组织PPARγ蛋白表达.结果 与正常对照组比较,模型组大鼠体质量增加幅度降低(P＜0.01),肝指数增加(P＜0.01),肝细胞内可见大量脂滴,并出现了不同程度的炎症细胞浸润,血清TG,TC和LDL-C水平明显升高(P＜0.01),HDL-C显著降低;肝组织SOD活性降低,MDA含量增加(P＜0.01);血清鸢尾素水平降低(P＜0.01);肝组织中PPARγ蛋白表达减少(P＜0.01).与模型组比较,BPS治疗组大鼠体质量增加幅度明显增加(P＜0.01),大鼠肝脂肪变性和炎症程度明显改善,血清TG,和LDL-C水平明显降低,HDL-C显著升高(P＜0.05);肝组织SOD活性升高,MDA含量减少(P＜0.05);血清鸢尾素水平升高(P＜0.05);肝组织中PPARγ蛋白表达增加(P＜0.05).结论 BPS能明显降低STZ致糖尿病大鼠的血糖水平,增强抗氧化能力,改善血脂代谢异常,提升鸢尾素水平并增强肝组织PPARγ的表达.

目的 研究筒鞘蛇菰Balanophora involucrate全植株的化学成分.方法 利用聚酰胺,正、反相硅胶柱,MCI及半制备型HPLC等进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定化合物的结构,并以脂多糖(LPS)诱导小鼠单核-巨噬细胞(RAW264.7)建立细胞炎症模型,分别采用Griess法和酶联法检测一氧化氮(NO)和白细胞介素-6(IL-6)以评价化合物的抗炎活性.结果 从简鞘蛇菰全植株75％乙醇提取物分离得到11个木脂素类化合物,分别鉴定为(+)-松脂素(1)、(+)-5'-hydroxypinoresinol(2)、异落叶松脂醇4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、(+)-异落叶松脂素(4)、burselignan(5)、(+)-9-acetoxyisolariciresinol (6)、yunnanensin A(7)、(-)-开环异落叶松脂素4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、(-)-开环异落叶松脂素(9)、二氢荜澄茄素(10)、secoisolariciresinol-9'-acetate(11).结论 化合物11为新的天然产物,化合物2、5、7、8、10首次从该属植物中分离得到.所有化合物均表现出较强的抗炎活性.

利用MCI gel CHP-20、ODS、Sephadex LH-20、硅胶及半制备高效液相等多种色谱技术,从皂角刺乙酸乙酯部位分离得到7个木脂素类化合物,并根据波谱数据分析鉴定其结构,分别为(7R,8S,7'E,7"S,8"R)-buddlenolP(l)、(+)-丁香脂素(2)、(+)-异落叶松脂素(3)、(7S,8R)-cedrusin(4)、(7S,8R)-4,9,9'-三羟基-3,3'-二甲氧基-7,8-二氢苯骈呋喃-1'-丙基新木脂素(5)、3',4-0-dimethylcedrusin(6)和蛇菰宁(7).其中化合物1为新化合物,命名为(7R,8S,7'E,7"S,8"R)-buddlenolP,化合物2?7为首次从皂荚属中分离得到.采用MTT法探究化合物2?7对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤的干预作用,化合物2、3和7对LPS诱导的NRK-52e细胞损伤具有保护作用.

目的 研究菊科植物苍耳(Xanthium sibiricum Patrin ex Widder)的干燥成熟带总苞的果实(苍耳子)中苯丙素类化学成分.方法 采用正相硅胶柱色谱、反相十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)柱色谱、Sephadex LH-20 凝胶柱色谱和半制备高效液相色谱(HPLC)等色谱方法进行分离纯化,并结合高分辨质谱(HR-ESI-MS)、核磁共振(NMR)对分离得到的化合物进行结构鉴定.采用脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞RAW 264.7 为筛选模型评价分离得到化合物的抗炎活性.结果 从苍耳子体积分数95％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物中分离并鉴定了 24个苯丙素类化合物,分别为c-藜芦酰乙二醇(1)、3,4'-二羟基-3'-甲氧基苯丙酮(2)、阿魏醛(3)、丁 香脂素(4)、蛇菰宁(5)、落叶松脂醇(6)、愈创木基甘油(7)、3-hydroxy-l-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-1-propanone(8)、salicifoliol(9)、6-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3,7-dioxabicyclo[3.3.0]octan-2-ol(10)、榕醛(11)、jatrointelignan D(12)、icariol A2(13)、异落叶松脂素(14)、ehletianol C(15)、(7R,7'R,7"S,7(")S,8S,8'S,8"S,8(")S)-4",4(")-dihydroxy-3,3',3",3("),5,5'-hexamethoxy-7,9';7',9-diepoxy-4,8";4',8(")-bisoxy-8,8'-dineolignan-7",7("),9",9(")-tetraol(16)、(7R,7'R,7"R,7(")S,8S,8'S,8"S,8(")S)-4",4"-dihydroxy-3,3',3",3("),5,5'-hexamethoxy-7,9';7',9-diepoxy-4,8";4',8(")-bisoxy-8,8'-dineolignan-7",7("),9",9(")-tetraol(17)、2-(4-hy-droxy-3-methoxyphenyl)-1-(4-hydroxyphenyl)-propan-1,3-diol(18)、2,3-bis-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-methoxypropanol(19)、楝叶吴萸素 B(20)、threo-guaiacylglycerol-8-vanillin ether(21)、erythro-guaiacylglycerol-8-vanillin ether(22)、黄花菜木脂素 B(23)和27-对香豆酰氧基熊果酸(24).结论 化合物6～24 为首次从苍耳中分离得到.对分离得到的24 个化合物进行抗炎活性筛选,其中,化合物 14、21 和23具有抗炎活性,其 IC50值分别为(28.14±1.89),(16.78±0.68)和(38.42±2.15)μmol·L-1.

目的:探讨筒鞘蛇菰提取物蛇菰多糖(BIH)对D-半乳糖(D-gal)致大鼠肝损伤的保护作用及机制.方法:雄性SD大鼠60只,随机分为正常组(Con)、模型组(D-gal)、蛇菰多糖低剂量组(D-gal+50 mg/kg BIH,BIH-L)、蛇菰多糖中剂量组(D-gal+100 mg/kg BIH,BIH-M)、蛇菰多糖高剂量组(D-gal+200 mg/kg BIH,BIH-H),每组12只.除正常组外,其余各组大鼠每天颈背部皮下注射100 mg/kg的D-gal,正常组大鼠每天颈背部皮下注射相同剂量生理盐水;蛇菰多糖各剂量组每天用相应浓度灌胃,正常组和模型组给予等剂量的生理盐水灌胃,共42 d.自动生化分析仪检测血清ALT、AST、DBIL;HE染色检测肝组织的形态学变化;免疫组织化学检测肝细胞凋亡情况,WB检测Caspase-3、Bax、Bcl-2的蛋白表达;用硫代巴比妥酸法测定MDA含量,用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性.结果:与正常组比,模型组大鼠血清ALT和AST、DBIL水平显著升高(P＜0.01);蛇菰多糖处理组ALT、AST、DBIL水平显著低于模型组(P＜0.01);模型组肝细胞凋亡比正常明显增多(P＜0.01),BIH组肝细胞凋亡比模型组明显减少(P＜0.05);模型组Caspase-3、Bax蛋白表达水平和MDA含量比正常组明显升高(P＜0.01),BIH组比模型组明显降低;而BIH组的Bcl-2表达,SOD活性比模型组明显升高(P＜0.05或P＜0.01),BIH不同剂量组之间比较,以中剂量效果最好.结论:蛇菰多糖对肝损伤有保护作用,且其作用机制可能与其降低肝细胞凋亡,抑制肝组织氧化应激发生有关.

目的 蛇菰多糖(BPS)对D-半乳糖(D-gal)所致实验性肝损伤大鼠的肝功能及肝组织内BDNF、TrkB蛋白和凋亡相关蛋白表达的影响.方法 将大鼠随机分为对照组(control),D-gal组(皮下注射D-半乳糖200 mg/kg),BPS低(D-gal+BPS-L)、中(D-gal+BPS-M)、高(D-gal+BPS-H)剂量组,分别每天灌胃50、100和200 mg/kg BPS,共6周.心脏取血检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平;HE染色法观察肝组织形态;免疫组织化学染色检测BDNF和TrkB的定位;Western blot检测BDNF、TrkB、Bcl-2、caspase-3和Bax蛋白表达;ELISA测定肝组织内丙醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 与对照组相比,D-gal组肝细胞水肿、点状坏死;血清ALT和AST水平升高(P<0.05),SOD活性降低、MDA含量升高(P<0.05);Bax、caspase-3、BDNF、TrkB表达增加(P<0.05),Bcl-2表达降低(P<0.05);与D-gal组相比,BPS各剂量组肝细胞变性、坏死明显减轻;血清ALT和AST水平降低(P<0.05);SOD活性升高、MDA含量降低(P<0.05);促凋亡蛋白Bax和caspase-3表达降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达增加(P<0.05);BDNF和TrkB的表达降低(P<0.05).结论 BPS对D-gal所致实验性肝损伤有一定的保护作用,其机制可能与降低肝组织内BDNF和TrkB的表达、减轻肝细胞凋亡有关.

目的 探讨蛇菰多糖(BPS)对神经自噬的调节及对急性脊髓挫伤(SCI)的治疗作用.方法 将大鼠分为假手术组(sham,n=10)、模型组(SCI,n=15,用改良Allen's脊髓撞击法)和BPS干预组(BPS,n=45,灌胃给予低、中、高3个剂量14 d);用BBB评分评价运动功能;采用HE及Nissl染色法观察形态;蛋白质免疫印迹法检测自噬相关蛋白的表达变化.结果 与sham组相比,SCI组大鼠的BBB评分-时间变化曲线明显降低,损伤程度达重度(P<0.05);SCI的脊髓背侧白质和中央灰质均损伤严重,空洞明显;神经元数量明显减少,胞体结构不完整;SCI组第1、7、14天的LC3Ⅱ/Ⅰ和p62相对表达水平上调,其中第7天表达最高(P<0.05);而Beclin 1表达整体下调,于第7天表达最低(P<0.05);与SCI组比较,BPS组大鼠BBB评分曲线呈剂量依赖性明显增高;BPS组背侧白质和中央灰质空洞缩小,神经元数量多,形态完整;BPS组Beclin 1、LC3Ⅱ表达明显回升,而p62蛋白较SCI组下调(P<0.05).结论 蛇菰多糖对大鼠具有明确的神经保护作用,其作用机制可能与保护损伤的神经细胞有关.

目的 研究蛇菰多糖(balanophora polysaccharide,BPS)对大鼠乙酸所致胃溃疡(gastric ulcer,GU)的治疗效果,并探讨其作用机制.方法 60只 ♂SD大鼠随机分为假手术组,GU模型组,奥美拉唑阳性组(3.6 mg·kg-1),BPS低、中、高剂量治疗组(100、200、400 mg·kg-1).用乙酸烧灼法制备GU模型,肉眼结合HE染色观察溃疡组织形态和病理变化,测量并计算各组溃疡面积和抑制率;酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;免疫组化法和Western blot检测表皮生长因子(EGF)和表皮生长因子受体(EGFR)的表达水平.结果 与假手术组比较,模型组大鼠可见明显溃疡损伤;与模型组比较,BPS治疗组溃疡面积明显减小,SOD和GSH-PX活力升高,EGF和EGFR表达水平升高,MDA、TNF-α和IL-6含量明显降低.结论 BPS对大鼠GU具有治疗作用,其作用机制可能与抑制氧化应激,抑制炎症刺激,促进胃黏膜再生修复有关.

目的 基于网络药理学探讨并分析筒鞘蛇菰(B alanophora involucrata Hook.f.,BIH)治疗肝损伤的作用及分子机制,并通过大鼠体内实验验证相关预测靶点及筒鞘蛇菰提取物-蛇菰多糖(Polysaccharides of Balanophora involucrataHook.f.,BPS)对实验性肝损伤的保护作用.方法 化学专业数据库、TCMID和TCMSP平台检索筒鞘蛇菰组成的化合物及可能靶点,以肝损伤为关键词检索GeneCards和网站,获得相关靶点,绘制Venn图,选交集靶点,将"化合物-靶点和疾病-靶点"关系导入Cytoscape V3.7.2软件,获得化合物-靶点-疾病的三重网络,对化合物及相关靶点蛋白行分子对接,并用交集靶点绘制蛋白互作网络图及进行GO生物功能和KEGG信号途径富集分析.结果 筒鞘蛇菰主要成分有11个化合物,其中与肝损伤有37个交集靶点,高度关联靶点包括NOS3、ESR1、TNF、MAOA、PTGS2、IL10等,GO和KEGG富集分析发现筒鞘蛇菰治疗肝损伤的分子机制,可能与调节肾上腺素能信号通路、cGMP-PKG信号及神经活性配体-受体交互通路等有关,而且ADRA1B、ADRA2A、ADRA2C、ADRB1/2等基因高度富集于这些通路中.动物体内实验发现BPS灌胃处理可减轻肝组织损伤、调控血清炎症因子肿瘤坏死因子α(Tumor necrosisfactor,TNF-α)和白细胞介素 10(IL-10)水平、提高抗氧化酶超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,并增强肝组织内氧化应激相关蛋白核因子E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,NRF2)和醌NADH脱氢酶1(NQO1)的表达,从而抑制大鼠体内氧化应激损伤、减轻炎症反应和细胞凋亡,达到保护实验性肝损伤的作用.结论 本研究初步确定筒鞘蛇菰治疗肝损伤的有效成分、"化合物-蛋白-靶点"关联网络及发挥作用的分子机制,并通过动物体内实验证实蛇菰多糖保护肝损伤的机制与上调NRF2/NQO1通路来减轻氧化应激反应性损伤、减轻肝细胞凋亡有关.